龙血竭黄酮类成分研究

张兴锋，朱功俊，龚韦凡，刘向明,，桂 鹏

(1 中南民族大学药学院，湖北 武汉 430074；2 共青科技职业学院，江西 共青城 332020)

百合科剑叶龙血树Dracaenacochinchinensis(Lour.) S. C. Chen喜高温湿热，具有很高的经济价值和药用价值。龙血竭来源于龙血树特定部位的树脂，具有广泛的药理作用，如抗炎抗菌，降低血脂血糖，保护心肌细胞等[1]。黄酮在龙血竭中含量很高，为了研究龙血竭的药效物质基础，使其更好的应用于临床，我们主要针对黄酮类化合物进行了研究，分离并确定了11个化合物，结构分别为：

图1 化合物1～3结构式

图2 化合物4～7结构式

图3 化合物8结构式

图4 化合物9～11结构式

1 实 验

1.1 仪器与材料

DXR-500 MHz核磁共振仪(TMS内标)，Bruker；RE 52-98型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；DZF-6020型真空干燥箱，上海恒科仪器有限公司；ZF-IA型三用紫外分析仪，上海和勤分析仪器有限公司；JA2013N型电子天平，上海明桥精密科学仪器有限公司；CP214型电子天平，奥豪斯仪器有限公司；YMC-Pack ODS-A(250×10 mm)色谱柱，深圳凯米斯科技有限公司；Ultimate 3000型高效液相色谱仪(DAD二极管阵列检测器，VWD紫外检测器)，Dionex。

聚酰胺和正相硅胶填料，青岛海洋化工有限公司；氢氧化钠和盐酸，国药集团化学试剂有限公司；分析级乙醇、石油醚和乙酸乙酯，天津博迪华工有限公司；色谱级甲醇和乙腈，Tedia。

龙血竭购于西双版纳药业有限公司，经广西民族医药研究所滕红丽教授鉴定为百合科剑叶龙血树树脂的乙醇提取物，即龙血竭。样品(No：2012030)存放于中南民族大学药学院天然产物研究室。

1.2 提取与分离

龙血竭500 g粉碎成粉，0.4%氢氧化钠溶解，抽滤。加入盐酸于滤液调节pH值至2.1，抽滤，滤渣充分干燥后称重得308.2 g样品。提取物(308.2 g)与等质量聚酰胺混合拌样上柱，经25%，40%，55%，70%，85%和100%乙醇梯度洗脱后得7个组分，Fr.1～Fr.7。Fr. 1(23.2 g)与等质量硅胶混合拌样上柱，经石油醚-乙酸乙酯(45:1)、(25:1)、(1:1)梯度洗脱，再经多次硅胶柱层析得6组分，Fr.1-1～Fr.1-6。Fr.1-1(103.1 mg)经高效液相色谱分离得化合物1(10.3 mg)、化合物2(20.5 mg)、化合物3(7.6 mg)、化合物4(15.3 mg)、化合物6(6.1 mg)。Fr. 2(25.3 g)与硅胶等质量混合拌样上柱，经石油醚-乙酸乙酯(20:1)、(10:1)、(5:1)、(1:1)梯度洗脱，再经多次硅胶柱层析得4组分，Fr.3-1～Fr.3-4。Fr.3-1(120.3 mg)经高效液相色谱分离得化合物5(3.7 mg)、化合物7(10.6 mg)、化合物8(9.9 mg)、化合物9(20.3 mg)、化合物10(7.7 mg)、化合物11(8.4 mg)。

2 结构鉴定

化合物1：浅黄色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.12 (2H, dd,J=8.1, 1.9 Hz, H-2’, 6’), 7.99 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 7.64 (3H, m, H-3’, 4’, 5’), 7.04 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 6.95 (1H, dd,J=8.8, 1.9 Hz, H-6), 6.93 (1H, s, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表1。以上数据与文献[2]报道基本一致，故鉴定化合物1为7-羟基黄酮。

化合物2：浅黄色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.66 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 6.60 (1H, s, H-3), 6.13 (1H, s, H-6), 2.07 (3H, s, 8-CH3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表1。以上数据与文献[2]报道基本一致，故鉴定化合物2为5,7,4’-三羟基-8-甲基黄酮。

化合物3：浅黄色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 12.81 (1H, s, 5-OH), 7.79 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.77 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.57 (1H, s, H-3), 6.28 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 5.95 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表1。以上数据与文献[2]报道基本一致，故鉴定化合物3为5,7,4’-三羟基黄酮。

表 1 化合物1～3 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 数据

化合物4：浅黄色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.66 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.84 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-5), 5.83 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 3.51 (3H, s, 4-OCH3), 3.48 (3H, s, 6-OCH3), 2.73 (2H, t,J=8.4 Hz, H-α), 2.51 (2H, t,J=8.4 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表2。以上数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定化合物4为2,4’-二羟基-4,6-二甲氧基二氢查尔酮。

化合物5：浅黄色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.65 (2H, d,J=8.8 Hz, H-2’, 6’), 6.83 (2H, d,J=8.8 Hz, H-3’, 5’), 5.87 (1H, d,J=2.0 Hz, H-5), 5.86 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 3.56 (3H, s, 6-OCH3), 2.87 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.67 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表2。以上数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定化合物5为2,4,4’-三羟基-6-甲氧基二氢查尔酮。

化合物6：无色晶体。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 7.62 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 6.81 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 5.83 (1H, d,J=2.0 Hz, H-3), 5.81 (1H, dd,J=8.0, 2.0 Hz, H-5), 3.67 (3H, s, 2-OCH3), 3.01 (2H, t,J=8.0 Hz, H-α), 2.69 (2H, t,J=8.0 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表2。以上数据与文献[4]报道基本一致，故鉴定化合物6为4,4’-二羟基-2-甲氧基二氢查尔酮。

化合物7：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.24 (1H, s, 4-OH), 7.69 (2H, d,J=9.0 Hz, H-2’, 6’), 6.94 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3’, 5’), 6.92 (1H, d,J=8.5 Hz, H-6), 5.89 (1H, d,J=2.5 Hz, H-3), 5.87 (1H, dd,J=8.5, 2.5 Hz, H-5), 3.80 (3H, s, 4’-OCH3), 3.74 (3H, s, 2-OCH3), 3.09 (2H, t,J=7.8 Hz, H-α), 2.73 (2H, t,J=7.8 Hz, H-β);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表2。以上数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定化合物7为4-羟基-2,4’-二甲氧基二氢查尔酮。

表2 化合物4～7 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 数据

化合物8：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 9.36 (1H, s, 4’-OH), 7.14 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.81 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.65 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.34 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 6.25 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 4.79 (1H, dd,J=10.2, 2.2 Hz, H-2), 3.56 (3H, s, 7-OCH3), 2.86～2.55 (2H, m, H-4), 2.03～1.86 (2H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) δ: 159.1 (C-7), 157.2 (C-4’), 155.5 (C-8a), 131.6 (C-1’), 130.2 (C-5), 127.6 (C-2’, C-6’), 114.3 (C-3’, C-5’), 113.5 (C-4a),106.6 (C-6), 101.0 (C-8), 76.6 (C-2), 55.3 (7-OCH3), 28.6 (C-3), 23.8 (C-4)。根据HMBC谱，δH7.24和δH6.91与C (157.2)存在信号关联，OH质子信号与C (157.2)存在信号关联，因此可推断羟基位于C-4’上。δH6.91, δH6.44, δH6.35与C (159.1)存在信号关联，OCH3质子与C (159.1)存在信号关联，因此可推断甲氧基位于C-7上。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定化合物8为7-羟基-4’-甲氧基黄烷。

化合物9：无定型粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.78 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.47 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 5.71 (1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 5.56 (1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 3.86 (1H, m, H-2), 3.46 (3H, s, 5-OCH3), 3.39 (1H, m, H-2), 2.21 (2H, m, H-9), 2.28 (1H, m, H-4), 2.03 (1H, m, H-4);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表3。以上数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定化合物9为7,4’-二羟基-5-甲氧基高异黄烷。

化合物10：无色柱状结晶。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.76 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.46 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.28 (1H, s, H-5), 6.11 (1H, s, H-8), 3.83 (1H, m, H-2), 3.39 (1H, m, H-2), 3.28 (3H, s, 6-OCH3), 2.29 (1H, m, H-9), 2.26 (1H, m, H-9), 2.18 (1H, m, H-4), 2.01 (1H, m, H-4), 1.83 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO)数据见表3。以上数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定化合物10为7,4’-二羟基-6-甲氧基高异黄烷。

化合物11：白色粉末。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ: 6.74 (2H, d,J=8.5 Hz, H-2’, 6’), 6.54 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.41 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3’, 5’), 6.01 (1H, dd,J=8.4, 2.5 Hz, H-6), 5.91 (1H, d,J=2.5 Hz, H-8), 3.84 (1H, m, H-2), 3.49 (1H, m, H-2), 2.45 (1H, m, H-4), 2.29 (1H, m, H-4), 2.18 (1H, m, H-9), 2.01 (1H, m, H-9), 1.81 (1H, m, H-3);13C-NMR(125 MHz, DMSO) 数据见表3。以上数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定化合物11为7,4’-二羟基高异黄烷。

表3 化合物9～11 13C-NMR (DMSO, 125 MHz) 数据

续表3

7156.2156.6155.5895.3101.0101.3937.936.936.64a99.4117.2109.58a155.0148.8154.91128.3128.4129.82129.3129.6128.63114.0116.3114.74155.1144.5153.65114.0116.3114.76129.3129.6128.65-OCH355.7--6-OCH3-57.7-

3 结 论

本文利用碱提酸沉、聚酰胺和硅胶柱色谱以及高效液相色谱从龙血竭黄酮类成分中分离出3个黄酮类，4个查尔酮类，1个黄烷类和3个高异黄烷类成分。这为龙血竭所具备的抗炎抗菌，降低血脂血糖，保护心肌细胞等药理活性研究提供了化学成分上的研究对象。后续我们将对龙血竭的其他成分进行分离，通过较为完整的化学成分分析为其药效物质基础研究提供更多理论依据。