超高效液相色谱-质谱联用法测定沉香中白木香酸含量

黎嘉茗，黄国凯，李 华

(广东省药品检验所，广东 广州 510663)

沉香是一种名贵中药，味辛、苦，性温，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效。其商品主要为国产沉香(瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材[1])和进口沉香(瑞香科植物沉香AquilarlaagallochaRoxb.含有树脂的木材[2])。除药用外，沉香还常作为天然香料、工艺品原材料等用途，市场需求量较大。由于沉香结香条件苛刻，产量较低，野生资源已经基本枯竭，不能满足药用需求，目前药用沉香以人工结香为主。此外，流通领域中还充斥着以其他木材充伪或非法添加松香的沉香，严重影响了用药的安全和质量。

沉香主要化学成分包括倍半萜类化合物、色酮类化合物、芳香族类化合物、脂肪酸类化合物等。其中倍半萜类化合物[3]和2-(2-苯乙基)色酮[4]是其主要的药理活性成分。沉香药材现行法定质量标准[1]以浸出物含量作为其质量评价的重要指标，据研究表明，沉香的浸出物含量与其特征性成分-白木香酸的含量呈正相关[5]，白木香酸的有无及含量的高低，能够反映沉香样品的品种真伪及质量优劣。本文建立了沉香中白木香酸的UPLC-Q-TOF定量检测方法，对全国药品流通领域中的69批沉香样品进行测定，为完善沉香的质量标准提供了基础数据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 6540 超高分辨率精确质量四级杆-飞行时间质谱仪(Agilent 1290超高效液相色谱系统，美国)；Milli-Q超纯水机；KQ-300DE型超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)；XS205电子天平(Mettler Toledo)。

1.2 试药

沉香药材69批，从全国XX省份的零售药店，饮片生产企业和中药制剂生产企业中收集，样品信息见表1。白木香酸对照品由广东药科大学高晓霞副教授提供，经HPLC面积归一化法计算，质量分数为87.83%；乙腈(色谱纯，美国Honeywell公司)，LCMS级甲酸(Fluka公司)，甲醇(分析纯，广州化学试剂厂)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

表1 沉香样品信息

续表1

编号收集地品种鉴定浸出物含量(%)白木香酸含量(%)41浙江合格品10.60.0642浙江合格品10.80.0143安徽合格品11.60.3044青海非法添加21.10.0045安徽劣质品7.50.0146天津合格品15.60.0547天津合格品12.40.0848湖北劣质品10.10.0949安徽合格品12.50.1150天津合格品15.20.0551安徽合格品25.20.0552安徽合格品26.10.0853河南非法添加20.40.1554安徽合格品10.90.0955安徽劣质品9.70.0056安徽合格品26.20.0257四川劣质品10.30.0858安徽合格品10.70.0159江苏合格品12.60.0360安徽非法添加19.80.0061贵州劣质品6.70.0462湖北合格品12.70.0663四川合格品13.20.0764山东劣质品11.20.0865广东合格品10.70.0366广东劣质品9.20.0467安徽非法添加23.70.0068安徽劣质品8.70.0069吉林合格品16.80.11

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilient Zorbax C18(100 mm×3.0 mm，1.8 μm)；流动相：乙腈(B)-0.1%甲酸水溶液(A)，梯度洗脱条件，0～6 min，40%B；6～6.5 min，40%～90%B；6.5～10 min，90%B。流速：0.35 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：2 μL。

2.2 质谱条件

电喷雾离子源(ESI)，正模离子扫描模式，干燥气流速为8.0L/min；干燥气稳定为350 ℃；雾化气压力为35psi；毛细管电压正离子模式4 000 V；锥孔电压：75V；碎裂电压：130V。Targeted扫描模式，Targeted分子离子为235.169 2 m/z。一级扫描范围100～1000 m/z，二级扫描范围50～300 m/z，碰撞能量：20 V；准确质量测定采用TFANH4、Purine、HP-0921、N/A的混合参比溶液，ESI+：m/z 121.050 873、922.009 798。

2.3 对照品溶液制备

精密称取白木香酸对照品适量，加甲醇制成浓度为0.188 μg·mL-1的对照品溶液。

2.4 供试品溶液制备

取沉香粉末(过40目筛)约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯10 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)90 min，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。置于分液漏斗中，取5%碳酸钠溶液振摇提取3次，每次10 mL，合并碳酸钠溶液。加入适量2 mol/L盐酸调节pH=9.0，置于分液漏斗中，取乙酸乙酯振摇萃取2次，每次20 mL，合并碳酸钠溶液。加入适量2 mol·L-1盐酸调节pH=1.0，取乙酸乙酯振摇萃取3次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液。置于80 ℃水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至1 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.5 方法专属性实验

碎裂电压为130 V，碰撞能量20 V。在优化条件下，对白木香酸对照品溶液进行分析。[M-H2O+H]+峰235.1692 m/z有最大响应，一级质谱如图1。二级质谱如图2所示，最大的两个碎片离子为149 m/z、217 m/z。以235.269 2 m/z为检测离子，149 m/z和217 m/z为辅助定性离子，对样品进行测定。正品(编号X)及伪品(编号X)一级EIC见图3、图4，正品可以检测出白木香酸，而伪品无法检测出白木香酸。

图1 白木香酸一级质谱

图2 白木香酸二级质谱

图3 沉香合格样品一级EIC

图4 沉香伪品一级EIC

2.6 方法学考察

2.6.1 精密度试验 精密吸取白木香酸对照品溶液，按照“2.2.2”项下色谱条件连续进样测定6次，白木香酸的平均峰面积为50 708.04，RSD为0.7%，表明仪器精密度良好。

2.6.2 重复性实验 取沉香样品(编号：2015A18501)，分别按照“2.2.4”项下方法制备供试品溶液6份，按照“2.2.2”项下色谱条件进样测定，白木香酸峰面积平均值为275 233.4，RSD为2.7%，表明方法重复性良好。

2.6.3 稳定性考察 精密吸取同一批沉香样品(编号：2015A18501)供试品溶液，按照“2.2.2”项下色谱条件分别在0、2、4、6、8、12 h进样，白木香酸峰面积平均值为277241，RSD为1.1%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 样品测定

分别取69批沉香样品，按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，依次进样测定，记录谱图，检测结果见表1。

3 讨论

69批沉香样品，按现行质量标准检验，44批为合格品，其白木香酸平均含量为0.21%。3批为伪品，均未检出白木香酸。22批为劣质沉香，有7批未检出白木香酸峰，经横切面显微观察，确认样品为不含(或含极少)树脂的白木香木材；其余15批劣质沉香的白木香酸平均含量为0.09%。

通过对比检验结果可知，白木香酸可作为沉香的专属性成分，其在一定程度上还能反映样品中树脂含量的多少，可作为评判沉香药材质量优劣的依据。