膀胱癌组织中VEGF、Survivin和COX-2的表达与意义研究

（辽宁省营口市中心医院病理科，辽宁 营口 115000）

膀胱癌指膀胱内细胞恶性过度生长，属于泌尿系统常见疾病。该疾病发病属于多步骤形成、多基因参与、多因素混合的过程，外在环境作用及异常基因型积累可造成恶性表型的出现。患者出现膀胱癌后，会出现肾功能损害、腰痛、尿痛、尿急、血尿等症状，对患者身体健康及生活质量造成严重影响。Survivin指肿瘤特异性凋亡，对恶性肿瘤中异常表达进行抑制，血管内皮生长因子可对新血管生长进行促进，提升血管通透性[1]。恶性肿瘤疾病中，血管内皮生长因子表达十分明显，与预后、侵袭转移等具有密切联系，认为与肿瘤转移灶生长中的血管及肿瘤自身有联系[2]。通过对膀胱癌组织中血管内皮生长因子、癌组织存活蛋白、环氧化酶-2进行检测，观察血管内皮生长因子、癌组织存活蛋白、环氧化酶-2的意义与表达。

1 资料与方法

1.1 一般资料：时间为2017年1月至2018年1月，研究对象为以我院接收的膀胱癌患者，例数为60例，其中男40例，女20例，年龄35～82岁，平均年龄（57.54±2.34）岁；所有患者均通过病病理及手术证实，术前为实施化疗，放疗，取材手术标本后在液氮罐中进行保存。

1.2 方法：酶联免疫吸附法检测Survivin抗体，使用福州迈新生物技术开发公司的酶联免疫吸附法试剂盒及VEGF抗体进行实验，血管内皮生长因子、癌组织存活蛋白、环氧化酶-2严格按照酶联免疫吸附法说明书操作步骤实施。使用Western方法对膀胱癌组织中血管内皮生长因子、癌组织存活蛋白、环氧化酶-2含量进行检测，根据其说明书严格实施。使用 Gel-oc凝胶成像对Western blot条带进行扫描，对条带面积及单位吸光度值进行计算，各实验点的总吸光度值与对照组进行比较，得出值。RT-PCR：对各组膀胱癌组织总RNA并定量进行提取，各组取相同RNA反转录后，实施PCR。将5μLPCR扩增的产物在2%的琼脂糖凝胶上实施电泳。取出凝胶，对结果进行记录。使用凝胶电泳软件进行定量分析，β-actin条带平均光密度比较目的基因，表示目的基因mRNA的相对表达量。

1.3 统计学方法：使用SPSS17.0软件进行数据分析，使用t来进行计量资料的检验及比较，并用（）进行表示，使用χ2来进行计数资料的检验比较，并用率（%）来进行表示，（P＜0.05）表示差异十分显著，存在统计学意义。

2 结果

2.1 COX-2、Sur-vivin检测结果：酶联免疫吸附法检测显示Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌组织的 COX-2、Sur-vivin具有明显表达。对比Ⅰ期，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌组织 COX-2、Sur-vivin阳性细胞百分率及光密度值明显上升（P＜0.01），COX-2、Sur-vivin在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌组织中表达明显，Ⅳ期中最为明显。蛋白质印迹法检测COX-2、Sur-vivin结果比较免疫组（P＜0.05）。TR-PCR检测大鼠脑组织COX-2、Sur-vivin的表达水平比较蛋白质（P＜0.05）。见表1。

2.2 VEGF检查结果：Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌组织中VEGF表达明显，Ⅳ期最明显（P＜0.05）。RT-PCR检测蛋白质与VEGFm RNA表达一致，在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌组织中VEGF表达明显，Ⅳ期中最为明显（P＜0.05）。进行直线相关分析显示，Sur-vivin、COX-2与VEGF的蛋白质印迹法OD值呈正相关（r=0.485，P=0.0034；r=0.478，P=0.0041）。

3 讨 论

膀胱癌指出现于膀胱黏膜上的一种恶性肿瘤，临床上较为常见属于泌尿系统疾病。COX（环氧化酶）为合成前列腺素的限速酶，在体内包括COX-2、COX-1两种亚型。资料显示COX-2（环氧化酶-2）可能会促进癌肿的发生，主要出现于患者病理组织中，如炎症、肿瘤等。肿瘤出现转移、浸润的必要条件为新生血管[3]。

表1 COX-2、Sur-vivin检测结果对比（）

表1 COX-2、Sur-vivin检测结果对比（）

注：#比较Ⅰ期，P＜0.05，比较Ⅱ、Ⅲ期，P＜0.05

肿瘤细胞分泌的VEGF为对血管内皮细胞增殖造成刺激的重要因子之一，与其他实体瘤相同，膀胱癌组织中VEGF具有显著表达，并且膀胱癌的转移与发生与VEGF关系密切，可将其作为胱癌预后及转移的重要指标[4]。Survivin为肿瘤特异性凋亡抑制蛋白，治疗肿瘤可使用干扰其作用和抑制其表达的方式，分子靶向单独治疗与其他抗癌治疗方式共同使用，在临床上应用效果显著。表现为可对肿瘤的生长及形成进行抑制[5]。并且在癌细胞株中转染Survivin阴性突变质粒可对细胞凋亡进行诱导。Livin为IAP新成员，在大部分人类实体瘤组织、细胞中及人的胚胎组织中均有特异表达。在正常人组织中表达较低，说明Livin可能与肿瘤进展具有密切联系[6]。这种肿瘤表达上的特异性使其变成最近临床上肿瘤基因治疗及诊断的新靶点。出现Survivin则说明肿瘤临床分期高，组织分化不良[7]。本次研究检测不同临床分期的膀胱癌患者癌组织，均显示有COX-2、Sur-vivin的表达，随着患者病情加重，COX-2、Sur-vivin表达呈逐渐上升趋势，其中Ⅳ期表达最为明显[8]。膀胱癌组织中COX-2、Sur-vivin强度与膀胱癌临床分期之间的关系呈正相关。膀胱癌预后越差，临床分期越迟，COX-2、Sur-vivin表达强度越强[9]。更加证实COX-2、Sur-vivin对患者膀胱癌发病机制进行参与。本次研究显示，Ⅳ期中COX-2、Sur-vivin阳性率比较无远处转移患者，明显较高。说明COX-2、Sur-vivin对膀胱癌疾病的演进进行参与，COX-2（环氧化酶-2）、Survivin（癌组织存活蛋白）基因的过度表达可能与膀胱癌分子异常事件有关，可将Sur-vivin、COX-2作为膀胱癌预后及生物学行为判断的标准之一，VEGF可促进患者心血管生长，并提升患者血管通透性，恶性肿瘤疾病中，血管内皮生长因子表达十分明显，其与预后、侵袭转移等在一定程度上具有联系，认为与肿瘤转移灶生长中的血管及肿瘤自身有联系[10]。本次研究中，检测参与研究的膀胱癌患者膀胱癌组织，结果均显示有VEGF表达，患者病情越严重，其VEGF活性越高，最为明显的为Ⅳ期膀胱癌组织，更加证明膀胱癌发病机制中有VEGF的参与，并且VEGF随着患者病情的加重而逐渐上升[11-12]。与COX-2、Sur-vivin与膀胱癌演进具有一致性，并且VEGF与COX-2（环氧化酶-2）、Survivin（癌组织存活蛋白）表达呈正相关性，因此，认为膀胱癌发病机制中，VEGF表达与COX-2、Sur-vivin表达具有协同作用[13]。

综上所述，在膀胱癌临床病情进展中，VEGF与COX-2、Sur-vivin呈平行性，即VEGF表达与COX-2、Sur-vivin表达的高低能够在一定程度上对患者病情变化进行反应。当前关于VEGF对癌症的参与研究较多，对COX-2、Sur-vivin的研究刚刚开始，众多问题还没有进行清楚说明，随着研究的加深，VEGF与COX-2、Sur-vivin可称为膀胱癌基因治疗及诊断的新靶点。