血浆D-二聚体、干扰素γ联合检测在评估小儿肺炎支原体肺炎中的临床意义

何保瑞 刘丕松 韩志英

1山西医科大学儿科系,太原030001;2大同市第一人民医院儿童重症医学科037000;3山西省儿童医院呼吸科,太原030001

肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)是临床上常见的呼吸道疾病之一,好发于儿童、青少年群体中,也是儿童期最常见的肺炎形式,临床主要表现为发热、咳嗽、呼吸短促以及肺部干湿啰音等[1]。近年来,全球感染肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的儿科患者数量逐年增加,并呈现出低龄化趋势[2],MPP也成为我国儿童死亡的重要原因之一[3]。然而,目前基于临床症状难以对MPP做出准确的诊断或鉴别诊断,故针对MPP的实验室检查非常重要。尽管文献报道D-二聚体或干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)与肺炎相关[4],但尚未有两种指标联合检测用于评估小儿MPP价值及临床意义的研究。本研究旨在探究血清D-二聚体、IFN-γ对评估小儿MPP的价值,为临床上应用这两种生化标志物诊断小儿MPP及预测预后提供一定的理论依据。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2017年10月至2018年11月大同市第一人民医院儿童重症医学科、儿七科收治的小儿MPP患者85例,其中男49例,女36例,年龄(4.34±2.25)岁,年龄范围为1～9岁;按病情严重程度分为轻症MPP组(45例)和重症MPP组(40例),所有患者均根据临床表现、病史、X线胸片检查和实验室检查结果确认诊断,均符合 《诸福棠实用儿科学》中所述的MPP诊断标准[5],对发热持续时间＞10 d,有肺部严重临床表现的患者,如胸腔积液、肺实变、坏死性肺炎、肺脓肿、支气管扩张等,归为重症MPP组[6]。排除存在以下因素的患者：(1)存在肺结核、支气管哮喘、腹泻、贫血、肝肾疾病、先天性心脏病或先天性免疫缺陷病者;(2)合并病毒、细菌或其他病原体感染者;(3)长期使用免疫抑制剂与激素者;(4)近期有创伤、手术者。另外,纳入同期在本院接受体检的40例健康儿童,作为对照组。该研究符合2013年修订的 《赫尔辛基宣言》的要求,所有受试者家属均同意参加并签署知情同意书。

1.2 检查方法 患儿均于入院后及治疗24 h后、治疗120 h后采用免疫比浊法测定血浆D-二聚体水平、采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定IFN-γ水平并记录,并检测同期体检的对照组受试者,具体步骤如下。

1.2.1 血浆D-二聚体检测 采集清晨空腹静脉血样本各5 ml,置于枸橼酸钠抗凝剂的真空管,离心半径15 cm,3 000 r/min离心10 min,再将血浆移入避光的干燥管中,使用ESR测试试剂盒和免疫比浊法测定D-二聚体水平。上述步骤均于全自动血液分析仪中进行,操作步骤严格按试剂盒说明进行。

1.2.2 血清IFN-γ检测 收集清晨空腹血样本各5 ml,置于离心机中,离心半径15 cm,3 000 r/min离心10 min,取上清(血清)储存于-80℃的冰箱中待测。采用ELISA法检测血清IFN-γ水平,操作步骤严格按试剂盒说明进行。

1.3 统计学分析 应用SPSS 23.0软件进行分析,计量资料以描述,计量资料比较采用独立样本t检验或单因素方差分析,计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受试者一般资料的比较 3组受试者的性别和年龄组间比较,差异无统计学意义,具有可比性(P＞0.05)。在轻症和重症MPP组中,出现发热和咳嗽症状,X线胸片异常和MP抗体检测阳性反应的患者数量相当,2组间差异无统计学意义(P＞0.05),见表1。

表1 3组受试者一般资料的比较

2.2 治疗前轻、重症MPP患者和对照组D-二聚体、IFN-γ水平的比较 治疗前,经单因素方差分析显示,轻症MPP组D-二聚体水平明显高于对照组,并明显低于重症MPP组,差异均有统计学意义(P＜0.05);轻症MPP组IFN-γ水平明显高于对照组,并明显低于重症MPP组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 治疗前3组受试者D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

表2 治疗前3组受试者D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

注：IFN-γ为干扰素γ;MPP为肺炎支原体肺炎;与对照组比较,a P＜0.05;与轻症MPP组比较,b P＜0.05

组别 例数 D-二聚体(mg/L)IFN-γ(ng/L)对照组 40 0.09±0.10 23.03±3.19轻症MPP组 45 0.41±0.23a 32.18±4.40a重症MPP组 40 0.62±0.27ab 45.45±4.12ab F值 62.584 324.851 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.3 2组患者治疗后D-二聚体和IFN-γ水平的比较 与治疗24 h后的水平相比较,治疗120 h后2组患者的血浆D-二聚体水平、IFN-γ水平显著降低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。重症MPP组在治疗24 h及120 h后两个指标的水平显著高于轻症MPP组(P值均＜0.05),见表3。

表3 MPP患者治疗后D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

表3 MPP患者治疗后D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

注：MPP为肺炎支原体肺炎;IFN-γ为干扰素γ;与同组治疗24 h后比较,a P＜0.05

组别 例数 D-二聚体(mg/L)IFN-γ(ng/L)治疗24 h后 治疗120 h后 治疗24 h后 治疗120 h后轻症MPP组 45 0.46±0.19 0.21±0.11a 25.17±4.41 17.64±3.99a重症MPP组 40 0.70±0.23 0.35±0.19a 48.29±5.33 36.84±4.50a t值 5.266 4.214 21.874 20.852 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 轻、重症MPP组有无合并肺外症状的D-二聚体和IFN-γ水平的比较 根据患者病情轻重及有无合并肺外症状,将其分为4组,即轻症MPP合并肺外症状组、轻症MPP无肺外症状组、重症MPP合并肺外症状组、重症MPP无肺外症状组。由方差分析结果可知：(1)4组之间D-二聚体差异有统计学意义(F=17.582,P＜0.05),其中重症MPP合并肺外症状组高于轻症MPP合并肺外症状组、轻症MPP无肺外症状组和重症MPP无肺外症状组;(2)4组之间IFN-γ差异有统计学意义(F=76.587,P＜0.05),其中重症MPP合并肺外症状组和重症MPP无肺外症状组均高于轻症MPP合并肺外症状组、轻症MPP无肺外症状组,重症MPP合并肺外症状组高于重症MPP无肺外症状组。见表4。

表4 轻、重度MPP有无合并肺外并发症的D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

表4 轻、重度MPP有无合并肺外并发症的D-二聚体和IFN-γ水平的比较()

注：MPP为肺炎支原体肺炎;IFN-γ为干扰素γ;与轻症MPP合并肺外症状组比较,a P＜0.05;与轻症MPP无肺外症状组比较,b P＜0.05;与重症MPP合并肺外症状组比较,c P＜0.05

组别 例数 D-二聚体(mg/L)IFN-γ(ng/L)轻症MPP合并肺外症状组 10 0.42±0.15 33.53±4.68轻症MPP无肺外症状组 35 0.41±0.12 31.79±4.18重症MPP合并肺外症状组 24 0.75±0.24ab 49.65±5.21ab重症MPP无肺外症状组 16 0.43±0.11c 39.15±4.33abc F值 17.582 76.587 P值 ＜0.05 ＜0.05

3 讨论

MPP是由支原体感染引起的肺泡、气道或肺间质的炎症[7-8],也是一种常见的儿科疾病,严重危害着小儿的身体健康[9],引起国内外儿科同行的广泛关注。在诊断方面,由于临床症状的非特异性,目前仍难以准确辨别与MP感染相关的小儿肺炎。然而延迟诊断不仅会增加患者发生呼吸系统不可逆损害的风险,还可能导致心肌损害、胸腔积液、中枢神经系统损害等多个器官和系统受到的损伤[10]。因此,为避免延误病情,减少预后风险等,准确、快速、及时地识别儿童MPP至关重要,已应成为临床工作研究的重点。据报道,MP的潜伏期较长,感染后引发的免疫反应在MPP的发生和发展中起重要作用。因此,研究与MP感染相关的血液学免疫检查已成为近年来的热门方向[11]。

D-二聚体是纤维蛋白单体与活化因子结合活化后的降解产物,也是纤维蛋白溶解系统的特异性标志物,可反映机体的凝血功能及纤维活性。在临床中,D-二聚体可反应病情轻重和炎症程度,提示机体合并有高凝状态[12]。MP在机体内能够激活多种细胞因子的表达,破坏血管壁,导致局部小微血管发生闭塞或炎症,激活内源性凝血系统,调控纤维蛋白原及活化补体,使机体处于高凝状态,促进血栓形成,导致D-二聚体浓度增加[3]。此外,随着病情进展,MPP患者出现呼吸加快、发热等因素能够诱导机体出现不同程度的脱水及缺氧,刺激炎症细胞释放多种炎症介质,进一步加重血管内皮细胞损伤,加剧机体血液的高凝状态,导致血浆D-二聚体水平显著增加[13]。IFN-γ是一种调节细胞功能的小多肽,在细胞介导的免疫调节中起重要作用[14]。一方面,小儿受到支原体感染后,支原体本身及其代谢物质进入机体,刺激人体内T淋巴细胞,活化的CD4+T淋巴细胞能够释放大量的IFN-γ,进而激活巨噬细胞,提高其与溶酶体活化程度;另一方面,IFN-γ促进T细胞分化成细胞毒性CD4+Th1和CD8+Tc1 T细胞亚群。此外,IFN-γ可激活中性粒细胞和血管内皮细胞,从而促进内皮细胞分泌和黏附[15]。因而,IFN-γ可反映支原体感染后人体的免疫状态。

本研究结果显示,轻症和重症MPP组D-二聚体和IFN-γ水平均显著高于对照组,且重症MPP组显著高于轻症MPP组,表明D-二聚体和IFN-γ水平异常升高预示着患儿处于MP感染阶段,且两者升高水平越高,表明病情越严重。治疗120 h后,再次检测MPP患者的D-二聚体和IFN-γ水平,结果显示,两项指标的水平均有明显下降,然而重症MPP组仍显著高于轻度MPP组。分析显示,D-二聚体和IFN-γ水平与重症MPP患者是否出现肺外症状有密切关系,对于出现肺外症状的患者,两者的表达水平显著升高,但其与轻症MPP患者是否出现肺外并发症关系不大。在MPP的患者中,过度表达的炎性细胞因子持续刺激血管内皮细胞,造成血管内皮细胞损伤,引起血管内皮功能障碍,同时扰乱了凝血、抗凝和纤维蛋白溶解之间的平衡,最终导致患者D-二聚体水平的升高,使患者处于血液高凝状态[16]。在MP感染早期,免疫反应起着重要作用,机体可通过分泌IFN-γ直接抑制病原体的生长并参与体内免疫应答。本研究结果也显示,小儿MPP患者的血清IFN-γ水平与疾病严重程度密切相关,故可通过检测MPP患者的血清IFN-γ水平来评估病情的严重程度,从而使患者得到及时正确的治疗。

综上,小儿MPP患者外周血中存在D-二聚体和IFN-γ异常增高,且增高水平与病情严重程度有关,是反应MPP进展的可靠指标,联合检测儿科患者的D-二聚体和IFN-γ水平能够辅助MPP患儿的快速诊断,评估MPP的严重程度及治疗效果,预测重症MPP患儿肺外并发症的发生,有利于指导临床治疗。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突