结核病患者外周血T淋巴细胞亚群及ADA检测意义的探讨

马赛君，张宝华

（联勤保障部队第900医院梅峰院区检验科，福建 福州 350003）

结核病是由结核分支杆菌引起的传染性疾病，具有传染性强、病程缓慢、可累计全身多个器官等临床特征[1]，发病率及患者的病死率均较高，严重危害到人类的生命健康[2]。其中以肺结核最为常见，约占发病总数的80%-90%，其余为肝、脑、肠、淋巴等肺外结核[3]。由于结核病的免疫主要是T细胞介导细胞免疫，机体T淋巴细胞亚群对结核病的发生、发展意义重大。研究表明T淋巴细胞亚群的异常是结核病灶存在与发展的基础[4]。另外ADA是一种对机体细胞免疫活性有重要作用的核酸代谢酶[3]，在T淋巴细胞的分化与成熟过程中不可或缺[4]，其活性可以反映机体的免疫功能状态，并且与T淋巴细胞亚群比例变化具有一定的相关性[5]。为此我们对82例结核患者外周血中T淋巴细胞亚群及ADA活性进行检测，旨在探讨二者的变化规律及与结核病的相关性，以期为临床诊断与治疗提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年5月至2018年5月，在本院接受住院治疗的结核病患者84例。结核病确诊按照《临床诊疗手册（结核病分册）》[6]，经结核分枝杆菌培养及临床确诊。排除肿瘤、免疫系统疾病、服用免疫抑制药物的患者及哺乳期妇女、孕妇等。同时按发病部位将87例患者分为肺结核组63例和肺外结核组24例。其中肺结核组中，男46例，女17例，年龄15-81岁，平均(50.4±19.6)岁。肺外结核组中，男17例，女7例，年龄17-82岁，平均(42.0±20.2)，其中结核性胸膜炎15例，结核性脑膜炎3例，颈部淋巴结核3例，泌尿系统结核2例，附睾结核1例。随机选择我院同期健康体检20例作为对照组,其中男11例，女9例，年龄22-80岁，平均(47.0±17.5)。各组对象的一般资料比较差异均无显著性( P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 仪器与试剂

主要仪器：美国BD公司FACSCalibur四色流式细胞仪和美国Beckman AU5800 全自动生化分析仪。主要试剂：淋巴细胞亚群检测试剂盒(美国BD公司)，ADA检测试剂盒（宁波美康生物科技股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 T淋巴细胞亚群检测

1)将每个患者30µl乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血加入试管底部同时加入10µl CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC单克隆抗体充分混匀，避光，室温孵育15分钟。

2)溶血：向管中加300ul1×BD lysing solution，避光，室温孵育10分钟。

3)打 开Work listmanager 软件，在Panel 中选择“CD3CD8CD45CD4”，调出仪器质控条件，开始检测样本。分析CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞百分比，计算出CD4+/CD8+比值。

1.3.2 ADA活性检测：应用全自动生化分析仪测定结核患者以及健康对照组的血清腺苷脱氨酶（ADA）的总活性。

1.4 统计学处理

应用SPSS19.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。计数资料采用x2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同年龄阶段结核患者T淋巴细胞亚群、ADA检测结果比较

将不同年龄阶段的结核患者分为4个组别（＜30岁、31-50岁、51-70岁、＞70岁），T检验与方差分析结果如表1所示：31-50岁与51-70岁组患者的CD3+、CD4+T淋巴细胞表达率明显高于高龄组患者（＞70岁），差异显著（P＜0.05），这与井楠[7]等的研究结果一致，说明结核病高龄患者的细胞免疫水平相较于中青年患者更为低下；其余指标如CD8+、CD4+/CD8+及ADA，各组的检测结果差异均无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 T淋巴细胞亚群、ADA检测结果比较

结核患者与健康对照组T淋巴细胞亚群及ADA检测结果统计详见表2：结核患者CD3+、CD4+T淋巴细胞表达率均低于健康对照组，ADA活性则高于健康对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而CD8+T淋巴细胞表达率、CD4+/CD8+表达率比值两个指标的差异无统计学意义（P＞0.05）；另外肺结核组与肺外结核组相比，各指标的差异也无统计学意义。

表1 结核患者各年龄阶段T淋巴细胞亚群、ADA结果分析(±s)

表1 结核患者各年龄阶段T淋巴细胞亚群、ADA结果分析(±s)

注：与＞70岁组比较，aP＜0.05

组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ ADA＜30岁 25 66.0±11.2 33.6±8.2 29.6±9.4 1.3±0.6 15.8±6.631-50岁 23 68.9±7.2a 37.3±8.8a 28.4±8.5 1.5±0.6 15.5±7.551-70岁 22 66.9±8.0a 39.7±8.5a 24.5±8.7 1.8±0.9 14.9±8.7＞70岁 17 60.2±12.8 29.8±10.5 28.3±9.7 1.4±0.6 16.5±9.2 F 2.671 4.686 1.326 1.437 0.138 P 0.049 0.004 0.277 0.238 0.937

表2 结核患者与健康对照组T淋巴细胞亚群与ADA结果分析(±s)

注：与对照组比较，aP＜0.05，

组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ ADA肺结核组 63 65.6±10.5a 34.6±9.9a 28.2±9.6 1.4±1.2 14.6±6.9a肺外结核组 24 66.5±9.3a 35.7±8.2a 29.1±7.9 1.3±0.5 18.5±9.3a健康对照组 20 72.6±4.4 42.2±4.3 27.5±5.3 1.6±0.5 8.5±1.4 F 4.239 4.913 0.496 1.533 11.478 P 0.017 0.009 0.610 0.221 0.000

3 讨 论

由于结核杆菌是胞内寄生菌，机体的抗结核免疫以细胞免疫为主，并且主要取决于T淋巴细胞[2]。在正常生理状态下，T淋巴细胞亚群数量与比例相对稳定，如若失衡则可能造成机体免疫力下降，容易受病菌侵袭[2,8]。大量研究[9-12]表明结核病患者的外周血T淋巴细胞亚群存在异常改变的现象。然而有部分实验结果不一致，如关于CD4+T淋巴细胞表达率与CD8+T淋巴细胞表达率，Leung WL[9]等研究发现结核患者外周血中上述指标与健康对照组比较时没有显著差异，但略有升高趋势；周颖[10]等则发现肺结核组的上述指标（绝对值水平）均显著低于正常组；王景胜[11]等认为结核患者CD4+T淋巴细胞表达率明显低于正常组，而CD8+T淋巴细胞表达率明显高于正常组。

本文采用流式细胞术对结核病患者T淋巴细胞亚群进行检测，发现结合患者外周血中CD3+、CD4+T淋巴细胞比例与健康对照组相比明显降低，差异有统计学意义，这与大部分文献[10-11]报道一致；CD8+淋巴细胞表达率与健康对照组相比略有增加，不过无统计学差异（P＞0.05），与Leung WL[9]等报道一致；CD4+/CD8+比值与对照组相比略有下降，无统计学差异（P＞0.05）。众所周知，机体的抗结核免疫力与T淋巴细胞密切相关，尤其是CD4+T淋巴细胞[12]，故CD4+T淋巴细胞表达率下降能反映出结核患者的免疫功能不良。近年来研究者逐渐重视CD8+T淋巴细胞在结核病诊断中的作用，虽然有结果显示CD8+T淋巴细胞表达率在结核患者外周血中显著增高[11]，但仍有争议；如杨铭等[12]统计发现1561名肺结核患者中有743例CD8+T淋巴细胞降低（占47.60%），而升高的患者较少。因此，结核患者外周血T淋巴细胞亚群相对于健康对照组，其最典型的特点为CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞的表达率减少，且CD3+T淋巴细胞减少的原因主要是CD3+CD4+T淋巴细胞减少导致，而CD8+T淋巴细胞与结核病的关系则有待更深入研究。

ADA在血液细胞中以T淋巴细胞含量最为丰富[13]。目前主流观点认为：ADA是促进T淋巴细胞分化成熟的成分，持续高活性的ADA能够使T淋巴细胞处于旺盛的增殖状态[4]；其活性可反映细胞免疫的功能状态，是活动性肺结核辅助性T淋巴细胞(CD4+)的一种标志物[13]。然而也有观点认为外周血ADA水平缺乏特异性，对活动性肺结核的诊断意义有待进一步考察[14]。本研究显示肺结核和肺外结核患者外周血ADA水平均显著增高，与健康对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；其中肺结核患者的结果与冯晓朦[13]等报道一致；另外关于肺外结核患者外周血ADA的研究相对较少，但也有文献[3]报道肺外结核患者ADA水平显著增高，阳性率达84.9%。鉴于ADA在T淋巴细胞的分化与成熟促进作用，故推测结核患者外周血ADA水平增高极有可能为机体免疫功能失调导致的代偿性增高。因此，检测外周血ADA水平对于结核病具有一定辅助诊断价值。

综上所述，结核病患者的免疫功能存在一定的紊乱，检测外周血T淋巴细胞亚群尤其是CD3+T、CD4+T表达率并综合考虑ADA水平，有助于了解病人的免疫功能状态，可以为临床疑似病例的诊断、病情动态监控及预后提供一定依据。