HPV-DNA检测与HPV E6/E7mRN检测在宫颈机会性筛查中应用

河南大学附属郑州颐和医院 国际健康管理中心 （河南，郑州，450000）

宫颈癌是作为当前女性群体临床最常见的一类恶性肿瘤疾病，宫颈癌疾病发生是因人乳头瘤病毒（HPV）的感染所致[1-2]。对于年龄≤30 岁的年轻女性群体而言，虽然HPV的感染率相对较高，但多数感染者为HPV一过性、无症状感染，不会导致发生宫颈癌，而在常规HPV-DNA筛查检测中，对该群体HPV筛查存在较高的假阳性[3]。因此，寻找一种特异更强且阳性预测值高的宫颈癌筛查方法对于年轻女性群体具有重要意义。研究以探讨高危型HPV E6/E7mRNA检测在年轻女性群体宫颈机会性筛查的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入本院2018年1月至2018年12月本院接收宫颈薄层液基细胞学（TCT）筛查显示非典型鳞状上皮细胞/低度鳞状上皮内病变（ASCUS/LSIL）患者100例，研究纳入患者TCT诊断ASCUS、LSIL，患者年龄在22～30岁，性生活史＞3年；研究排除合并存在其他恶性肿瘤疾病、排除血液系统或其他脏器功能疾病患者、排除精神疾病患者。随机将患者分成常规组（n=50）与实验组（n=50）；常规组纳入患者年龄 23～30岁，平均年龄（26.8±2.2）岁；实验组纳入患者年龄23～29 岁，平均年龄（26.2±2.6）岁。两组患者一般资料对比未见明显差异。纳入患者入选研究前均签署知情权同意书，研究内容经院伦理委员会批准通过。

1.2 方法

常规组患者予以HPV-DNA检测、实验组患者予以HPV E6/E7mRNA检测，对两组患者检测阳性患者均进行阴道镜+活检，对检测结果为宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ级患者经p16免疫组化染色进行分流管理，CIN＞Ⅱ级患者进行支持治疗，检测结果为阴性者则持续进行随访。分别对比两组患者检测情况。

（1）TCT检查：患者均行膀胱截石位，医生通过毛刷刷取患者少许宫颈管内壁脱落细胞样本，将之置于取样瓶，参考国际癌症协会TBS诊断系统（2004）的报告方式，针对患者宫颈癌的高危因素，包括机体健康状态、阴道炎症、ASCUS以及高度鳞状上皮内病变 （HSIL）等各项内容依次进行评价，ASCUS及以上检查结果为阳性。（2）HPV-DNA检测：患者均行膀胱截石位，经阴窥镜获取患者宫颈表面的分泌物样本，置于细胞保存液内备检。取样本经温箱水浴加热处理5min，依据操作说明书分步进行检测。（3）HPV E6/E7mRNA检测：患者均行膀胱截石位，经阴窥镜获取患者宫颈表面的分泌物样本，置于细胞保存液内备检。样本均经5000r/min离心机离心处理5min后弃去上清液，样本经蒸馏水清洗，进行二次离5min，复弃去上清液，经裂解剂裂解处理，取裂解液检测，检测步骤按照HPV E6/E7mRNA检测说明书分步进行。研究所用逆转录试剂盒为Fernentas（美国）生产，RNA提取试剂盒为QIAGEN公司（德国）生产，PCR试剂盒为上海吉玛公司生产。以检测值≥1表示检测阳性。（4）阴道镜穿刺活检：对两组患者检测阳性患者均进行阴道镜+活检，依据《妇产科学》（第9版）标准进行病理学诊断，将患者检测分为宫颈炎性改变、宫颈上皮内瘤变CINⅠ～Ⅲ级、宫颈癌。

1.3 统计学处理

通过SPSS20.0统计软件对研究涉及数据依次进行统计分析。两组患者诊断情况对比经x2检验，P＜0.05表示对比存在明显差异。

2 结果

实验组患者检测阳性率相比常规组明显更低（P＜0.05）；两组患者检测阳性病例经阴道镜+活检显示，实验组CIN＜Ⅱ级检测率相比常规组更低 （P＜0.05），实验组CIN≥Ⅱ级检测率相比常规组未见显著差异（P＞0.05）。 见下表 1。

表1 两组受检者检测情况与病理诊断结果对比

3 讨论

宫颈癌是作为中青年女性群体中常见的一类恶性肿瘤疾病。临床研究表明，宫颈癌致病原因为HPV病毒感染，临床对HPV患者需采取措施及时进行预防[4-5]。对于宫颈癌的预防方法，临床上主要以注射HPV疫苗以及进行宫颈癌筛查等方法进行，其中HPV疫苗的价格相对昂贵，其普及程度相对较低；而宫颈癌筛查较疫苗注射经济实惠且操作简便，是作为当前宫颈癌预防的主要方向。对于宫颈癌筛查，临床上传统方法仍是以细胞学筛查方法为主，而细胞学筛查在目前尚缺乏一个统一的标准，检验结果易受检验者的主观因素影响，导致检测重复性低。HPV DNA检测方法是宫颈癌细胞学筛查的一个辅助手段，在临床应用较广泛，但该方法在年轻妇女HPV感染筛查上的假阳性率较高，原因是年轻妇女HPV感染多为一过性、不致癌感染，临床上需通过寻找其他方法以提高对HPV的筛查准确率。HPV病毒中的E6/E7基因是作为宫颈癌关键致病基因，其中，E6能有效抑制p53基因的表达并对细胞凋亡过程进行阻断，而E7能抑制 pRB基因表达，从而导致细胞周期发生失控，通过检测HPV E6/E7 mRNA能有效反映病毒的活性与病毒致癌能力。研究常规组患者予以HPV-DNA检测、实验组患者予以HPV E6/E7mRNA检测，结果显示，实验组患者检测阳性率相比常规组明显更低 （P<0.05）；两组患者检测阳性病例经阴道镜+活检显示，实验组CIN<Ⅱ级检测率相比常规组更低（P<0.05），实验组CIN≥Ⅱ级检测率相比常规组未见显著差异 （P>0.05），研究结果表示，HPV E6/E7mRNA检测能有效筛查女性患者CIN<Ⅱ级。

综上所述，相比于常规HPV-DNA检测筛查方法，HPV E6/E7mRNA在筛查与预测宫颈癌疾病患者准确性相对更高，该方法具有更高的临床应用价值。