青黛的质量标准研究

高思雨 白彩虹 王晓波 张 旭,

（1 辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110847；2 中国人民解放军联勤保障部队第九六七医院，辽宁 大连 116600）

青黛为爵床科植物马蓝Baphicacanthus eusia Bremek、蓼科植物蓼蓝Polygonum tinctofiumAit或十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末、团块或颗粒[1]。其主要活性成分为靛蓝、靛玉红。有清热解毒、凉血定惊的作用，用于瘟病发斑、胸痛咳血、口疮、喉痹、小儿惊痫。研究表明，青黛有一定的免疫调节作用[2-3]，抗病原微生物及抗肿瘤[4-6]作用，其主要成分靛玉红对慢性粒细胞白血病有良好的效果[7]，是中药复方黄黛片组方的主要原料[8]。市售青黛有掺伪、掺杂、染色、增重等问题使得青黛质量差异很大。本课题对六批青黛灰分含量、水溶性浸出物、醇溶性浸出物等含量进行测定，并验证现行的青黛质量标准是否稳定可行，为建立完善的青黛质量标准提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器：岛津LC-10AT高效液相色谱仪，日本岛津公司；色谱柱为JK5-3408C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；KQ-500DE 超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 试药和试剂：青黛（分别购于大连六家药店，编号分别为1～6号）；靛蓝对照品（购于国家标准物质中心，批号：123251）；靛玉红对照品（购于国家标准物质中心，批号：88131）；甲醇（Sigma-Aldrich公司，色谱纯）；其他试剂均为分析纯。

1.3 性状：1、2、3、4、6号样品呈蓝色粉末，用手搓即成细粉，体轻，易飞扬，微有草腥气，味淡，不溶于水，于无水乙醇呈深蓝色。5号样品呈蓝绿色粉末，体轻，易飞扬，有怪味，不溶于水，于无水乙醇呈绿色。

1.4 鉴别

1.4.1 显微鉴别：分别取少量1～6号的青黛粉末置载玻片上，用稀甘油封片，于显微镜下观察粉末的显微结构，分别用10倍物镜和40倍物镜对青黛粉末进行观察，结果见图1。根据显微鉴别得出5号青黛粉末为伪品，5号中含有大量的淀粉粒几乎没有靛蓝结晶。其他几种青黛样品中均含有大量的靛蓝结晶及部分植物的纤维、导管等碎片。

1.4.2 水溶性色素鉴别：分别称取1～6号青黛粉末各0.5 g，放入烧杯中，加10 mL水，震荡后放置片刻，观察水层颜色，水层不得显深蓝色。除5号样品水层显淡蓝色，其余五种样品水层均不显色。水溶性色素鉴别结果显示，六种样品水溶性色素均符合标准。

2 含量测定及结果

2.1 水分检查：采用药典中水分测定法中的第一法烘干法测定青黛粉末中的水分，根据减失重量计算青黛粉末中水分的含量，结果见表1。

2.2 灰分检查：利用药典附录IXK灰分测定法测定青黛粉末的灰分，根据炽灼所得的青黛残渣的重量，来计算青黛样品中灰分的含量，将酸不溶性灰分含量小于10%的样品归类为正品，结果见表1。

2.3 水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量测定：利用药典附录XA浸出物测定法测定青黛粉末的水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量。以干燥品计算供试品水溶性浸出物和醇溶性浸出物的含量，结果见表1。

2.4 靛蓝含量测定

2.4.1 色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长606 nm。理论板数按靛玉红峰计算应不低于3000。

1号青黛

2号青黛

3号青黛

4号青黛

6号青黛

表1 6批青黛含量测定结果（%）

2.4.2 供试品制备：分别取1～6号青黛粉末5mg，精密称定，放置于25 mL容量瓶中，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液约22 mL，超声处理30 min后，放冷，加2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液定容，摇匀，过微孔滤膜，即得。

2.4.3 标准品制备：取靛蓝对照品2.5 mg，精密称定重量，放置于250 mL的容量瓶中，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液约220 mL，超声处理1.5 h，放冷后，加入2%的水合氯醛的三氯甲烷溶液至刻度，摇匀，过微孔滤膜，即得靛蓝标准品，每1 mL中含有靛蓝10 μg。

2.4.4 靛蓝含量测定 分别取上述供试品溶液与靛蓝对照品各10 μL注入液相色谱仪中，测定，即得结果。据药典规定，本品按青黛干燥品计算，含靛蓝量不得少于2%。结果见表1。

2.5 靛玉红含量测定

2.5.1 色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70∶30）为流动相；检测波长292 nm。理论板数按靛玉红峰计算应不低于3000。

2.5.2 供试品制备：分别称取1～6号青黛粉末50mg，精密称定，放置于25 mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液约20 mL，超声处理30 min，放冷后，继续加入N，N-二甲基甲酰胺溶液定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜，即得。

2.5.3 标准品制备 称取靛玉红对照品2.5 mg，精密称定，放置于50 mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺约45 mL，超声处理使其溶解，放冷后，加入N，N-二甲基甲酰胺至刻度，摇匀后，精密量取配置溶液10 mL，放置于100 mL容量瓶中，加人N，N-二甲基甲酰胺至刻度，摇匀，过微孔滤膜，即得靛玉红标准品，每1 mL中含有靛玉红5 μg。

2.5.4 靛玉红含量：测定分别取上述供试品溶液及靛玉红对照品各10 μL注入液相色谱仪中，按上述设定条件测定，即得结果。据药典规定，本品按青黛干燥品计算，含有靛玉红含量不得少于0.13%。结果见表1。

3 讨 论

对市场上所购买的六批青黛性状、显微鉴别，灰分，水分及水溶性色素检查，水溶性浸出物、醇溶性浸出物、靛蓝及靛玉红含量等进行测定。根据2015版药典中记载，青黛中靛蓝的含量应不低于2%，靛玉红的含量应不低于0.13%，水分含量不得过7%。5号样品靛蓝含量0.89%，靛玉红含量0.03%，均小于药典规定，含量测定为伪品。经检查，除5号样品外，其余均为真品。显微鉴别观察到1、2、3号样品中含大量靛蓝结晶，同时植物的组织残留较多，在显微镜下呈现为黄色团状，鉴定其为真品但无法由此判断其质量优劣。5号样品含有大量淀粉粒，几乎没有靛蓝结晶。经HPLC测定，5号样品靛蓝及靛玉红含量均不合格，确定其为伪品，其他五种样品均为真品；实验后所得的灰分应该为白色细粉，其中5号青黛实验后所得的灰分为黄褐色，其余五种青黛所得的灰分为灰白色。五种酸不溶性灰分平均值为8.28%，灰分含量测定的平均值为50.91%；五种样品水分含量平均值为5.9%；五种样品水溶性浸出物含量的平均值为4.34%；5号青黛的醇溶性浸出物为翠绿色，其余五种青黛的醇溶性浸出物均种棕黑色，醇溶性浸出物含量的平均值为1.97%；靛蓝含量平均值为2.16%，靛玉红含量平均值为0.17%。

青黛的加工需要经过浸泡、打靛和粗靛精制三个步骤[9]，后两个步骤在操作时需加入石灰水和生石灰，加入石灰的量和淘花的工艺是影响成品质量的关键，也是正品青黛灰分值高的原因所在。马双成等将2017年青黛灰分（总灰分和酸不溶性灰分）测定数据与40年前27批青黛灰分测定数据（1977年药典修订草案）对比，发现从1977年到2017年，青黛总灰分数据从50.6%到74.7%有明显增加，而酸不溶性灰分数据从18.8%到9.3%有明显降低，表明青黛含石灰量在增加，而加工所用石灰纯度更高。2017年，张萍等[10]发现在抽查青黛样品中，掺入的石灰含量达70%～80%，掺杂和增重情况极其严重，而染色情况较以前有所好转，样品均未检出孔雀石绿。传统工艺生产的青黛因含石灰等杂质，对其临床应用产生较大的影响，现代研究也证实了石灰含量过高，可能降低青黛的清热作用及产生对消化道的刺激作用。由于生产加工厂家多、原料来源不一、加工方法和炮制工艺差别较大，且有掺伪、掺杂、染色、增重等问题，严重影响了药材质量和临床疗效，成为提高青黛质量水平的首要问题之一。

本实验仅抽取六批青黛进行检验，合格率不足以代表青黛的整体质量水平。市面上的青黛质量差异很大，有很多掺伪掺假品出售。相关文献报道青黛的不合格率也相对较高。建议明确规定生产中加入石灰的量，优化淘花、浮选工艺，减少非药用成分残留量，进一步完善生产工艺，加强对青黛生产的监管，以完善质量标准。