MiR-141在膀胱癌组织中的表达及与肿瘤分级的相关性研究*

晓 映，李文光，吴 优，张 华，张跃平

(1 南通大学附属医院泌尿外科，南通 226001；2 南通大学杏林学院)

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，膀胱癌发病率为6.61/10万，列恶性肿瘤发病率第9位，其发病率随年龄增长而升高[1]。近年来膀胱切除术、放化疗等广泛应用于膀胱癌治疗，患者死亡率有所下降，但因其易复发转移，5年生存率仍较低[2]。因此深入探讨膀胱癌发病机制对提高膀胱癌患者生存质量尤为重要。微小RNA(micro RNA,MiR)-141是一种小的内源性非编码RNA分子，可通过与不同靶点结合来抑制或促进癌细胞增殖、分化及转移[3]。研究[4-6]发现MiR-141在结直肠癌、非小细胞性肺癌、胃癌中表达增高，但未见其在膀胱癌组织中表达及与肿瘤分级相关性的研究。因此本研究就MiR-141在膀胱癌组织中的表达及与临床病理特征及预后的关系进行了相关探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 经南通大学附属医院伦理委员会批准，选取2012年3月—2014年3月于南通大学附属医院确诊的膀胱癌80例患者的癌组织及癌旁正常组织。入选标准：(1) 经病理学检查确诊为膀胱癌；(2)临床资料及随访资料完整；(3)术前未接受任何抗癌治疗。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)依从性不好，不能定期随访。所有患者及其家属对本研究充分知情，并签署知情同意。膀胱癌80例中，男67例，女13例；年龄61～83岁，中位年龄68岁，≥68岁38例，＜68岁42例；肿瘤分级：G1级33例，G2级47例；肿瘤转移50例；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期27例；肌层浸润24例。

1.2 方法

1.2.1 实时聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR) 80例膀胱癌患者的癌组织及癌旁正常组织采用总RNA提取试剂盒(上海联迈生物工程有限公司)提取总RNA，采用反转录试剂盒(北京雅安达生物技术有限公司)将其逆转录成c-DNA，以此cDNA为模板进行PCR扩增。PCR扩增体系为：cDNA 2.0 μL，Primer 1.0 μL，RNase H2O 9.5 μL，SYBR Primix Ex TaqTM12.5 μL，反应总体系25 μL。PCR反应条件为：95 ℃预变性5 min，93 ℃变性10 s，61 ℃退火延伸30 s，循环40次。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统扫描分析，根据扩增曲线读取循环数(Ct)，将β-actin作为内参，利用相对定量法以2-△△Ct对MiR-141 mRNA表达水平进行相对定量分析。膀胱癌组织相对表达量/癌旁正常组织相对表达量≥6判定为MiR-141高表达，反之判定为MiR-141低表达[3]。

1.2.2 随访 采用电话及门诊检查相结合的方式进行随访，记录80例膀胱癌患者的总生存率(overall survival,OS)、无进展生存率(progressive-free survival,PFS)，并行膀胱镜检查、B超检查、电子计算机断层扫描(computed tomography,CT)或磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI) 等检查。纳入本研究后第1年每3个月随访1次，第2年开始每6个月随访1次，随访至患者死亡或纳入本研究60个月止。

1.2.3 观察指标 膀胱癌组织及癌旁正常组织中MiR-141 mRNA相对表达量，MiR-141表达与膀胱癌患者性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤分期、肌层浸润等临床病理特征的关系，MiR-141表达及各临床参数与膀胱癌患者预后的关系。

1.2.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件对本试验所有数据进行分析，采用t检验比较膀胱癌组织及癌旁正常组织中MiR-141 mRNA相对表达量及MiR-141表达与膀胱癌临床病理学特征的关系。采用Kaplan-Meier法和Log-rank法分析性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移、MiR-141表达与膀胱癌患者预后的关系，并绘制生存曲线，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌组织及癌旁正常组织中MiR-141 mRNA相对表达量 MiR-141 mRNA在膀胱癌组织相对表达量(4.93±0.88)显著高于癌旁正常组织(0.83±0.11)(t=41.350,P＜0.05)。

2.2 MiR-141表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系 不同性别、年龄的膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05)；肿瘤分级G1级膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量显著低于肿瘤分级G2级患者(P＜0.05)；肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期的膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量显著低于肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期患者(P＜0.05)；出现肌层浸润的膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量显著高于未出现肌层浸润者(P＜0.05)；有肿瘤转移的膀胱癌患者癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量显著高于无肿瘤转移者(P＜0.05)，见表1。

表1 MiR-141表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系()

表1 MiR-141表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系()

2.3 膀胱癌患者生存率单因素分析 肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移、MiR-141表达不同的膀胱癌患者5年生存率差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 膀胱癌患者生存率单因素分析

2.4 膀胱癌患者生存率多因素分析 肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移、MiR-141表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(P＜0.05)，见表3。

2.5 Kaplan-Meier生存曲线分析 MiR-141低表达患者OS、PFS显著高于MiR-141高表达患者(P＜0.05)，见表4、图1。

表4 MiR-141不同表达膀胱癌患者OS、PFS比较(n,%)

3 讨论

膀胱癌是人类十大常见肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率，30%～50%膀胱癌由吸烟引起，吸烟可使膀胱癌危险率增加2～6倍[7]。90%患者首发症状为无痛性血尿，随着肿瘤增大可出现尿频、尿急、排尿困难等，部分膀胱癌患者起病隐匿，就诊时已属进展期甚至伴随严重区域淋巴结转移，手术治疗疗效不佳[8]。因此寻找一种肿瘤标志物应用于膀胱癌早期诊断、疗效判断及预后评估均有重要意义。

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年来发现的一类是长约22 nt的非编码RNA，可与靶mRNAs的3′-非翻译区互补结合阻断蛋白编码基因的表达，并可调节细胞增殖、凋亡、迁移等生物学过程[9]。此外，miRNAs表达异常与恶性肿瘤密切相关，可作为癌基因或抑癌基因促进或抑制肿瘤发生进展[10]。研究[11]发现miRNAs结合位点的多态性与结肠癌发病风险相关，从血液或粪便中分离出来的miRNAs可作为早期诊断结肠癌的生物标志物。MiR-141为MiR-200家族的成员之一，位于12p13.31位点，异常表达于乳腺癌、前列腺癌、肾细胞癌中，并在上述肿瘤细胞增殖、迁移、分化、凋亡等方面有重要作用[12-13]。有研究[14]显示MiR-141对肝细胞肝癌细胞中高迁移率族蛋白B1表达具有调控作用。另有研究[15]显示MiR-141在卵巢癌患者组织中呈高表达且可作为肿瘤标记物应用于上皮性卵巢癌的早期诊断。本研究结果显示MiR-141 mRNA在膀胱癌组织相对表达量显著高于癌旁正常组织，提示MiR-141参与了膀胱癌病理发生过程。本研究还显示肿瘤分级、分期不同，肌层浸润与否、有无转移，其癌组织中MiR-141 mRNA相对表达量差异有统计学意义。进一步分析MiR-141表达与膀胱癌患者预后的相关性，发现肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移与否、MiR-141表达水平是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素，MiR-141低表达患者OS、PFS显著高于MiR-141高表达患者，提示MiR-141表达与膀胱癌患者预后相关，MiR-141低表达能获得较好的预后。

综上所述，MiR-141表达与膀胱癌患者肿瘤分级、肿瘤分期、肿瘤转移与否及预后呈相关性，这可为膀胱癌患者早期诊疗及预后评估提供参考依据。但本研究研究时间较短、纳入病例数较少，有待扩大样本并针对其具体机制作进一步研究。