非小细胞肺癌中LASS2/TMSG1的表达及其临床意义

赵挺祺，李时荣，王静媛，韩希然，胡飘飘，乌云嘎，徐晓艳

近年肺癌侵袭、转移、生长及预后的相关基因成为研究热点，LASS2/TMSG1基因是新发现的抑制肿瘤生长、侵袭的指标。马春树等[1]从前列腺癌细胞中分离出TMSG1基因；上海复旦大学遗传学研究所克隆出LASS2与TMSG1高度同源[2]，因此称该基因为LASS2/TMSG1基因。目前发现LASS2/TMSG1过表达可促进多种肿瘤细胞的凋亡并抑制其侵袭，如前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌等[3-8]；但在肺癌中关于LASS2/TMSG1的报道较少。因此，本实验采用免疫组化SP法检测LASS2/TMSG1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达，分析LASS2/TMSG1的表达与肺癌临床病理特征及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 材料收集2014年1月1日～2016年12月31日内蒙古医科大学附属医院行手术切除经病理诊断为NSCLC标本87例，其中男性55例，女性32例，平均年龄(58.32±4.58)岁；同时收集癌旁正常组织25例，其中男性15例，女性10例，平均年龄(58.69±6.41)岁。患者均有完整的临床资料，术前均未接受放、化疗。组织学分级：鳞癌43例、腺癌27例、其他类型癌17例。无淋巴结转移37例，有淋巴结转移50例(送检淋巴结证实至少1枚淋巴结有转移)。对所有病例进行电话随访，截止日期为2018年11月，其中25例失访。

1.2 方法标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，行常规HE染色。采用免疫组化SP法染色，实验操作步骤严格按试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。兔抗人Anti-LASS2多克隆抗体购自Abcam公司，SP超敏试剂盒(鼠/兔)、DAB显色试剂盒，均购自北京博奥森公司。

1.3 结果判定LASS2/TMSG1以细胞膜和细胞质显示棕色颗粒作为蛋白阳性。进行半定量积分判断：按阳性细胞着色强度计分：黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；按阳性细胞百分数计分：≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。将两项得分结果相乘：0～4分为阴性(-)，5～12分为阳性(+)。

1.4 统计学分析应用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计学分析。各组率的比较应用χ2检验。相关分析采用Spearman等级相关分析。采用Log-rank法进行生存曲线的比较；预后影响因素采用Cox回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LASS2/TMSG1在NSCLC组织和癌旁正常组织中的表达NSCLC组织和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1定位于细胞膜和细胞质(图1)。LASS2/TMSG1在NSCLC组织和癌旁正常组织中的阳性率分别为24.13%(21/87)和60.00%(15/25)，差异有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 NSCLC和癌旁正常组织中LASS2/TMSG1的表达

2.2 LASS2/TMSG1表达与NSCLC临床病理特征的关系Spearman相关分析显示，NSCLC中LASS2/TMSG1蛋白表达与分化程度、淋巴结转移呈负相关(P<0.05)，与患者年龄、性别、肿瘤大小、是否吸烟、民族无相关性(P>0.05)。LASS2/TMSG1表达与组织学类型相关，LASS2/TMSG1蛋白在腺癌中的表达高于鳞癌(表2)。

图1 LASS2/TMSG1在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达：A.鳞癌及癌旁正常组织中LASS2/TMSG1的表达，SP法；B.腺癌及癌旁正常组织中LASS2/TMSG1的表达，SP法；C.鳞癌(癌团)及癌旁正常组织(正常支气管组织)；D.腺癌(细胞复层有异型)及癌旁正常组织(可见纤毛)

2.3 LASS2/TMSG1蛋白表达与NSCLC患者预后的关系

2.3.1总生存期 本组87例患者中52例获得随访资料，生存时间3～36个月，平均生存时间21.25个月。

2.3.2LASS2/TMSG1表达与NSCLC患者生存率的关系 LASS2/TMSG1阳性组和阴性组平均生存时间分别为27.52、20.26个月，中位生存时间为30.00和18.00个月。Log-rank法比较两组生存率差异有显著性(χ2=6.237，P=0.013)，LASS2/TMSG1阳性组的生存率明显高于阴性组(图2)。

图2 LASS2/TMSG1表达与NSCLC患者预后的关系

表2 LASS2/TMSG1蛋白表达与NSCLC临床病理特征的关系[n(%)]

2.3.3Cox多因素回归分析 本组对NSCLC患者性别、年龄、民族、是否吸烟、肿瘤大小、组织学类型、病理分级、是否有淋巴结转移、LASS2/TMSG1的表达，经Cox比例风险模型进行多因素分析，结果显示：患者性别、年龄、民族、是否吸烟、肿瘤大小、组织学分型均与NSCLC的预后无关(P>0.05)；与淋巴结转移、LASS2/TMSG1阳性与NSCLC的预后有关(HR=1.621，P=0.01；HR=0.598，P=0.002)，且有淋巴结转移、LASS2/TMSG1阴性的NSCLC患者预后较差。

3 讨论

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，NSCLC占肺癌患者总数的85%，并且其发病率和病死率逐年上升[9-10]。肺癌的发生、发展和转移是一个涉及多因素、多步骤和多基因参与的复杂过程。在此期间，癌症相关基因的激活、失活和分子突变等分子病理变化导致一系列信号转导异常，贯穿整个肺癌病变的过程。

最新发现的肿瘤转移抑制基因LASS2/TMSG1，对肿瘤的侵袭、转移、增殖及凋亡等过程有一定的调控作用。Xu等[11]利用脂质体转染法沉默PC-3M-2B4(低转移潜能)细胞中的LASS2/TMSG1基因，结果显示LASS2/TMSG1基因的沉默对PC-3M-2B4细胞的恶性进程起促进作用。徐晓艳等[12]利用脂质体转染法过表达95D细胞中的LASS2/TMSG1基因，发现过表达LASS2/TMSG1基因抑制肺癌细胞95D的侵袭及转移能力。左华楚等[13]在肺癌细胞系95C细胞中通过质粒转染沉默LASS2/TMSG1基因，发现其能够明显增强肺细胞肿瘤的浸润与转移。上述报道提示LASS2/TMSG1基因属于肿瘤转移抑制基因。

本实验主要采用免疫组化SP法检测NSCLC中LASS2/TMSG1蛋白的表达，发现LASS2/TMSG1在NSCLC组织的阳性率低于癌旁正常组织，说明在NSCLC的发生过程中LASS2/TMSG1可能起抑癌作用。进一步分析LASS2/TMSG1蛋白表达与NSCLC临床病理特征的关系，发现LASS2/TMSG1蛋白阳性率与分化程度、组织学分型、淋巴结转移有关，与患者年龄、性别、肿瘤大小、是否吸烟、民族无关。刘博等[14]发现在肿瘤分化程度低、TNM分期高、伴有淋巴结转移的患者TMSG1的表达低。谭真等[15]发现LASS2/TMSG1蛋白表达与肺腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小无关；与浸润性腺癌亚型关系密切；淋巴结无转移组与有转移组相比，LASS2/TMSG1表达明显增强。上述结果与本实验结果一致，提示LASS2/TMSG1与肺癌的发生、发展、侵袭和转移等呈显著的负相关。

本组随访病例中LASS2/TMSG1阴性组患者的生存率均明显低于阳性组。此外，本组经Cox多因素回归分析发现患者性别、年龄、民族、是否吸烟、肿瘤大小、组织学分类均与NSCLC的预后无关；与淋巴结转移、LASS2/TMSG1的表达有关。有淋巴结转移者死亡风险与无淋巴结转移者相比，增加1.578倍；LASS2/TMSG1阴性者的死亡风险是阳性者的0.625倍。由此可见，LASS2/TMSG1阳性率越低，NSCLC患者预后越差。进一步证明，LASS2/TMSG1的表达可作为肺癌预后的可靠标志物，与文献报道一致[14-15]，尤其在肿瘤的早期阶段是一个非常重要的预后参考指标。

综上所述，本实验结果显示LASS2/TMSG1在NSCLC中的阳性率低于癌旁正常组织，LASS2/TMSG1蛋白表达与分化程度、组织学分型、淋巴结转移及患者预后密切相关，进一步证实LASS2/TMSG1表达与NSCLC的发生、进展、浸润转移及预后密切相关，为肺癌的临床预防、治疗提供依据。由于本实验样本量较少，尚需积累大样本前瞻性的实验进一步证实，LASS2/TMSG1有望成为治疗肺癌浸润、转移的新靶点。