毛菊苣中一个新的黄酮苷化合物

2020-05-12黄敏洁娄云云殷志琦

中国药科大学学报 2020年1期

翁馨，黄敏洁，娄云云，尚靖，张健，殷志琦*

（1中国药科大学中药学院中药制剂系＆天然药物活性组分与药效国家重点实验室，南京211198；2江苏省中医药研究院转化医学实验室，南京210028；3中国药科大学中药学院中药药理与中医药学系，南京211198）

毛菊苣（Cichorium glandulosum Boiss.et Huet）为菊科（Compositae）菊苣属（Cichorium）一年或二年生草木植物，花与菊苣相似，在中国新疆维吾尔自治区及周边国家广泛分布［1］。毛菊苣以地上部分或根入药，具有清热解毒、消肿利尿、消炎、健胃等功效［2］。维吾尔族民间医学常将毛菊苣作为一种利胆利尿剂，用毛菊苣水提取物治疗肝炎、胆囊炎等炎症性疾病，其疗效已在临床得到验证［3-4］。同时毛菊苣还可以改善食欲、促进消化［3］。由于毛菊苣的功效良好，近年来对毛菊苣的化学成分研究越来越受到关注。有研究发现毛菊苣主要含有香豆素、黄酮和倍半萜内酯成分［3］；Dang等［5］从毛菊苣根中获得新的倍半萜；Wu等［6］从毛菊苣茎中获得两种新的倍半萜和三萜糖苷；毛琼玲［7］从毛菊苣种子中得到麦角甾醇、孕甾烯醇酮、β-谷甾醇等；卢协勤等［8］从毛菊苣种子中分离得到 β-香树脂醇、旋覆花素；何茂群等［9］从毛菊苣根乙酸乙酯部位得到了茶碱、黄芩苷甲酯、芒柄花素、毛蕊异黄酮等；潘兰等［2］从毛菊苣全草的乙醇提取物中分离到豆甾醇-3-O-葡萄糖苷、秦皮甲素、蔗糖。现代药理学研究发现毛菊苣的乙酸乙酯和正丁醇提取物有较强的保肝作用［10］，毛菊苣还可显著降低HepG2细胞内甘油三酯和脂滴的含量而具有降血脂作用［11］。此外，毛菊苣还具有良好的降血糖作用［12］，已有菊苣胶囊、火见菌菊粉等药物上市，具有良好的应用前景。为深入探讨毛菊苣的化学成分，本研究从其地上部位的提取物中获得1个新的黄酮苷，鉴定为槲皮素-3-O-［6″-O-（3-乙氧基-1，3-二氧代丙基）］-β-D-吡喃葡糖苷（Quercetin-3-O-［6″-O-（3-ethoxy-1，3-dioxopropyl）］-β-D-glucopyranoside）。

1 材料

1.1 药材

毛菊苣地上部分由南京睿鹰润泽生物医药科技有限公司提供，中国药科大学中药学院秦民坚教授鉴定为 Cichorium glandulosum Boiss.et Huet，样本保存于中国药科大学中药制药系（No.20180928）。

1.2 仪器与试剂

旋光数据采用JASCO P-1020型数字旋光仪测定；紫外光谱采用Shimadzu UV-2501紫外可见分光光谱仪测定；红外光谱经Nicolet Impact 410型红外光谱仪测定（KBr压片）；ESI-MS和HR-TOF-MS分别采用Bruker amazon SL离子阱液相色质谱联用仪和Agilent Q-TOF 6520型质谱仪测定；核磁共振光谱经Bruker AV 500型核磁共振仪（1H NMR 500 MHz，13C NMR 125 MHz）测定；Alliance制备液相色谱仪（美国LabAlliance公司）和Cosmosil C18半制备色谱柱（江苏汉邦科技有限公司）用于本研究化合物制备纯化。柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产；高效硅胶薄层色谱板Silica gel 60 F254和ODS（C18）均为德国 Merck公司产品；Sephadex LH-20购自美国Pharmacia公司；色谱级甲醇和乙腈均购自上海星可高纯溶剂有限公司；其他试剂均为市售分析纯。

2 提取与分离

将干燥的毛菊苣地上部分粉碎成粗粉（2 kg），用8倍量的95%乙醇加热回流提取3次，每次提取2 h。提取液合并后经减压浓缩至无醇味，得浸膏（166 g）。再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取该浸膏，得各个萃取部位。将乙酸乙酯萃取部位（25.4 g）溶解后加硅胶拌样，采用硅胶（200～300目）柱色谱，并以氯仿-甲醇（1∶0→0∶1）梯度洗脱，得到8个洗脱组分（Fr.1～8）。Fr.4经ODS反相柱色谱，以甲醇-水（5∶95-100∶0）梯度洗脱后；再以氯仿-甲醇（1∶1）为洗脱剂，经 Sephadex LH-20柱色谱分离；最后经半制备HPLC（18%乙腈-水）等度洗脱纯化，得到化合物1（6.0 mg，图1）。

Figure 1 Structures of compound 1 and reference compound 2 from Cichorium glandulosum

3 结构鉴定

化合物1 黄色粉末（甲醇），［α］20D-14.7°（c 0.1，MeOH），易溶于甲醇，盐酸-镁粉反应和Molish反应均呈阳性，原位薄层酸水解检出D-葡萄糖，显示该化合物为黄酮苷类化合物。HR-TOFMS显示准分子离子峰 m／z:601.117 1［M＋Na］＋（C26H26NaO15，Calcd.601.116 9），确定其分子式为C26H26O15，相对分子质量为578。UV谱显示其最大吸收波长为204、265、351 nm。IR光谱显示羟基（3 427 cm-1）、羰基（1 657 cm-1）和苯环的骨架振动（1 603、1 498、1 458 cm-1）等特征吸收峰。

1H NMR谱显示 δ7.53（1H，br.s）、7.51（1H，m）和6.82（1H，d，J＝8.0 Hz）为一组 1，3，4-三取代芳环质子的信号，提示B环可能为3′，4′-取代；δ 6.38（1H，d，J＝2.0 Hz）、6.17（1H，d，J＝2.0 Hz）为A环质子信号，提示A环为5，7-二取代；δ5.41（1H，d，J＝7.5 Hz）为葡萄糖的端基氢质子信号，偶合常数提示为β构型。δ3.17～4.22为糖环上其他氢信号。13C NMR谱共显示26个碳信号，其中δ177.2为羰基碳信号，δ121.0、116.1、115.2、98.9、93.6为黄酮苷元 5个次甲基碳信号，δ 165.2、161.2、156.4、156.3、148.7、144.9、133.0、121.5、103.5为黄酮苷元的9个季碳信号，δ101.0为葡萄糖的端基碳信号。δ63.9～76.2为糖环上其他连氧碳信号。将化合物1的碳氢数据与文献报道的化合物2［13］对照，两者黄酮母核信号相同，但化合物1较化合物2多出一组乙基信号，提示化合物1为化合物2的丙二酰基被3-乙氧基-1，3-二氧代丙基所替代的衍生物。

在HMBC谱中可观察到，δH-1″5.41与δC-3133.0有相关信号，证实葡萄糖glc″连接在母核的3位；δH-10″3.97与 δC-9″166.1、δC-11″13.8有相关信号，再根据C-10的位移，说明化合物1含有-COOCH2CH3结构片段；δH-6″a4.22、δH-6″b4.00与 δC-7″166.2有相关信号，δH-8″3.18与 δC-7″166.2、δC-9″166.1有相关信号，结合C-8的位移，说明化合物1含有-COOCH2-片段；综上说明glc″连接在母核的3位，glc″的6位连有-OCOCH2COOCH2CH3片段（图2）。

Figure 2 Key HMBC（H→C）correlations of compound 1

综合上述解析，化合物1的结构鉴定为槲皮素-3-O-［6″-O-（3-乙氧基-1，3-二氧代丙基）］-β-D-吡喃葡糖苷，即 Quercetin-3-O-［6″-O-（3-ethoxy-1，3-dioxopropyl）］-β-D-glucopyranoside，经 SciFinder检索为一新化合物。

化合物1的生源途径如图3所示，黄酮类化合物前期的合成途径已经比较明确，首先通过苯丙烷、黄酮合成途径生成查尔酮，分子内环化合成二氢黄酮类化合物。而后黄酮合酶（Flavone synthase）催化其2，3位进行脱氢后形成双键，产生的黄酮类化合物糖苷化后生成槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷，经酯化后进一步合成化合物1［14］。