满药柞树皮对番泻叶致泻大鼠的药效学研究

张笑梅，陈光晖

（承德医学院河北省中药研究与开发重点实验室，河北 承德）

0 引言

满药柞树皮（mongolian oak bark），为壳斗科植物蒙栎的树皮，味微苦，涩，平。主要分布于华北、东北及山东等地，资源丰富。《吉林中草药》和《全国中草药汇编》中有记载：柞树皮具有清热解毒，消肿利湿的效用，主治细菌性痢疾，急性胃肠炎，小儿消化不良，黄疸，急慢性支气管炎等疾病[1]。本实验通过研究柞树皮对番泻叶致泻大鼠的治疗作用，来探究柞树皮的止泻药效效果。

1 实验材料及仪器

1.1 实验动物

SD 大鼠60 只，雌雄各半，体重（240±20）g，SPF 级，购自辽宁长春生物技术有限公司，许可证号：SCXK（辽）2010-0001。于承德医学院动物中心屏障环境内饲养。

1.2 药物与试剂

柞树皮，由承德医学院中药药理教研室提供。番泻叶，购自北京同仁堂药店。藿香正气水，太极牌，批号：18011024023。

1.3 实验仪器

旋转蒸发仪（N-1100），低温冷却循环泵（DLSB-10/20），循环水式真空泵（SHZ-D Ⅲ），冻干机（LGJ-22D），ExcelsiorTM E S 全自动组织脱水机，Histocentre 3TM 组织包埋机等。

2 实验方法

2.1 药物制备

2.1.1 柞树皮冻干粉的制备

取750g 柞树皮生药煎成水煎剂，药液抽吸过滤后进行减压浓缩放入冻干机，冻干48h 得到柞树皮冻干粉71.944g（1g 冻干粉相当于10.425g 生药）。

2.1.2 番泻叶冻干粉的制备

取250g 番泻叶生药放入烧杯内，加入四倍沸水1000mL 浸没30min，两层纱布滤过后再加入四倍沸水浸没30min，将两次滤液合并减压浓缩放入冻干机，冻干48h 得到番泻叶冻干粉70.098g （1g 冻干粉相当于3.566g 生药）。

2.2 分组

将60 只大鼠按随机数字表法随机分为6 组，每组十只，雌雄各半。六组分别为：正常组（NC），模型组（Model），阳性对照组（PC），柞树皮低剂量组（L），柞树皮中剂量组（M）和柞树皮高剂量组（H）。

2.3 大鼠腹泻模型的制备

各组适应性饲养一周后开始进行实验，除NC 组使用生理盐水灌胃外，其余五组每天使用番泻叶进行灌胃（1.5g 生药/kg），连续一周造成严重腹泻模型。

2.4 柞树皮对腹泻模型的治疗

造模第七天在番泻叶灌胃1h 后，NC 组使用生理盐水灌胃，PC 组使用藿香正气水灌胃（1.8mL/kg），三个治疗组分别用不同剂量柞树皮水煎剂进行灌胃（L 组1g 生药/Kg，M 组2g 生药/Kg，H组3g 生药/Kg，分别相当于临床剂量10g，20g，30g）。灌胃后将大鼠放置于铺有定性滤纸的代谢笼内，观察大鼠一般行为及腹泻情况，并定时更换滤纸。最终计算6 小时内的腹泻指数作为评价指标[2-4]。（腹泻指数＝稀便率×稀便级。其中稀便率为每只大鼠所排稀便数与总便数之比，稀便级：根据稀便污染滤纸上的污迹范围大小分为4 级：1 级：污迹直径＜1cm，2 级：污迹直径＜1～1.9cm，3 级：污迹直径＜2～3cm，4 级污迹直径＞3cm。）

2.5 大鼠结肠HE 染色

将各组大鼠注射20%乌拉坦麻醉处死后立即切开腹腔，每只取远端结肠组织约1cm 用生理盐水冲洗干净后放入4%多聚甲醛中进行固定。充分固定48 小时以上使用PBS 浸泡1h 后进行常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，包埋后进行切片，片厚5μm。烘片2h 后经二甲苯脱蜡，不同浓度乙醇脱水，进行常规苏木素-伊红染色，染色后脱水透明行中性树胶封片。在光镜下对大鼠结肠组织切片进行观察并拍照。

2.6 统计学处理

使用软件SPSS 19.0 对各组实验数据进行处理，结果用均数± 标准差（±s）进行表示，各组间差异采用单因素方差分析。若P＜0.05，代表组间数据对比差异明显，具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 模型制备结果

使用番泻叶连续灌胃一周后，对比空白组，造模大鼠腹泻率达到100%，肛周可见黄色稀便附着，毛色稍显晦暗，行为无明显改变，说明造成大鼠腹泻模型成功[5]。

3.2 柞树皮治疗作用

表1 各组腹泻指数数据表

通过对数据进行统计学分析，可以发现，使用柞树皮水煎剂治疗后的模型大鼠无论是稀便次数还是腹泻指数等指标与单纯造模的大鼠相比都具有显著差异（P＜0.05），对照组与柞树皮各剂量组对模型大鼠都具有一定的止泻作用，其中柞树皮中、高剂量组腹泻指数下降更为明显（P＜0.01，F=7.432）。

3.3 HE 染色结果

通过在光镜下观察各组结肠组织HE 染色切片，可以发现正常组大鼠肠粘膜结构完整，绒毛排列整齐，未见到组织坏死脱落，而造模后大鼠结肠肠壁黏膜部分有淋巴细胞浸润和轻度充血水肿。实验中在使用柞树皮水煎剂治疗后，对比模型组，大鼠结肠组织充血水肿情况有一定改善，黏膜组织结构未见明显异常。

4 讨论

腹泻作为一种临床常见症状，常由于各种感染性因素及非感染性因素引起，主要是指便次增多超过平日习惯的频率，粪质稀薄，含水量增加，每天排便量超过200 g， 或含未消化食物或脓血、黏液。通常还伴有排便急迫感、肛门不适、失禁等症状[6-7]。临床治疗通常采取补液纠正电解质紊乱并应用抗生素抑制肠道感染，长期使用易产生耐药性，而滥用抗生素还可能会导致肠道菌群失调，引发药源性腹泻。中药因其疗效确切、毒副作用小等因素故而在治疗急慢性腹泻方面有着其独到的优势[8]。

表2 各组大鼠结肠组织HE 染色结果（HE 染色＊400）

满药作为民族医药的一种，也是中国传统中医药的重要组成部分，现已录入满族非物质文化遗产。热河是满族的第二故乡，在进行当地药材普查中发现民间有使用柞树皮来治疗腹泻的疗法，后在对已有文献的研究中也发现有运用柞树皮煎剂治疗牲畜腹泻及小儿腹泻的临床案例存在[9-10]。通过本实验的研究可以发现，柞树皮的确具有良好的腹泻治疗作用，实验中治疗组在用药后可明显改善大鼠的稀便次数和稀便程度，对比模型组腹泻指数有显著下降，通过病理切片观察还可以发现柞树皮可以改善肠黏膜状态，对肠道的后续恢复也有一定效果。