闽产厚朴叶的生药显微鉴定

曾礼芳，王海阁，汤七金，张晓俊，黄泽豪*

(1.福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122；2.福建省明溪县医院，福建 三明 365200)

厚朴为我国二级保护植物和二级保护中药材，在我国已有两千多年的药用历史，始载于《神农本草经》，列为中品[1-2]。《中国药典》2015年版收载本品为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮[3]。厚朴叶是药用植物厚朴的树叶，为大型叶，一般长20～45 cm，宽10～25 cm，分布于福建、浙江、广西、江西、湖南、湖北、四川、贵州、云南、陕西、甘肃等地[4]，闽产厚朴叶主要是指福建省天然分布和栽培的凹叶厚朴的叶片，据文献记载，厚朴叶主要含厚朴酚、和厚朴酚[5]、木脂素、黄酮、多糖[6]、挥发油[7]等化学成分，具有抗菌[7]、抗氧化[8]、舒张血管[9]等药理作用，但目前对于闽产厚朴叶的生药显微鉴定研究报道较少，因此本研究就其显微鉴定方面做深入研究，旨在为闽产厚朴叶的道地性鉴别提供依据，也为将来闽产厚朴叶的开发利用提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

厚朴叶采于福建省三明市明溪县胡坊镇福西村，经福建中医药大学中药鉴定教研室黄泽豪副教授鉴定为木兰科凹叶厚朴Magnoliaofficinalis的叶片。

1.2 仪器与试剂

生物显微镜(YS100日本尼康公司)；照相机(E0S 60D佳能公司)；连续变倍体视显微镜(JSZ4南京江南光电(集团)股份有限公司)；快速开盖万能高速粉碎机(DFY-C-500温岭市林大机械有限公司)；显微测量尺；显微拍摄器材等。

水合氯醛试液；浓盐酸；间苯三酚试液(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；蒸馏水。

2 实验方法

应用显微技术对厚朴的叶片进行显微分析，包括组织鉴定和粉末鉴定。组织鉴定是通过观察厚朴的切片鉴别其组织构造特征；粉末鉴定是通过观察厚朴的叶片、干品的粉末制片对其细胞分子及内含物的特征进行鉴定。

在此采用传统的徒手切片、表皮撕取等方法进行制片，分别对厚朴的叶进行显微鉴别观察；干品药材在进行打粉过筛后进行粉末制片观察。观察结果做好细胞大小、细胞后含物等测量及鉴别并及时拍照和做好数据记录。

实验中涉及的徒手切片、粉末制片两种制片方法，其具体如下：

(1)徒手制片：取新鲜厚朴的叶进行徒手切片，装片，必要时用水合氯醛进行透化处理，或加盐酸-间苯三酚试液进行染色，然后在显微镜下观察，此方法较为方便快捷。

(2)表面制片：用眼科镊子轻轻撕取叶的表面层置于载玻片的水或者水合氯醛试液内，加盖玻片，在显微镜下观察。

(3)粉末制片：取叶片药材粉末少许分别进行加蒸馏水的不透化处理和加水合氯醛的透化处理，并分别进行观察，必要时加盐酸-间苯三酚试液进行染色。

3 实验结果

3.1 叶横切面(过中脉)

叶横切面(过中脉)组织结构特征，见图1、图2。

注：1.上表皮；2.栅栏组织；3.海绵组织；4.下表皮；5.非腺毛

注：1.上表皮；2.维管束；3.油细胞；4.髓部；5.维管束鞘纤维；6.非腺毛

实验观察结果：①叶的上下表皮均为1层类方形或类长方形细胞，上表皮细胞厚且大，切向延长，外被角质层，表皮细胞外壁角质层较薄，无表皮毛和气孔；②栅栏组织约占叶横切面的1/3，为2列细胞，栅栏组织较发达，细胞排列较整齐紧密，不通过中脉；③海绵组织约占叶横切面的2/3，由多数薄壁细胞疏松排列，形成大的空隙(见图1、图2)；④主脉向叶背突出明显，主脉髓部呈类圆形，较大，其中散有油细胞，在下皮与皮层之间有油细胞断续排列成明显的油细胞环带，外韧型维管束约20个排列成环，每个维管束的韧皮部外侧有纤维集成帽状(见图2)。

3.2 叶表面制片

叶表面制片特征，见图3。

注：1.叶上表皮；2.叶下表皮；3.气孔；4.非腺毛

实验观察结果：①上表皮细胞为不规则多角形，垂周壁微波状弯曲，未见气孔及非腺毛；②下表皮细胞为不规则多角形，垂周壁波状弯曲，气孔多见，多为平轴式，不等式或不定式气孔偶见，较大，多细胞非腺毛较多且较长(见图3)。

3.3 粉末制片

叶的粉末显微特征，见图4。

注：1-2.非腺毛；3-4.油细胞；5-7.导管；8-9.纤维

实验观察结果：①叶粉末呈灰绿色，非腺毛较多，大多由2个细胞组成；②纤维较多，散在或成束，壁较厚，孔沟不明显；③油细胞较多，大多单个散在，细胞呈类圆形或卵圆形，直径30～60 μm，长60～80 μm，壁稍厚，棕黄色，胞腔内含黄色油滴状物；④导管较多，主要为螺纹导管，也有梯纹导管(见图4)。

4 讨论

(1)将本实验观察结果与黄晓燕[10]的观察结果进行对比，发现不同产地厚朴叶的显微结构有所区别，相同之处为：①叶上下表皮细胞为不规则多边形，垂周壁波状弯曲，叶下表面可见非腺毛及气孔；②主脉均具油细胞环带，每个维管束的韧皮部外侧有纤维集成帽状；③粉末均呈灰绿色，气微香，多细胞非腺毛多见，纤维较多，散在或成束，油细胞较多。不同之处为：①闽产厚朴主脉向叶背突出较明显，呈椭圆形，外韧型维管束约20个排列成环，主脉髓部油细胞较多，约55～70个，而川产厚朴约12～20个；②闽产厚朴海绵组织占比较大，约占2/3，川产厚朴约占1/3～2/3；③闽产厚朴叶表面制片上表皮垂周壁波状弯曲较明显，而下表皮垂周壁波状弯曲较不明显，栅栏组织不通过中脉，而川产厚朴栅栏组织过中脉；④闽产厚朴叶粉末制片纤维孔沟不明显。

(2)闽产厚朴叶显微观察结果与文献[10]相比未见石细胞，是样品原因还是实验误差有待深入探究。

(3)真伪优劣是中药材鉴定与评价的核心内容。厚朴叶作为福建省道地药材之一[11]，市售品有其他产地或不同品种的混淆品需要鉴别，正确鉴别药材真伪有助于为道地药材的认定提供科学依据。本研究结果显示，闽产厚朴叶上表皮无表皮毛和气孔，主脉呈椭圆形，外韧型维管束约20个排列成环，导管多为螺纹导管，纤维大多成束存在，孔沟不明显等可作为正确区分闽产厚朴叶的依据，本实验研究结果也为道地药材——闽产厚朴叶的正确鉴别提供了部分科学依据，有助于科学评价药材的真伪优劣。

5 结语

本研究通过对闽产厚朴叶进行生药学显微鉴定，结果表明闽产厚朴组织构造具备的主要鉴别特征为：①横切面组织结构特征上可见主脉髓部呈椭圆形，较大，外韧型维管束约20个排列成环，含维管束鞘；②下表皮非腺毛具多细胞；③粉末特征主要为纤维散在或成束，油细胞较多，导管多为螺纹导管。因此，本研究对厚朴叶显微鉴定方面的研究可为闽产厚朴叶的道地性鉴别提供依据，为闽产厚朴叶今后的开发利用提供参考资料。