花叶海棠组织培养技术分析

达焕云

（青海省玛可河林业局王柔林场，青海班玛 814300）

1 花叶海棠的生长习性

花叶海棠生长在丛林或丘陵中，海拔为1 500～4 000 m，属于蔷薇科苹果属植物[1]。长势良好的花叶海棠，其植株高度能达到8 m，枝叶呈细长圆柱形，花朵为伞状，花朵数量一般为4～6朵。当果实成熟后，呈现为小球状，5月开花、9月结果。在我国，花叶海棠主要分布在四川、甘肃、青海、内蒙古地区，兼具经济价值和药用价值，因此已经大规模广泛种植，显著提高了当地的经济水平。但是，花叶海棠的培育种植难度大，不仅种子发芽率低，而且枝条采集数量有限，使得组织培养技术研究工作具有重要意义[2]。

2 花叶海棠组织培养的试验方法

花叶海棠来源于青海省玛可河林区，选择萌发的半木质化枝条，枝条生长健康，经检查没有病虫害。具体的试验操作如下。

2.1 消毒将花叶海棠枝条上的茎、叶剪掉，枝条分段，每段长度为15～20 cm，然后使用洗衣粉刷洗，并在流水下冲洗30 min。在工作台上，先用酒精振荡消毒5 min，再用氯化汞溶液振荡消毒10 min，最后使用无菌水清洗5～8次。完成后，剪成长度为1.5 cm的小段，放在MS培养基上培养，温度设置为23～25 ℃，pH值为5.8～6.0。在培养过程中，加入不同浓度的细胞分裂素、不同类型的生长素，光照时间12 h/d，强度为 2 500 ～ 3 000 Lx。

2.2 芽诱导在MS培养基的基础上，加入0.6%琼脂、3%蔗糖，然后添加不同浓度的6-BA、IAA、NAA，观察发芽时间、诱导率、生长情况。结果显示：对于1.0 mg/L的5-BA、1.5 mg/L的IAA、0.2 mg/L的NAA，花叶海棠的诱导率最高为92.6%，发芽率最高为72.0%，叶片呈绿色，生长健壮，形成丛生芽。

2.3 分化培养在诱导后的腋芽中分别选择100株，接种在加入不同浓度的6-BA、NAA培养基上，15 d后观察腋芽的生长和分化情况。结果显示：对于1.0 mg/L的6-BA、0.1 mg/L的NAA、6.5 g/L的琼脂、3%的蔗糖培养基，腋芽分化系数较高为4.8，叶色绿比例最高为80%，且没有出现玻璃化、褐化。

2.4 复壮培养试管苗在培养过程中，会出现生长不良的小苗、弱苗，此时要进行壮苗培养，降低细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，以提高幼苗的生长能力。其中，6-BA浓度降低至0.5 mg/L，NAA浓度维持在0.1 mg/L，IAA浓度提高至1.0 mg/L，能有效提高幼苗移栽的成活率。

2.5 生长素幼苗经复壮培养后，进行生根诱导，加入不同浓度的生长素。选取100株高度为2～3 cm的幼苗，接种在不同浓度生长素的培养基上，观察生根情况。

2.6 试管苗移栽试管苗有3个以上根系，且根长5～8 mm，就可以转移到温室进行炼苗。7 d后，开盖炼苗3 d，取出小苗洗净培养基，移栽到不同基质上，将温度控制在25～28 ℃，湿度控制在85%～90%，10～15 d后观察移栽成活情况。

3 试验结果分析

3.1 生长素对幼苗生根的影响结果显示，1/2MS+0.6 mg/L的IBA+0.2 mg/L的NAA，以及0.6%的琼脂、1.5%的蔗糖培养基，花叶海棠幼苗的生根率最高，根系发达，生长情况良好，是试管苗生根的最佳培养基，如表1所示。

3.2 不同基质的移栽结果结果显示，草炭、蛭石、珍珠岩为2∶1∶1的基质，移栽苗的生根时间最短，生根率和成活率高，且小苗生长情况良好，是小苗移栽的最佳基质，如表2所示。

表1 不同浓度的生长素对幼苗生根的影响

表2 不同基质对幼苗的移栽结果

4 结语

花叶海棠的经济价值和药用价值高，但人工培育栽植难度大。文中通过试验分析，可知不同培养基、基质的配比，会影响发芽、生根、幼苗生长，结论如下：（1）1.0 mg/L的5-BA+1.5 mg/L的IAA+0.2 mg/L的NAA培养基，诱导发芽率最高；（2）1.0 mg/L的6-BA+0.1 mg/L的NAA+6.5 g/L的琼脂+3%的蔗糖培养基，腋芽分化情况最好；（3）1/2MS+0.6 mg/L的 IBA+0.2 mg/L的 NAA+0.6%的琼脂+1.5%的蔗糖培养基，幼苗生根率最佳；（4）草炭、蛭石、珍珠岩为2∶1∶1的基质，小苗移栽后的生根率和成活率最高。