淋巴结结核患儿分枝杆菌检测结果研究

何 社 军

(灵宝市第一人民医院医学检验科 灵宝 472500)

淋巴结结核主要由结核分支杆菌感染引发所致，是临床高发肺外结核病类型之一，多发于20～40岁青壮年群体及≤12岁的儿童群体，严重威胁患者身心健康[1]。随着现代医学技术的进步和发展，利用光学显微镜鉴别结核分支杆菌成为了行之有效的方法，但临床确诊仍需要结合生化试验及病菌培养结果。为了有效检出分枝杆菌，提高淋巴结结核患儿分支杆菌检测阳性率，本研究以我院确诊的157例淋巴结结核患儿为研究对象，就罗氏培养法和涂片镜检法的检测结果进行了如下探讨，以供参考。

1 材料与方法

1.1 标本材料

选取2015年9月～2018年9月医院儿科确诊的的157例淋巴结结核患儿，采用细针穿刺法吸取活检组织样本，样本选取量0.6～4.0ml。

1.2 仪器材料

上海普赫光电科技有限公司提供的Olympus光学显微镜； 青岛海博生物公司提供的萋-尼氏抗酸染液和硝基苯甲酸生长试验(PNB法)鉴定培养基；济南赛尔生物科技有限公司提供的中性罗氏培养基。

1.3 方法

按照1∶1的浓度，用2%NaOH-N-乙酰半胖氨酸消化处理采集样本，终浓度1%，涡旋震荡30s，消化20min，添加pH6.8的无菌磷酸盐缓冲液直至50ml，离心15min，3000r/min，取沉淀物添加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液1ml混合均匀，待接种、涂片。(1)涂片镜检法：混匀处理后的样本，用滴管戏曲0.1ml涂于载玻片正面右侧约2/3处，自然干燥。火焰固定后采用抗酸染色镜检，抗酸杆菌呈红色，背景呈蓝色。分级标准如下：抗酸杆菌阴性(-)：0条/300个视野；具体抗酸杆菌数目：抗酸杆菌(4+)：每个视野≥10条；抗酸杆菌(3+)：每个视野1～9条；抗酸杆菌(2+)：每10个视野1～9条；抗酸杆菌(1+)：每100个视野3～9条；每300个视野1～8条[2]。(2)涂片镜检法：取处理后的样本100μl，分别接种至两个中性罗氏培养基上，室温(37℃)下平卧培养基斜面，24h后调整为直立放置，接种第3d、第7d分别观察1次，之后每周观察1次，记录培养基斜面菌落生长情况。满8周后报告阴性者。(3)根据《结核病诊断实验室检验教程》采用PNB法鉴定分支杆菌菌型[3]。

1.4 统计学方法

用SPSS23.0处理数据，以χ2检验计数资料[n(%)]，P<0.05时，表明有统计学差异。

2 结果

2.1 罗氏培养和涂片镜检结果分析

罗氏培养结果提示，157例患儿阳性48例(30.57%)，阴性109例(69.43%)，其中阳性分级情况如下：4+占比6.25%(3/48)，3+占比8.33%(4/48)，2+占比4.17%(2/48)，1+占比25.00%(12/48)，3～20个占比33.33%(16/48)，1～2个占比22.92%(11/48)。涂片镜检结果提示，阳性100例(63.69%)，阴性57例(36.31%)，其中阳性分级情况如下：4+占比7.00%(7/100)，3+占比9.00%(9/100)，2+占比14.00%(14/100)，1+占比30.00%(30/100)，3～8个占比25.00(25/100)，1～2个占比15.00%(15/100)。

2.2 两种方法检查结果的一致性分析

涂片分级和罗氏培养的检查结果一致性分析，见表1。

2.3 两种培养方法结果一致性分布

由上述分析结果可知，罗氏培养诊断阳性者48例中包含真阳41例，109例阴性者包括真阴50例；涂片镜检诊断阳性者100例中包含真阳41例，109例阴性者中包括真阴50例。据此可知，涂片镜检和罗氏培养诊断均为阳性者41例，均为阴性者50例，两种方法结合可明确诊断者比例为57.96%(91/157)。

2.4 两种方法检验结果的阳性率对比

根据上述研究结果可知，涂片镜检的阳性率为63.69%(100/157)，罗氏培养的阳性率为30.57%(48/157)，两种方法检验结果的阳性率对比，χ2=35.559，P=0.000。

2.5 菌种检验结果分析

根据PNB法检测结果发现48株病菌分离株中包括结核杆菌复合群47株，占比97.92%(47/48)；非结核分枝杆菌1株，占比2.08%(1/48)。

3 讨论

结合本文实践结果可知，PNB法鉴定的结核分枝杆菌复合群为47株，在全部分离株中占比达到了97.92%，提示淋巴结结核患儿多为结核分支杆菌复合群感染病例。本文研究中中发现，为了提高离心沉淀后涂片镜检阳性率，应注意下述要点：(1)提高样本采集数目，预先确认检查项目，结合检查项目科学分配标本；(2)先使用低倍镜确认片状有效成分，再调换成油镜详细镜检；(3)严格控制离心力，这是因为离心过小沉淀物容易悬浮，导致浓缩集菌流失；(4)调低染色时的冲洗水流量，避免标本从玻片上脱落[4]。

表1 两种方法检查结果的一致性分析[n(%)]

涂片分级罗氏培养4+3+2+1+3～20个1～2个阴性合计4+311000273+110311292+0114305141+00054219303～8个00014218251～2个0000111315阴性0010335057合计342121611109157

有学者对269例淋巴结结核患儿研究后发现，细针穿刺取活检组织，经消化处理、离心沉淀等操作浓缩集菌，能够有效提高涂片镜检的分支杆菌阳性率，其中涂片镜检阳性率显著高于培养法阳性率，而结核分枝杆菌复合群是导致淋巴结结核患儿发生的主要致病菌[5]。与既往报道结果相吻合，本文研究发现涂片镜检的分枝杆菌检测阳性率远高于罗氏培养法，初步分析这与部分患者近期接受过广谱抗生素治疗、培养过程中发生污染等因素密切相关，因此有必要加强淋巴结结核患儿分枝杆菌检测环节的质控力度。

综上所述，采用细针穿刺提取组织样本、消化处理、离心沉淀等措施浓缩集菌，可有效提高涂片镜检检出分支杆菌的阳性率，有利于医师准确检出分支杆菌，明确患儿疾病类型，对后续科学制定诊疗方案发挥着积极的作用，同时为了进一步明确患儿致病菌类型，有必要鉴定培养阳性菌株菌型。