不同基原土牛膝的性状显微比较研究*

方 岚 ，丁 野 ，王湘波 ，方 磊 △ ，戴 慧 ，彭东明 ，丁 盈

（1.云南省食品药品审核查验中心，云南 昆明650106；2.湖南省药品检验研究院/湖南药用辅料检验检测中心，湖南 长沙410001；3.湖南省药品质量评价工程技术研究中心，湖南 长沙 410001；4.湖南中医药大学，湖南 长沙410036；5.湖南省食品药品职业学院，湖南 长沙410208）

土牛膝始现于《本草纲目》，“牛膝处处有之，谓之土牛膝”，指各地野生的牛膝，其功效“活血散瘀祛风利尿，坠胎”[1]；《图经本草》记载“今福州人单用土牛膝根…云治妇人血块极效”，而在肖步丹的《岭南采药录》[2]中记载“土牛七别名牛舌大黄，牛舌头，鱼鳞草。取其须根用之…散血止痛”。《中国植物志》记载“又名倒钩草，倒梗草”；《全国中草药汇编》收载土牛膝的来源为粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的根或全草；《中药大辞典》和《中国药材学》收载的土牛膝来源与其一致，药用全草，又名“牛舌大黄，牛舌头，鱼鳞草，倒扣草等”[3-6]。在两广及西南地区为民间习用药，如瑶药“五虎九牛十八钻七十二风”中的牛膝风[7]，傣药中的“怀哦囡”[8]，苗药中的“酒嗓咯咯额牛”[9]等。《广西中药志》记载为根部或其全草入药[10]；《广西壮族自治区瑶药材质量标准》收载干燥全草入药[11]；《广西特色中草药资源选编》收载全草入药[12]。2020版《中国药典》四部通则规定土牛膝来自苋科植物的粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的干燥根及根茎[13]，具有活血散瘀，祛湿利尿等功效[14-15]，含齐墩果酸、牛膝多糖、蜕皮甾酮等组成分[16-18]，用于治疗淋病、经闭、白喉肿痛、扁桃体炎、咽喉炎、急慢性咽炎、风湿关节疼痛、尿血等[19-20]。现代药理研究实验结果表明，土牛膝水提物可以抑制炎症早期的毛细血管扩张，减少血小板凝集，抗氧化和利尿等方面作用[21-23]。由于它在民间特别是少数民族中的应用非常广泛，因此在湖南、贵州、浙江、上海、安徽等13省的药材标准和炮制规范中，也收录了土牛膝的质量标准，但其植物基原却各不相同。总结起来，湖南、贵州的中药材标准和湖南的中药饮片炮制规范其基原是与中国药典的四部通则所载土牛膝基原一致；江苏省中药饮片炮制规范1980年版收载的粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、野生牛膝Achyranthes bidentata Bl.、柳叶牛膝Achyranthes longifolia（Makino）3 种基原[24]，其余标准收载基原均为野生牛膝。经查阅文献及对湖南省内长沙、永州及周边道县、双牌、江华等地调研，3种基原湖南省内均有分布，但略有不同，其中牛膝（野生种）Achyranthes bidentata Bl.在全省各地均广泛分布；粗毛牛膝Achyranthes aspera L.主要分布于道县、江华等地区；柳叶牛膝 Achyranthes longifolia（Makino）主要分布于道县、双牌和江华等地区。通过当地药农、药材收购站及瑶医交流了解，3种基原生长环境一致，经常可见同地混生，且各地均存在混用的情况。而现行标准中并无3种不同基原的区分方法。本文对土牛膝3种不同基原的形态组织学进行了全面细致的比较研究，现报道如下。

1 实验材料和仪器

Canon EOS 5D MarkⅢ相机，OLYMPUS CX41体视显微镜，LeicaDM2500显微镜及成像系统。

土牛膝的实验样品均为湖南省药品检验研究院中药检验所在湖南省永州市零陵区、双牌县、道县及江华瑶族自治县采集原植物经基原鉴定后确定分别为粗毛牛膝、野生牛膝及柳叶牛膝。性状鉴别分别参考《中国药典》及《湖南省中药材标准》2009年版，横切片显微方法取新鲜土牛膝，经FAA固定液固定，进行常规石蜡切片，并用番红—固绿染色装片[25]；粉末显微方法参照《中国药典》2020年版四部附录药材（饮片）显微制片方法制备。

2 基原鉴定及生药鉴别

2.1 粗毛牛膝 标本（1）为栽培品，采于湖南永州市马鞍岭种植基地，标本长约50 cm。经湖南中医药大学王智副教授鉴定为苋科植物土牛膝Achyranthes aspera L.。见图 1。

图1 粗毛牛膝标本图

2.2 野生牛膝 标本（2）于2018年9月18日采于湖南长沙市岳麓山，标本长约30cm。经湖南中医药大学王智副教授鉴定为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.。见图 2。

图2 野生牛膝标本图

2.3 柳叶牛膝 标本（3）为野生品。本品种与牛膝类似，其区别在于：野生牛膝的叶片呈现的是披针形或者为宽披针形，长度在10～20 cm，宽为2～5 cm，叶片的顶端尾部呈尖形；小苞片为针状，长度一般为3.5 mm，基部有2耳状薄片，只有些许缘毛；退化的雄蕊呈现的是方形，叶片的顶端具有不明显的齿痕。见图3。

图3 柳叶牛膝标本图

3 性状鉴别

3.1 粗毛牛膝 根茎呈圆柱形，直径在5～10 mm。根茎的表面大多是灰褐色，根茎上端有数个残存的茎基，具节，节上着生多数细根。主根为长圆柱形，略有弯曲，直径3～5 mm，长 10～15 cm，表面土黄色或浅棕色，能够看见细长的纵皱纹以及侧根痕。根茎质地偏硬，不容易被折断，其断面具有纤维性；根较柔韧，不易折断，断面有排列成数个轮环的点状维管束。气微，味微甘，而后微苦涩。见图4。

图4 粗毛牛膝性状图

3.2 野生牛膝 根呈细长圆柱形，长16～65 cm，直径0.3～1.2 cm。表面灰黄色或淡棕色，有细纵皱纹、稀疏的侧根痕及横长皮孔样的突起。质脆硬，断面较平坦，油润而略呈角质样，多数黄白色点状维管束散布在较大的中心维管束木质部周围，断续排成2～4轮。气微，味微甜而稍苦涩。见图5。

图5 牛膝（野生种）性状图

3.3 柳叶牛膝 根较短粗，长1.8～5.8 cm，直径1.0～1.6 cm。根扭曲，长 8～21 cm，直径 0.3～1.3 cm。表面浅黄褐色，具细密的纵皱纹及须根痕。质硬而稍韧，断面皮部浅灰褐色，维管束多数，呈点状散布成环。气微，味微甜。见图6。

图6 柳叶牛膝性状图

4 显微鉴别

4.1 根横切面

4.1.1 粗毛牛膝 木栓层由多列呈扁平状的细胞组成，栓内层较窄；维管束外韧型，断续排列成4～8轮，由结合组织将其彼此分开[26-27]，维管束由内向外依次变小，维管束之间以厚壁细胞辅助相连形成环状；向内维管束较大，束间结合组织为薄壁细胞；木质部主要由导管及小的木纤维组成，木质部射线较窄，中心次生维管束外韧形，呈2～4角状排列。薄壁细胞含有草酸钙砂晶。见图7、图8。

图7 粗毛牛膝根横切面

图8 粗毛牛膝根茎横切面

4.1.2 野生牛膝 与粗毛牛膝的主要区别为维管束断续排列成2～4轮。见图9、图10。

图9 野生牛膝根横切面

图10 野生牛膝根茎横切面

4.1.3 柳叶牛膝 与粗毛牛膝的主要区别为维管束断续排列成2～3轮，维管束之间间隔较宽。见图11、图12。

图11 柳叶牛膝根横切面

图12 柳叶牛膝根茎横切面

4.2 粉末鉴别 粗毛牛膝的粉末呈现出灰棕色。木纤维形成束状，有些和导管相交，细长，木纤维一端呈斜尖形，直径在11～23 μm，壁薄，纹孔呈细缝状或人字形等，较稀疏，孔沟不明显；薄壁细胞中含较多草酸钙砂晶；具缘纹孔导管或网纹导管可见，直径约至80μm，壁非木化。

野生牛膝与柳叶牛膝的粉末鉴别与粗毛牛膝一致。见图13。

图13 土牛膝粉末显微

5 结论与讨论

由于土牛膝3种不同基原在各省民间尤其是少数民族地区均广泛使用，功能主治基本一致，但各省市地方中药材标准及炮制规范中土牛膝基原却各不相同，质量标准内容也仅有性状、显微鉴别及齐墩果酸的薄层色谱鉴别，且性状与显微鉴别描述均较简单，并不能对不同基原近似种进行有效区分。本文通过对3种不同基原土牛膝的原植物与药材性状；横切面及粉末显微的全面观察比较，认为3种不同基原从性状上可以对原植物进行较好的区分。但在药材及饮片加工后，柳叶牛膝根及根茎断面略显红色，可以与另外两个基原较好的区分；而粗毛牛膝与牛膝在药材及饮片性状上特征较接近，从性状上不易区分。通过对根及根茎的横切面与粉末显微观察，3种基原粉末显微组成基本一致，无差别；而通过对横切面显微观察发现，3种不同基原土牛膝维管束排列方式有区别：其中粗毛牛膝维管束断续排列成4～8轮，维管束由内向外依次变小，维管束之间以厚壁细胞辅助相连形成环状；野生牛膝断续排列成2～4轮，维管束之间间隔相对较密；而柳叶牛膝断续排列成2～3轮，维管束之间间隔相对较宽，可以用来对3种不同基原进行区分。

本文通过对3种不同基原土牛膝药材的生药鉴别形态特征进行比较分析与研究，为土牛膝药材及饮片地方标准上升国家标准奠定了基础。建议后续对市场进一步调查，并对其化学成分、药理作用进行进一步深入研究，以考察是否可以统一基原，扩大中药材来源。