金黄色葡萄球菌肠毒素分型及药敏分析

济宁市第一人民医院医学检验科 （山东，济宁，272100）

金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus，SAU）是临床上常见的一类病原菌。SAU具有耐干燥、抵抗力强的特点，易在物体表面定植，是引起院内感染的重要病原体之一。金黄色葡萄球菌可以产生A、B、C1、C2、C3、D、E 及 F 八种血清型肠毒素，对热耐受性好，常引起食物中毒[1]。随着抗菌药物的滥用，SAU对抗菌药物的耐药性日趋严重，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus，MRSA）的出现，使临床抗菌药物的选择面临更大压力[2]。及时了解院内SAU感染的肠毒素特点和耐药趋势，对指导临床合理使用抗菌药物、控制耐药菌株扩散具有指导意义。本研究分析了2018年1月-2019年6月期间住院患者生物样本中分离出的金黄色葡萄球菌的肠毒素特征及药敏试验结果，现将结果报告如下：

1 资料和方法

1.1 研究对象

我院2018年1月-2019年6月住院患者送检痰液、血液、尿液、分泌物、胸腹水、引流液、肺泡灌洗液等标本中分离出的226株金黄色葡萄球菌，同一患者同一部位去除重复菌株，-80℃冰箱保存。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC29213，购于山东省临床检验中心。菌株和质控菌株接种于血琼脂平板上于37℃二氧化碳培养箱中培养。

1.2 肠毒素检测方法

采用酶联免疫吸附法检测A型～E型 （SEA～SEE）肠毒素，试剂盒购自德国拜发公司，按照说明书进行操作。

1.3 药敏试验方法

药敏试验采用法国生物梅里埃 VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统，药敏卡为GP67卡。药敏结果判读根据美国临床实验室标准化研究所（CLSI）2015 年标准[3]，纸片法（K-B 法）进行验证，药敏纸片购于英国Oxoid公司。

1.4 MRSA的判断方法

（1）K-B 法：30μg 头孢西丁（FOX）纸片的抑菌圈直径≤21mm。

（2）VITEK 2 仪器法：当苯唑西林 MIC＞4μg/ml，头孢西丁筛选试验阳性，仪器自动判读为MRSA。

1.5 统计学分析

数据整理使用Microsoft Excel表格，计数资料采用χ2检验；所有分析使用SPSS 22.0统计软件，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 金黄色葡萄球菌检出情况

在分离出的金黄色葡萄球菌226株中，检出MRSA92株（40.71%），检出 MSSA134株（59.29%），重症监护室（ICU）中MRSA检出率与非ICU科室相比，差异有统计学意义（P<0.01）。见表 1。

表1 MRSA检出情况

2.2 肠毒素检出情况

226株金黄色葡萄球菌中，其中184株检出肠毒素，阳性率为 81.42% （184/226），其中 MRSA中有85株检出肠毒素，阳性率为 92.39%（85/92），MSSA中有99株检出肠毒素，阳性率为73.88%（99/134）；仅检测出1种肠毒素菌株有91株，占49.46%（91/184），检测出 2种肠毒素菌株有 74株，占40.21%（74/184），检测出3种肠毒素菌株有19株，占 10.33%（19/184）；未检出 SEE。 见表 2。

表2 金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因检出率

2.3 金黄色葡萄球菌抗菌药物耐药情况

金黄色葡萄球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素及红霉素等抗菌药物整体耐药率超过了50%；对万古霉素、利奈唑胺、替加环素的敏感率为100%。其中MRSA对四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素及红霉素等抗菌药物整体耐药率超过了70%。见表3。

表3 金黄色葡萄球菌药敏结果（n，%）

3 讨论

金黄色葡萄球菌特别是MRSA的营养要求低，对医院环境特别是ICU有较好的耐受能力和定植能力，可经过医护手作为传播媒介造成院内感染的暴发流行，所以，MRSA已成为医疗界关注的焦点问题之一[4]。不同国家及地区之间MRSA检出率差异显著，同一医院不同科室之间MRSA的检出率也存在差异[5]。本研究发现ICU中MRSA检出率大于其他科室，差异有统计学意义。

金黄色葡萄球菌在一定条件下可以分泌一种小分子蛋白质，为肠毒素，其分子结构和毒性作用相似，迄今为止已发现的肠毒素有22种不同类型，其分泌的肠毒素可以造成食物中毒。在本研究中，检出率最高的为肠毒素A，说明SEA型金黄色葡萄球菌是引起感染的主要菌种，本研究结果还显示MRSA肠毒素检出率高于MSSA，这与陈万进等的研究结论一致[6]。

本研究发现MRSA对于常用抗菌药物均有高的耐药性，对苯唑西林和青霉素的耐药率达到了100%，这与相关研究结果一致[7-8]。金黄色葡萄球菌可产生β-内酰胺酶使青霉素的活性受到抑制，所以SAU对青霉素不敏感。糖肤类抗菌药物万古霉素是治疗MRSA感染的最后一线药物，它通过干扰细菌细胞壁的合成来起到抗菌作用。由于万古霉素在肺部的药物浓度不高，所以在治疗MRSA感染肺炎中的效果不好，万古霉素联合其他抗菌药物如利福平成为治疗肺部严重感染时的一种策略[9]。利奈唑胺属于唑烷酮类抗菌药物，不易与其他抗菌药物发生交叉耐药，治疗效果显著。利奈唑胺与万古霉素的抗菌作用及安全性相似甚至更优，有研究者报道利奈唑胺与达托霉素联合应用可有效治疗MRSA感染，但在临床用药时需要注意消化道以及血液系统的毒性等不良反应[10]。

综上所述，在诊治金黄色葡萄球菌特别是MRSA感染患者，必须谨慎考虑治疗方法的选择，根据药敏试验结果合理的选择抗菌药物，避免抗菌药物滥用，从而有效防止耐药菌株的发生。