不同浓度戊二醛对种蛋表面消毒效果的影响

张 浩 张柱琦 关文怡 曹金元 周珍辉

北京农业职业学院，北京102442

福尔马林熏蒸消毒是孵化厅消毒种蛋最常用的方法，福尔马林熏蒸法可以杀死蛋壳表面绝大多数病原体[1]，消毒效果好，但福尔马林熏蒸消毒存在诸多问题，对人呼吸道及眼的刺激性大，对孵化厅的工人造成伤害。据孙成浩等[2]报道，种蛋入孵前用28 mL/m3福尔马林电磁炉加热0.5 h，种蛋平均消毒合格率仅为80%左右，另外还存在冬季液体福尔马林受冻凝固、熏蒸后残渣不易处理、成本较高等问题。戊二醛是近年来常用于种蛋消毒的一种消毒剂[3]，它刺激性小，在国内许多孵化厅替代福尔马林熏蒸消毒，为确定戊二醛的消毒效果，并筛选合适的消毒浓度，本试验选用1%、2%和5% 3 种浓度的戊二醛进行种蛋的消毒效果对比试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1）试剂。戊二醛溶液：规格20%（g/g），产品批准文号：兽药字(2014)162821278；培养基：营养琼脂培养基（批号20190305），购于北京天坛生物制品股份有限公司，其制备按厂家提供的说明方法进行。

2）试验仪器。生物安全柜（BSC-1360IIA2，北京东联哈尔滨制造有限公司）、恒温鼓风干燥箱（2XFD-B5140，上海智联分析仪器制造有限公司）、电热恒温培养箱（2XDP-2160，上海智联分析仪器制造有限公司）、立式自动电热压力蒸汽灭菌器（LXB35L，合肥华泰医疗设备有限公司）、一次性使用培养皿（90 mm，泰州市顺飞医疗器械有限公司）等。

3）被测种蛋。来自北京农效禽业有限公司父母代种鸡场280日龄罗曼褐种鸡。

1.2 方法

1）鸡蛋分组编号。从孵化厅取大小基本一致的200 枚鸡蛋，从中随机选取40 枚，随机分成4 组，1%、2%、5%浓度组和对照组，每组10 枚，4 个组的鸡蛋分别放置于消毒的塑料袋内密封，常温保存。

2）消毒液配制。将20%浓戊二醛溶液分别配制成浓度为1%、2%和5%的3 种溶液。

3）制作规板。规板用适当硬度的铁丝圈制成，具有2 个圆环的夹子，圆环直径3.5 cm。

4）培养基制备。按照营养琼脂的配比制备平板培养基。

5）物品灭菌。准备40 个洁净试管、包扎好的棉签，121 ℃高压灭菌30 min，灭菌的物品放置在紫外消毒后的生物安全柜。

6）鸡蛋浸泡消毒。试验组的鸡蛋分别用1%、2%和5%戊二醛浸泡消毒1 min，使鸡蛋完全浸湿，取出后放置于超净工作台中自然干燥，然后放入消毒的塑料袋内密封。

7）取样。将被测种蛋夹在特制的规板内，在装有灭菌生理盐水的试管中浸湿灭菌棉签，在试管壁上挤去多余的盐水，然后在规板范围内的鸡蛋表面来回滚动擦拭20 次，剪下棉签头，浸入装有9 mL灭菌生理盐水的试管中，每个鸡蛋做3 次重复，分别涂擦不同的区域。

8）细菌培养。用灭菌的吸管吸取1 mL 细菌液，注入灭菌的空平皿内，然后倾注熔化并冷却到45～50 ℃的普通琼脂，充分混合。

9）菌落记数。待普通琼脂凝固后，置37 ℃恒温箱中培养24 h，计数平板上的菌落数，平板菌落记数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

10）数据的统计与分析。试验数据用Excel 软件进行处理，并进行差异显著性检验。

11）计算杀菌率。根据每个鸡蛋3 次平行试验菌落数，计算平行样菌落平均数，再计算10 个鸡蛋的平均菌落数，求出杀菌率。杀菌率=（消毒前菌落数－消毒后菌落数）÷消毒前菌落数×100%。

2 结果与分析

由表1 可知，1%、2%和5% 3 种浓度的戊二醛消毒液浸泡消毒鸡蛋的杀菌率分别为86.70%、95.61%和96.95%，其中1%戊二醛与2%戊二醛和5%戊二醛以及对照组消毒效果差异显著（P＜0.01），而2%戊二醛组和5%戊二醛组差异不显著（P＞0.05）。从经济成本考虑，得出结论：消毒种蛋最合适的戊二醛浓度是2%。

表1 3 种不同浓度戊二醛对鸡蛋表面消毒效果的比较

3 讨论

本试验选用的戊二醛推荐使用浓度是2%或5%，从试验结果看，1%戊二醛杀菌率只有86.70%，不能满足种蛋消毒95%以上杀菌率要求[4]，而2%戊二醛和5%戊二醛杀菌率分别为95.61%、96.95%，达到了要求，可以做为种蛋消毒药。2%戊二醛和5%戊二醛杀菌率差异不显著（P＞0.05），说明戊二醛浓度达到2%以后，随浓度的增加，杀菌率并没有明显增加，所以戊二醛消毒种蛋最合适的浓度为2%。本次试验只做了种蛋表面杀菌效果试验，没有涉及对种蛋孵化率、出雏率及对雏鸡的影响等试验，有一定的局限性[5]。