胃癌患者血清miR-378和miR-21表达变化及其诊断效能研究

江强

【摘要】 目的：研究胃癌患者血清微小核糖核酸-378（miR-378）和微小核糖核酸-21（miR-21）表達变化及其诊断效能。方法：选择2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者为胃癌组，同期收集62例胃良性病变患者为胃良性病变组，另选择本院门诊健康体检者69例为对照组。比较各组血清miR-378和miR-21表达情况，分析胃癌患者血清miR-378和miR-21和临床病理特征的关系，不同预后组血清miR-378和miR-21表达情况，并分析以上指标对胃癌的诊断效能。结果：三组血清miR-378和miR-21比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;对照组血清miR-378均高于胃良性病变组和胃癌组，且胃良性病变组高于胃癌组（P<0.05）;对照组血清miR-21均低于胃良性病变组和胃癌组，且胃良性病变组低于胃癌组（P<0.05）。胃癌患者血清miR-378和miR-21的表达与年龄、性别均无关（P>0.05），而与肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移均有关（P<0.05）。预后不良组血清miR-378水平低于预后良好组，miR-21水平高于预后良好组，差异均有统计学意义（P<0.05）。制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21对胃癌诊断的ROC曲线，其曲线下面积分别为0.802、0.774、0.882，灵敏度分别为0.812、0.779、0.841，特异度分别为0.703、0.770、0.824。结论：血清miR-378在胃癌患者中表达下降，miR-21表达明显上调，miR-378联合miR-21在胃癌诊断中有较高的诊断效能，可作为胃癌诊断的参考依据。

【关键词】 胃癌 微小核糖核酸-378 微小核糖核酸-21 诊断效能

[Abstract] Objective： To study the expression of microRNA-378 （miR-378） and microRNA-21 （miR-21） in serum of patients with gastric cancer and their diagnostic efficacy. Method： A total of 74 patients with gastric cancer admitted to our hospital from March 2015 to December 2017 were selected as gastric cancer group， at the same time， 62 patients with gastric benign lesions were collected as gastric benign lesions group， in addition， 69 outpatients were selected as the control group. The expression of miR-378 and miR-21 were compared， the relationship between serum miR-378 and miR-21 and clinicopathological characteristics of gastric cancer patients， the expressions of serum miR-378 and miR-21 in different prognosis groups were analyzed， and the diagnostic efficacy of the above indicators for gastric cancer was analyzed. Result： The serum miR-378 and miR-21 of the three groups were compared， the difference was statistically significant （P<0.05）. The serum miR-378 of the control group were higher than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， the benign lesion group was higher than the gastric cancer group （P<0.05）. The serum miR-21 of the control group were lower than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， and the benign lesion group was lower than the gastric cancer group （P<0.05）. The expression levels of serum miR-378 and miR-21 in gastric cancer patients were not correlated with age and gender （P>0.05）， but they were correlated with tumor diameter， tissue differentiation， TNM stage， tumor invasion depth and lymph node metastasis （P<0.05）. The level of miR-378 in the poor prognosis group was lower than that in the good prognosis group， and the level of miR-21 was higher than that in the good prognosis group （P<0.05）. The ROC curves of miR-378， miR-21 and miR-378 + miR-21 in the diagnosis of gastric cancer were made， the area under the curve were 0.802， 0.774 and 0.882， the sensitivity were 0.812， 0.779 and 0.841， and the specificity were 0.703， 0.770 and 0.824. Conclusion： The expression of miR-378 in serum decreased and miR-21 was up-regulated in patients with gastric cancer. The combination of miR-378 and miR-21 has a high diagnostic efficiency in the diagnosis of gastric cancer， which can be used as a reference for the diagnosis of gastric cancer.[Key words] Gastric Cancer MicroRNA-378 MicroRNA-21 Diagnostic efficiencyFirst-authors address： Taian Cancer Prevention and Treatment Hospital， Taian 271000， China

胃癌为临床最常见的恶性肿瘤之一，具有进展快、预后差等特点，严重危及患者生命安全。临床研究报道，早期进行根治术治疗是延长胃癌患者生存率的最佳手段[1]，但早期胃癌缺乏特异性症状，大部分患者就诊时已进展至中晚期，错过了最佳治疗时机。影像学检查存在一定局限性，靶组织活检作为一种侵入性检查，确诊率高，但存在一定的取样误差，影响对疾病的评价[2]。目前临床上缺乏较为灵敏的胃癌诊断标志物，癌胚抗原和糖类抗原的特异性和灵敏度较低。微小核糖核酸（miRNA）具有高度保守性、时序性、稳定性和组织特异性，可耐RNA酶降解，在肿瘤发生发展中有重要作用，是目前肿瘤分子生物学研究的重点[3]。其中miR-21在多种肿瘤组织和细胞中过表达，能够参与肿瘤的生长、侵袭、转移及耐药等反应，黄新造等[4]研究发现，miR-21高表达和肿瘤患者不良预后有关。miR-378为重要的相关基因调控位点，最新研究发现其异常表达和宫颈癌、卵巢癌等相关，但在胃癌中的生物功能报道较少[5]。尽管组织miR能够为肿瘤提供精确诊断，但其过程复杂、且创伤明显，容易伤及胃黏膜，从而限制其在肿瘤诊断筛查中的应用。血液样本具有获取方便、稳定性高等特点，相关研究发现，血清miRNA可作为多种恶性肿瘤诊断和预后的分子标记物。本研究主要分析胃癌患者血清miR-378和miR-21表达变化及其诊断效能，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者，纳入标准：（1）临床明确诊断为胃癌;（2）预计生存期超过3个月;（3）未接受放化疗;（4）心肝肾等无明显异常，且外周血常规、心电图基本正常[6]。排除标准：（1）其他部位原发肿瘤;（2）急性感染或机体严重创伤;（3）妊娠或哺乳期妇女;（4）胃癌复发。将74例胃癌患者作为胃癌组，同期收集62例胃良性病变患者作为胃良性病变组，另选择本院门诊健康体检者69例作为对照组。患者均知情同意本研究，研究经本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 病史采集 记录胃癌患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度、TIM分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移等情况。

1.2.2 样本检测 采集各组受试者空腹外周静脉血4 mL，放置于不含乙二胺四乙酸试管，在室温下放置1 h，常规离心后放置于-80 ℃低温箱中保存待检。采用实时荧光定量PCR反应检测miR-378和miR-21表达情况，以2-ΔΔCt表示miRNA的相对表达量。

1.2.3 随访 胃癌患者均以电话、门诊等方式进行1年随访，入组日期即为随访起始日期，至随访结束、失访或者死亡为截止日期。

1.3 观察指标及判定标准 （1）比较三组血清miR-378和miR-21表达情况;（2）分析胃癌患者血清miR-378和miR-21的表达和各项临床指标的关系;（3）比较胃癌患者不同预后组血清miR-378和miR-21的表达，无远处转移、复发和死亡者判定为预后良好，有远处转移或复发或死亡者判定为预后不良;（4）分析血清miR-378和miR-21对胃癌的诊断效能。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两组间选用独立样本t检验，多组间采用方差分析;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析指标对胃癌的诊断效能，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较 胃癌组74例，男40例，女34例;年龄41～68岁，平均（58.14±5.82）岁。胃良性病变组62例，男36例，女26例;年龄38～67岁，平均（56.95±6.27）岁。肠上皮化生28例，胃窦炎性息肉20例，胃窦溃疡14例。对照组69例，男38例，女31例;年龄36～69岁，平均（57.48±4.84）岁。三组性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 三组血清miR-378和miR-21比较 三组血清miR-378和miR-21比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;对照组血清miR-378均高于胃良性病变组和胃癌组，且胃良性病变组高于胃癌组（P<0.05）;对照组血清miR-21均低于胃良性病变组和胃癌组，且胃良性病变组低于胃癌组（P<0.05），见表1。

2.3 胃癌患者不同预后组血清miR-378和miR-21的表达比较 预后不良组血清miR-378水平低于预后良好组，miR-21水平高于预后良好组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表达和各项临床指標的关系分析 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表达与年龄、性别均无关（P>0.05），而与肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移均有关（P<0.05），见表3。

2.5 血清miR-378和miR-21对胃癌的诊断效能分析 制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21对胃癌诊断的ROC曲线，其曲线下面积分别为0.802、0.774、0.882，灵敏度分别为0.812、0.779、0.841，特异度分别为0.703、0.770、0.824，见表4和图1。

3 讨论

胃癌是源自于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，全肿瘤流行病统计数据发现，目前胃癌的发生率呈上升趋势，是导致恶性肿瘤患者死亡的主要疾病之一[7]。临床研究已表明，早期胃癌经正规治疗的5年生存率在85%以上[8]。因此尽早诊治是提高胃癌疗效和改善预后的最有效方式，但我国胃癌早期诊断较为困难，发现时多已经处于中晚期。胃癌的发生是复杂的生物学过程，近年来随着对恶性肿瘤异质性研究的深入和分子生物学的进展，多个研究表明，肿瘤发生发展中miRNA可起到类似癌基因和抑癌基因的作用，从而调节肿瘤细胞的增殖及凋亡等反应，影响肿瘤生物学行为[9-10]。miRNA为小分子调控RNA，疾病状态下表达谱出现异常改变，从而引起癌变的系列反应。血液中miRNAs具有稳定性高、检测损伤小等特点，目前研究已证实多种miRNAs和肿瘤发生有良好相关性[11]。

miR-378能够作用于丝裂原活化蛋白激酶1，抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭，影响其细胞周期，诱导细胞凋亡[12]。黄声凯等[13]研究报道，miR-378在胃癌组织中的表达明显下调，起到抑癌基因作用，通过增强胃癌细胞miR-378的表达，可促进胃癌增殖、侵袭和凋亡等胃癌生物学作用。Treece等[14]通过研究发现，miR-378低表达可能影响化疗药物的敏感性，导致化疗药物耐药，影响化疗疗效。又有研究发现，肺癌中miR-378高表达者生存期相对较长[15]。以上研究表明miR-378可能对肿瘤的发生发展可能起到负调控作用。本研究结果显示，三组血清miR-378比较，差异有统计学意义（P<0.05）;对照组血清miR-378均高于胃良性病变组和胃癌组，且胃良性病变组高于胃癌组（P<0.05），提示miR-378可能作为抑癌基因参与胃癌发病。另有研究发现，miR-378表达和恶性肿瘤生物学行为有一定相关性[16]。本研究也显示，miR-378表达和不同肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度和淋巴结转移有差异。进一步分析发现，预后良好组miR-378水平较预后不良组高，预后不良组血清miR-378水平低于预后良好组，差异均有统计学意义（P<0.05），说明miR-378表达能够反映胃癌患者预后。但目前有关胃癌患者中miR-378的诊断效能缺乏客观依据，本研究中ROC曲线分析显示，胃癌患者血清中miR-378曲线下面积为0.802，且有较高灵敏性和特异性，表明miR-378在胃癌诊断上有较高的准确性，此为miR-378作为癌症诊断的潜在标志提高了理论基础。

miR-21作为一种癌基因，可参与细胞增殖、分化、凋亡等反应，与肿瘤生长、侵袭和转移相关，在多种恶性肿瘤中的表达上调，可能成为肿瘤早期诊断的标志物[17]。缺氧条件下，miR-21可抑制细胞增殖，影响DNA在损伤修复中的能力，利于血管再生，从而在肿瘤发生发展中起到重要作用[18]。已有研究报道，miR-21在肾癌等恶性肿瘤中的表达上调，导致肿瘤的发展和转移[19]。且有研究发现，对奥沙利铂耐药的胃癌患者miR-21表达显著上调，下调miR-21表达能够增加化疗药物敏感性[20]。本研究显示，胃癌患者血清miR-21呈高表达，和胃癌患者多种肿瘤生物学行为相关，说明其可参与胃癌形成，促进癌基因作用，为胃癌诊断提供一定参考依据。胃癌miR-21低表达者的疗效优于高表达者，且miR-21低表达者的3年存活率显著高于高表达者，提示其和患者不良预后有一定相关性[18]。Sekar等[21]通过研究发现，miR-21高表达可作为胃癌患者预后的独立危险因素。本研究显示，预后良好组血清miR-21水平较低，证实其和胃癌患者预后的关系。且本研究发现，miR-21对胃癌诊断的ROC曲线为0.774，表明miR-21有着较高的诊断价值，能够有效鉴别胃部良恶性病变。将miR-378和miR-21二者并联试验发现，曲线下面积较miR-378和miR-21单独检测大，说明联合检测可提高胃癌的诊断效能。

综上所述，血清miR-378在胃癌患者中表达下降，miR-21表达明显上调，miR-378联合miR-21在胃癌诊断中有较高的诊断效能，可作为胃癌诊断的参考依据。

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（收稿日期：2019-09-18） （本文编辑：姬思雨）