3 种布鲁氏菌疫苗不同接种方式的安全性和免疫效果评估

安尼瓦尔，多里坤，张 斐，达列力，地力夏提，王 强，马力克，马建文，李万荣，吕春华，叶尔肯，沙依兰别克，林汉亮

（1.新疆维吾尔自治区动物疾病预防与控制中心，新疆乌鲁木齐 830011；2.昌吉州动物疫病预防与控制中心，新疆昌吉 831100；3.昌吉市动物疫病预防与控制中心，新疆昌吉 831100；4.阿勒泰地区动物疫病预防控制中心，新疆阿勒泰 836500；5.福海县畜牧兽医站，新疆福海 836400）

布鲁氏菌病（以下简称布病）是呈全世界分布的人兽共患病，报告发生过布病的国家和地区已有170 余个[1]。据世界卫生组织统计，全世界每年的人间新发布病病例达50 万例[2]。人畜间布病的流行和传播，给全世界构成了严重的公共卫生威胁，对畜牧业健康发展和畜产品流通造成了严重阻碍[3]。

20 世纪90 年代中期以来，我国人畜间布病疫情呈持续回升蔓延之势[4]，人间年新发病例达5 万余例[5]。2012 年，国家颁布了《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020 年）》和《国家布鲁氏菌病防治计划（2016—2020 年）》，根据各省人畜间布病流行程度，进行了区域划分，对划分为一类的省份（重度流行区），实行以疫苗免疫为主的综合防控措施。

新疆被划分为布病一类地区。为确保全区布病免疫工作的顺利开展，经原自治区畜牧厅兽医局批准，自治区动物卫生监督所按照《2016 年布病与包虫病疫苗免疫效果及安全性试点调查实施方案》的要求，于2016 年4—12 月在昌吉回族自治州昌吉市和阿勒泰地区福海县，选择分别代表农区和牧区两种饲养管理模式的场（群）以及3 个疫苗厂家，联合开展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比对试验。

1 材料和方法

1.1 选用疫苗

A 厂家：REV-1 布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗；B 厂家：A19 布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗；C 厂家：M5 布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗、A19 布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗。

1.2 调查地点

农区调查点：昌吉回族自治州昌吉市某规模场；牧区调查点：阿勒泰地区福海县牛羊规模场各2 个。

1.3 试验分组

根据调查点、疫苗厂家、接种方式、动物种类，将试验动物分为10 组，其中：牛20 头2 组，40 头2 组，共4 组；羊30 只4 组，60 只2 组，共6组。羊免疫REV-1和M5疫苗，牛免疫A19（A厂）、M5、A19（C 厂）疫苗（表1）。

表1 试验动物分组设计

1.4 健康状况观察和基础抗体水平检测

1.4.1 健康状况观察 接种疫苗前，对试验动物健康状况进行询问调查和现场临床观察；接种疫苗后，对试验动物连续观察48 h。

1.4.2 基础抗体水平检测 接种疫苗前，对所有试验动物采血，分离血清，采用布病虎红平板凝集试验（RBPT）进行抗体检测。

1.5 免疫后抗体检测和阳转率计算

1.5.1 抗体检测 分别于接种疫苗后30、90、180、240 d 采集血清样品，按照《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646—2018）规定的方法进行抗体检测。先采用虎红平板凝集试验（RBPT）进行初筛，检测为阳性的，再用试管凝集试验（SAT）进行确诊，SAT 滴度达到1:50 以上的，判定为阳性[6]。

1.5.2 阳转率计算 阳转率=确诊为阳性的样本数/被检测样本总数×100%。

2 结果

2.1 临床健康状况

通过询问及现场观察，确定试验组牛羊在接种疫苗前及接种疫苗后48 h 内，均未见不良反应。

2.2 试验动物基础抗体水平

RBPT 检测显示，在所有试验动物中，第10组的1 头牛及第4 组的2 头牛为阳性，说明这3头牛接种疫苗前已感染布鲁氏菌，故将其从后续试验中剔除。

2.3 试验动物阳转率

2.3.1 农区试验动物组 分别接种A、B、C 3 个厂家的疫苗，试验动物抗体阳转率消长曲线见图1。接种疫苗后30 d，试验动物阳转率均达到85%以上，其中B 厂家的A19 疫苗（牛）阳转率最高为100%，其次为C 厂家的M5 疫苗（羊），点眼和皮下注射的阳转率均为93.33%，阳转率最低的是A 厂家的REV-1 疫苗（羊），为85.19%。接种疫苗后90 d，B 厂家的A19 疫苗（牛）阳转率降低幅度最小，从100%降至76.90%；C 厂家的M5疫苗（羊），点眼比皮下注射接种的阳转率下降幅度多9.50%；A 厂家的REV-1 疫苗（羊）阳转率下降幅度最大，下降83.34%。接种疫苗后180 d，B 厂家的A19 疫苗（牛）阳转率下降至13.51%，比90 d时下降了63.39%，下降幅度最大；C 厂家的M5疫苗（羊），点眼和皮下注射接种阳转率均比90 d时略有升高；A 厂家的REV-1 疫苗（羊）阳转率没有变化。接种疫苗后240 d，试验动物阳转率均低于10%，其中A 厂家的REV-1 疫苗（羊）阳转率为0，无法为动物提供任何抗体保护。

图1 农区动物抗体阳转率消长曲线

2.3.2 牧区试验动物组 分别接种A、B、C 3 个厂家的疫苗，试验动物抗体阳转率消长曲线见图2。接种疫苗后30 d，试验动物阳转率均高于85%，其中：B 厂家A19 疫苗（牛）和C 厂家M5 疫苗（羊）阳转率均达到100%；C 厂家M5 疫苗（羊）阳转率（96.60%）略大于C 厂家M5 疫苗（牛）的阳转率（95.00%）和A 厂家REV-1 疫苗（羊）的阳转率（93.33%）；C 厂家A19 疫苗（牛）的阳转率最低，为85.00%。接种疫苗后90 d，A 厂家REV-1 疫苗（羊）阳转率下降幅度最大，下降83.33%；C 厂家A19 疫苗（牛）阳转率下降幅度最小，下降25.00%。接种疫苗后180 d，各组试验动物阳转率明显下降，均低于50%，其中C 厂家M5 疫苗（牛）阳转率下降至0。接种疫苗后240 d，各组试验动物阳转率持续下降。

图2 牧区动物抗体阳转率消长曲线

2.3.3 不同动物、不同接种方式比较 汇总农区、牧区10 组试验动物接种疫苗后30、90、180、240 d阳转率情况见表2。对羊阳转率来说，C 厂家M5疫苗皮下注射＞C 厂家M5 疫苗点眼＞A 厂家的REV-1 疫苗点眼，说明C 厂家M5 疫苗皮下注射方式效果最好。对牛阳转率来说，接种疫苗30 d时，B 厂家A19 疫苗皮下注射＞C 厂家M5 疫苗皮下注射＞C 厂家A19 疫苗皮下注射；90 d 时，B厂家A19 疫苗皮下注射＞C 厂家A19 疫苗皮下注射＞C 厂家M5 疫苗皮下注射；180 和240 d 时，C 厂家A19 疫苗皮下注射＞B 厂家A19 疫苗皮下注射＞C 厂家M5 疫苗皮下注射。因此，30 d 时，B 厂家的A19 疫苗对牛免疫效果最好，90～240 d 时，则C 厂家的A19 疫苗对牛免疫效果最好。

3 讨论

新疆作为布病一类地区（重度流行区），在实行以疫苗免疫为主的综合防控措施时，选取适合新疆实际的布病疫苗至关重要。此次试验按照《2016年布病与包虫病疫苗免疫效果及安全性试点调查实施方案》联合3 家布病疫苗生产厂家，分别在农区和牧区开展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比对试验，掌握了3 种疫苗在不同饲养方式、不同畜种、不同接种方式下的安全性和有效性的第一手材料，为科学选取适合新疆地区的布病疫苗提供了参考，从而为全区布病免疫工作的全面顺利开展奠定了基础。

在此次对比试验中，免疫3 个厂家的布病疫苗后，未见免疫牛羊出现不良反应，说明3 个厂家的布病疫苗是安全的。

接种布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗后，绝大多数被接种家畜在抗原刺激下，逐渐产生抗体[7]。农区和牧区两种饲养方式下的牛羊，在接种布病疫苗后，随着时间的推移，阳转率变化趋势基本一致，30 d最高，随后逐渐降低，至240 d 时大多接近0，说明饲养方式对布病疫苗阳转率几乎没有影响。

此次试验发现，皮下注射接种方式下的两种疫苗转阳率在30、90、180、240 d 时，大多高于点眼方式，说明皮下注射接种能更好地刺激动物机体的免疫应答，从而产生更多的抗体，抗体持续时间更长。总体来看，接种疫苗后30 d 是评价布病免疫效果的最佳时期。

本研究也存在一些不足，如在评估3 种布病疫苗的安全性时，仅关注了疫苗接种后的临床反应，但对牛羊身体机能、生产性能的影响未进行评估。同时，仅关注了被接种牛羊的安全性，未对接种疫苗的基层防疫员健康状况进行跟踪评估。另外，对于牧区来说，放牧时无法避免不同畜群的混群和接触，因而无法完全排除野毒感染使试验动物阳转率变高的可能性。

表2 3 个厂家布病疫苗试验动物阳转率汇总 %

4 结论

研究发现：3 个厂家生产的布病疫苗安全性较高，不同免疫方式都可使农区或牧区牛羊产生较好的免疫效果，但皮下注射方式效果更佳；牛羊免疫后30 d 即可产生较高的免疫抗体，此时是最佳的免疫效果评价期。