腺苷激酶-1在非小细胞肺癌患者血清中的表达与肺癌临床病理学特点及预后的关系

付 刚

焦作市第二人民医院病理科,河南 焦作 454000

非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）是临床上较为常见的呼吸系统恶性肿瘤，相关研究显示NSCLC的发病率可达145/10万人以上，且近年来呈现出了一定的上升趋势［1］。NLCLC的远期生存预后较差，临床上缺乏相应的预后评估指标［2］。血清学指标在恶性肿瘤的诊断及临床预后评估过程中具有重要的参考意义，其检测较为方便、经济、微创，且短期内可以反复测量。近年来在对于NSCLC的发病机制的研究过程中，发现腺苷激酶-1（thymidine kinase 1，TK-1）在促进肺泡上皮细胞来源恶性肿瘤的增殖过程中发挥了重要的作用，TK-1可以通过磷酸化脱氧核苷酸，增强NSCLC病情的进展［3-5］。本研究通过选取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民医院进行诊治的78例NSCLC患者作为研究对象，探讨了血清中TK-1的表达，揭示了其与患者临床预后的关系，从而为临床上肺癌患者的预后评估提供可靠的实验室指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月—2013年4月在焦作市第二人民医院进行诊治的78例NSCLC患者作为NSCLC组，同时测定30例健康对象作为健康组。 NSCLC组中，男49例，女29例，年龄47～83岁，平均年龄（63.8±12.9）岁，病理学类型：腺癌53例、鳞癌25例；分化程度：高分化22例、中分化26例、低分化30例；TNM分期：Ⅰ期29例、Ⅱ期20例、Ⅲ期18例、Ⅳ期11例；淋巴结转移38例。健康组30例中，男19例，女11例，年龄41～79岁，平均年龄（61.0±11.8）岁。NSCLC组和健康组的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：（1）NSCLC患者经CT、MRI、病理学检查证实，诊断标准参考中华医学会制定的标准［4］；（2）接受血清TK-1检查前，患者无放化疗、生物及免疫治疗病史；（3）本研究在我院医学伦理会审批通过后实施。排除标准：（1）合并其他部位肿瘤疾病的患者；（2）伴有精神、认知功能障碍的患者。

1.3 血清TK-1检测方法

用ELISA法检测TK-1水平，采用患者的肘部静脉血5 ml，1 000 r/min离心10 min，取上清液待测。密封袋中取出实验板条，空白孔中加入样品或者稀释液100 ul/孔，检测孔中加入标本100 ul/孔，胶纸封闭实验表条孔，36℃条件下孵育60～90 min，磷酸盐缓冲液清洗5次，空白对照孔中加入生物素抗体稀释液100 ul，检测孔中加入生物素抗体检测液100 ul，胶纸封闭实验表条孔，36℃条件下孵育30～60 min，空白对照孔中加入酶结合稀释液100 ul，检测孔中加入酶结合检测液100 ul，胶纸封闭实验表条孔，磷酸盐缓冲液清洗5次，加入TMB显色底液（品牌：YSRIBIO，湖州英创生物科技公司），避光36℃孵育15 min，加入终止液100 ul，3 min内检测OD450值，BioTek酶标仪购自美国伯腾仪器有限公司。

1.4 血清TK-1参考值

本研究在查阅大量文献的及临床数据分析的基础上［5］，健康人群的血清TK-1水平范围0～2.0 pmol/L，＞2.0 pmol/L判定为异常（TK-1阳性）。

1.5 统计学方法

本次研究收集的所有数据均采用SPSS 16.0软件进行处理，血清TK-1、年龄等计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；TK-1阳性率、性别等计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC组和健康组的血清TK-1水平及阳性率比较

血清TK-1水平及阳性率进行对比，NSCLC组高于健康组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 NSCLC组和健康组的血清TK-1水平及阳性率比较

2.2 NSCLC组血清TK-1阳性率与患者临床病理学特征的关系

NSCLC组患者的血清TK-1阳性率均与患者的分化程度、TNM分期、病灶最大径、淋巴结转移具有显著的相关性，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 NSCLC组血清TK-1阳性率与患者临床病理学特征的关系

2.3 NSCLC组血清TK-1阳性率与患者预后的关系

血清TK-1阳性NSCLC患者的3年存活率为28.57%，显著的低于TK-1阴性患者的51.16%（P＜0.05）；血清TK-1阳性NSCLC患者的中位生存时间21个月显著的短于血清TK-1阴性患者的27个月（P＜0.05），见表3，图1。

表3 NSCLC组血清TK-1阳性率与患者预后的关系

图1 TK-1阳性率与NSCLC患者生存时间的关系

3 讨论

NSCLC癌细胞生物学浸润及侵袭的能力较强，对于腹腔内脏器浸润转移的风险较高。在多种病理生理机制的激活过程中，NSCLC细胞生物学行为的改变，能够加剧NSCLC患者整体临床预后的恶化［6］。临床观察发现，NSCLC患者多脏器功能衰竭的比例可超过35%以上，其远期总体生存时间不足38个月［7-8］。迄今为止临床上仍然缺乏对于NSCLC预后评估的重要指标，虽然血清CA125及CA199等肿瘤生物学指标可以在一定程度上反应患者远期预后，但其预测灵敏度不足40%，特异度也较低［9］。寻找合适和敏感的预后评估指标，是临床医师共同关注的课题，同时可以为临床上早期临床决策及肺癌患者出院后的重点随访提供依据。

在NSCLC肺癌细胞DNA增殖的过程中，需要经过脱氧核苷酸的磷酸化修饰，TK-1能够影响到癌细胞核分裂过程中底物限速酶的活性，导致限速酶的过度激活，增加了DNA异常分裂合成的速度［10-11］。TK-1对于癌细胞内MAPK或者P16下游信号通路的激活，能够增加癌细胞基因错配的风险，导致基因错配修复能力的下降［12-13］。回顾国内外相关文献可以发现，TK-1在NSCLC、甲状腺癌及肝癌等恶性肿瘤中异常表达，并能够为疾病的诊断及临床预后提供一定的参考。

本研究发现，在NSCLC患者血清中TK-1的表达明显高于正常对照人群，NSCLC患者体内TK-1的异常高表达可以通过促进癌细胞DNA的扩增，增加了癌基因异常整合和转录翻译的风险，最终促进了NSCLC的病情进展。唐兴等［14-15］研究者通过回顾性分析了73例样本量的NSCLC患者的门诊血清学诊断资料，结果发现病例组患者血清中的TK-1可上升25%以上，明显高于正常人群，这与本研究的结论较为一致。对于TK-1与患者临床特征的分析可以发现，分化程度较差、TNM分期较晚、病灶直径较大、发生淋巴结转移患者血清中的TK-1明显上升，其中低分化肺癌患者的血清TK-1阳性率可达50%以上，而发生淋巴结转移患者的血清TK-1的阳性率甚至可达60%以上，这些均证实TK-1的表达与肺癌患者的临床特征密切相关。但需要注意的是，本研究中并未发现腺癌、鳞癌等患者血清TK-1的表达差别，提示不同的上皮细胞来源并不会影响到TK-1的表达，TK-1的表达缺乏细胞细胞性。对于TK-1与NSCLC患者远期预后的关系分析可见，TK-1高表达的患者，其远期预后较差，3年生存率较低，且中位生存时间仅仅为21个月，表明TK-1与患者的临床预后密切相关，临床上可以通过随访NSCLC患者血清中TK-1的表达，进而评估出院患者的生存预后。但需要注意的是，唐兴等研究者并未发现TK-1与NSCLC患者3年生存率的关系，考虑样本量的不足、临床资料的收集偏移等，均可能影响到了研究结论的差别。

综上所述，在NSCLC患者血清中TK-1的表达明显上升，TK-1与肺癌患者淋巴结转移、细胞分化程度及临床分期等具有密切的联系，临床上通过随访血清中TK-1的表达，可以为评估肺癌患者的远期预后提供一定的参考。