羊布鲁氏菌疫苗（S2 株）口服免疫试验

2020-06-08宗曼合郑永波杨小虎

中国动物检疫 2020年6期

薛萍，宗曼合，郑永波，杨小虎，杨程

（1.平凉市动物疫病预防控制中心，甘肃平凉 744000；2.平凉市崆峒区香莲乡畜牧兽医站，甘肃平凉 744000）

布鲁氏菌病（brucellosis，以下简称布病）是由布鲁氏菌（Brucella）引起的一种人兽共患变态反应性传染病[1]。布鲁氏菌属有6 个种，其中羊种布鲁氏菌侵入性最强[2]，主要侵害宿主的生殖系统和关节等器官，也是引起人感染的主要菌型。布病全球流行给畜牧业生产和人类健康带来极大危害[3]，因此我国将其列为二类动物传染病，并列入《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》重点防控疫病目录[4]。该病主要经消化道、皮肤黏膜和呼吸道等途径侵入机体而发病，引起生殖系统、神经系统和骨骼系统的严重损害[5]。

目前，我国对布病实施分区防控策略。《2009－2015 年布鲁氏菌病结核病防治规划大纲》要求，在布病未控制区（疫区）实施以免疫为主的防控措施。目前，我国使用的布鲁氏菌疫苗主要有M5、Rev-1、S19、S2 毒株，均为弱毒疫苗。M5、Rev-1、S19 毒株优点是免疫期长、抗体反应强烈，其中M5 有效免疫期长达5 年，Rev-1、S19 毒株可达3 年，但缺点是免疫方式要求较高，须注射或点眼免疫，操作复杂，不适合大批量同时免疫，且存在较高的工作人员感染风险，对孕畜也不安全。而S2 毒株活疫苗口服免疫，简单方便，有助于提高免疫密度，虽然抗体反应弱，但通过加大免疫剂量或加强免疫，也可提高免疫保护率[6]。

近年来，甘肃省平凉市布病疫情比较平稳，但偶有反弹势头。为保障人民群众身体健康和养羊业持续发展，该市决定在全市布病流行较为严重的县（区），对易感羊只采用布氏菌病活疫苗S2 株口服免疫。为充分了解该疫苗整群口服免疫的安全性和免疫效果，在免疫工作全面开展前，选择了2个行政村开展了小范围免疫试验。

1 材料

1.1 试验动物

在平凉市华亭县策底镇、崆峒区崆峒镇，各选1 个行政村，以所选2 个行政村散养户饲养的264 只未免疫羊作为试验羊，进行布鲁氏菌（S2 株）活疫苗口服免疫试验。所有试验羊只在口服免疫试验前，采集血清，用虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行检测，全部为阴性。

1.2 疫苗与试剂

试验用布鲁氏菌S2 株活疫苗（批号5393060），购自金宇保灵生物药品有限公司。布病虎红平板凝集试验（RBT）抗原（批号201603）、试管凝集试验（SAT）抗原（批号201603）、酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（批号201608），均购自哈药集团生物疫苗有限公司。

2 方法

2.1 试验分组与免疫

按照Ding 等[7]介绍的方法进行试验分组与口服免疫，用专用投药枪进行灌服。将264 只羊，按月龄不同分为2 组（表1）：3 月龄以上组（包括怀孕母羊），在疫苗使用说明书使用剂量基础上，加倍剂量灌服免疫，即每只口服活菌100×2 亿，用生理盐水稀释至4 mL；3 月龄及以下组，按说明书正常剂量免疫，即每只口服活菌100 亿，用生理盐水稀释至2 mL。

表1 试验羊只分组单位：只

2.2 临床观察与抗体检测

对264 只试验羊口服免疫布鲁氏菌活疫苗后进行连续临床观察，记录免疫羊只出现的不良反应；分别在免疫30、60、180、210 d 后，采集羊血，分离血清并详细编号登记，同时采用RBT+SAT垂直检测和 ELISA 检测方法，进行免疫抗体跟踪检测，然后对两种检测结果进行比较分析。RBT+SAT 垂直检测，即先用RBT 初检，阳性的再用SAT 复检，全为阳性的判定为阳性。

3 结果与分析

3.1 临床观察

2 个试验组，即3 月龄以上（包括怀孕羊只）和3 月龄及以下羊只，采用布鲁氏菌S2 株活疫苗口服免疫后，均未出现不良反应。

3.2 免疫抗体检测

3.2.1 总体情况检测结果（表2）显示：布鲁氏菌S2 株活疫苗口服免疫30 d 后，试验羊只2 种检测方法检测的免疫抗体阳性率分别为47.3%和53.8%，随免疫天数增加，抗体阳性率不断递减，至210 d 时，免疫抗体阳性率分别降至1.5%和2.3%，免疫抗体几乎消失。

表2 免疫后不同时间、不同方法抗体水平检测结果

3.2.2 分组情况 2 组试验羊的检测结果（表3～4）显示，3 月龄以上羊只不同免疫时间2 种检测方法的免疫抗体阳性率均略高于3 月龄及以下羊只；对2 种检测方法的检测结果进行单因素方差分析，发现差异不显著（P＞0.05）。

表3 3 月龄以上羊免疫后不同时间、不同方法检测结果统计

表4 3 月龄及以下羊免疫后不同时间、不同方法检测结果统计

4 讨论

布鲁氏菌弱毒活疫苗S2 株为光滑型菌株，存在相应的缺陷，易诱导产生S-LPS 抗原“O”链特异性抗体，免疫后无法鉴别人工免疫群和自然野毒感染群[8-9]，从而干扰常规诊断结果，给临床确诊造成一定困难。

本试验免疫30 d 后检测到的平均抗体阳性率为47.3%（RBT+SAT）和53.8%（ELISA），与赵咏中等[10]口服正常剂量得到的最高免疫抗体阳性率基本一致。布鲁氏菌弱毒疫苗S2 株抗体反应较弱，因而需加强免疫。考虑到羊群弱毒疫苗免疫会产生免疫人员感染风险，且补免不仅会加大工作量，也会加大感染风险，为确保免疫效果，本试验对3月龄以上羊只在常规免疫剂量基础上加倍免疫，同时为保证免疫羊群的安全性，对3 月龄及以下羊只采用常规剂量免疫。试验结果表明，2 组试验羊只均产生了理想的抗体阳性率，且均未发生不良反应，加倍剂量试验组免疫抗体略高于常规剂量免疫组，证明该疫苗试验剂量对所有月龄羊只包括怀孕羊都是安全有效的。这与樊生平等[11]和申捷等[12]的研究结果一致。该试验因所在单位无妊娠诊断设备，所以在试验分组时未统计怀孕羊只数量，但可以确定试验羊只中存在一定数量的怀孕母羊，所以说布鲁氏菌S2 株弱毒苗加倍剂量口服免疫，对怀孕羊只也是安全的。总之，在试验剂量下，用布鲁氏菌活疫苗S2 株口服免疫1 次，即可产生理想的免疫效果，从而降低了免疫工作量和人员感染风险。

本试验发现，免疫180 d 后仍有5.7%和7.2的羊只为抗体阳性，免疫210 d 后仍有1.5%和2.5%为抗体阳性，而此时的抗体阳性是感染阳性还是免疫阳性，需进一步探讨。

RBT 敏感性较高，但特异性低，易受试验温度、凝集时间和检测人员主观因素的影响，只能作为初筛；SAT 是国标确诊方法，但该方法操作繁琐、费时，不适于现场检测，其判定也受主观因素影响。OIE 规定ELISA 为布病的国际贸易确诊方法。该方法敏感性和特异性均好，检测时间比试管凝集更短，适于大批量检测，由于操作步骤相对简单，因而减少了人为因素干扰，易标准化和质量控制[13]。但相比前两种方法，ELISA 检测成本较高。这几种检测方法都有各自的局限性，其敏感性和特异性会因样本量的不同而有所差异[14-16]。

本试验只是小范围的免疫试验，而免疫效果和安全性受多种因素影响，因此需要开展S2 疫苗口服免疫的大规模田间试验。不同地区可根据本地实际，先进行小范围试点，然后逐步推广使用。