6353 份血培养检出病原菌的分布及耐药性分析

何天娇，李卓,朱鹏鹏，延娅娅，吴晓康

（1 西安交通大学第二附属医院，陕西 西安；2 西安医学院第一附属医院，陕西 西安）

0 引言

血流感染是一种破坏血液循环，在血液中出现大量的毒素，指的是病原微生物侵入到血液中，病毒在血液中进行大量的繁殖，并将毒素大量地释放出来，导致全身感染，出现中毒及全身的炎症反应，导致全身多器官功能障碍综合征，属于严重的全身感染性疾病。血流感染的发生受到抗菌药物的不合理应用及侵入性诊疗手段的影响，使其发生率逐渐上升。血流感染诊断的标准是进行血培养，能够为合理应用抗生素提供依据。本文检测本院血培养分离菌的分布情况，并分析主要病原菌的耐药性[1]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源

选择本院2018 年1 月至2019 年12 月临床送检血培养阳性资料。来源于同一患者的相同菌株不重复选择。

1.1.2 仪器和试剂

法国生物梅里埃公司生产的BACT/ALERT3D 全自动血培养仪、VITEK-2 Compact 全自动微生物分析系统。试剂包括BACT/ALERT3D 血培养仪配套的成人需氧和厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶。

1.1.3 药敏质控菌株

大肠埃希菌(ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)均购自国家卫计委临床检验中心。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集

在采集标本时应尽量避开患者发热状态或是有血流感染相关危险因素时，一旦遇到应在使用抗生素治疗之前，采用无菌操作方式进行采血，并将其注入到需氧和厌氧血培养瓶或儿童血培养瓶。

1.2.2 培养及鉴定

将血培养瓶置BACT/ALERT3D 血培养仪中，在温度为35℃下进行培养，时间为5d，若没有细菌生长则结果为阴性；若出现阳性报警应将其转种血平板、巧克力平板，同时还需涂片进行革兰氏染色，在危急情况下报告出结果。

1.2.3 鉴定及药敏

菌株采用VITEK-2 Compact 分析系统进行鉴定及药敏试验,根据临床实验室标准化委员会(CLSI)2015 年标准判读药敏结果。所有检测过程严格按照《全国临床检验操作规程》 (第4 版)进行操作[2]。

1.3 统计学分析

对细菌的菌株构成及耐药性进行分析，使用的软件为WHONET5.6，该软件为全国细菌药监测网推荐使用。

2 结果

2.1 病原菌的分布

从2018 年1 月至2019 年12 月，本院共送检血培养标本6353 份，从中分离出病原菌327 株，病原菌的检出情况见表1。

表1 血培养病原菌菌种检出情况

2.2 血培养阳性标本病原菌药敏性结果状况分析

2.2.1 革兰阴性菌的耐药率

本次研究共分离出大肠埃希菌101 株，肺炎克雷伯菌33 株，检出碳青霉烯类耐药肠杆菌（carbapenem resistant enterobacteriaceae，CRE）3 株，肺炎克雷伯菌、粘质沙雷氏菌与产酸克雷伯菌各1 株。其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出产超广谱β-内酰胺酶的菌株分别为32.7%和45.5%；大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对美罗培南、阿米卡星、亚胺培南、替加环素和头孢替坦的耐药率较低，均小于5%，大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率也小于5%，而对头孢唑啉的耐药率较高，均大于60%；分离出的搜优的大肠埃希菌对于亚胺培南及美罗培南均有明显的敏感性，而肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药率为1.0%。分离出的主要肠杆菌科对常用抗菌药物的敏感性见表2。

表2 分离出的主要肠杆菌科细菌对常用抗菌药物的敏感性（%）

2.2.2 分离出的主要葡萄球菌属耐药情况

对常用抗菌药物敏感性，凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase negative staphylococcus，CNS）和金黄色葡萄球菌对青霉素耐药率均高于85%，未检出对替考拉宁、万古霉素和替加环素耐药的葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus，MRSA）检出率为7.1%，见表3。

2.2.3 真菌药敏结果

共检出4 株真菌，其中2 株白色念珠菌，1 株近平滑念珠菌和1 株光滑念珠菌，其中近平滑念珠菌对两性霉素B 和伊曲康唑耐药，而对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伏立康唑敏感；其他真菌对这5 种抗真菌药物均敏感。

3 讨论

血培养作为血流感染诊断的金标准，但血液感染病原菌类型较多，且不同病原菌对抗菌药敏感性存在显著差异。因此，及时了解病原菌类型及药敏性状况，对患者临床用药具有重要的指导意义[3,4]。

本实验纳入本院2018 年1 月至2019 年12 月的6353份血培养标本，共分离出病原菌327 株，阳性率为5.1%，低于叶莎等[5]的报道，主要有以下几点原因，第一，不同的科室中在进行血培养送检时并没有都按照双瓶双套进行；第二，在抽血时机上没有把握好，发热上升期及高峰期没有作为抽血的最佳时机。本研究阳性标本菌群分布结果显示：革兰阴性菌在血液中所占的比例要比革兰阳性菌大，与国内报道血培养病原菌的分布趋势较为一致[6,7]，说明革兰阴性菌感染是血液感染的主要菌群，提醒临床医生需加以重视，及早防范。CNS 在以往认为其没有致病性，而近年来的研究显示，其也为致病菌，在具备了一定条件下也会造成血流感染，若不进行及时的治疗将会引发医院获得性血流感染的发生[8]。本研究检出的阳性菌株中，CNS 占据了较大比重，究其原因大部分患者都有严重基础疾病,机体免疫力低下并且长期应用抗菌药物,并伴有各种插管和侵入性的操作，使得正常菌群有机可乘的进入机体引起感染,而且耐药情况不容乐观[9]。

表3 分离出的主要葡萄球菌对常用抗菌药物的敏感性（%）

在耐药性方面，革兰阴性菌中大肠埃希菌对常用抗菌药物存在一定的耐药性，但对碳青霉烯类抗菌药物（美罗培南、亚胺培南等）保持高度敏感，而肺炎克雷伯菌存在对碳青霉烯类抗菌药物耐药的菌株。近年来，临床中应用碳青霉烯类抗菌药物较多，检出耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）的概率也随之增加，在这其中检出最多的为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem resistant klebsiella pneumoniae，CRKP）。有相关的文献显示，肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的主要机制之一就是携带KPC 和OXA23 型碳青霉烯酶基因[10]，需要积极预防耐药株的出现。

革兰氏阳性菌耐药情况，从结果中可以看出CNS 对青霉素、红霉素、苯唑西林、左旋氧氟沙星、莫西沙星耐药率均高于60%，其中红霉素和青霉素及苯唑西林的耐药率均超出85%；金黄色葡萄球菌对红霉素和青霉素的耐药率超过70%，MRSA 检出率在7.1%，低于胡旭姣等[11]的报道，未发现耐万古霉素葡萄球菌,葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素和利福平保持着极高的敏感性。

念珠菌也是医院血流感染的主要病原菌之一，常见于免疫力低下患者和一些医源性侵入性操作[12]。本次共检出4株念珠菌，占比相对不高。临床血流感染病例中，应该注意真菌感染的监测。

综上所述，本院血培养存在阳性率低等问题，需要加强临床科室的沟通，提高血培养送检，定期对血流感染病原菌的分布及耐药性进行分析，为临床医生经验用药提供依据。