组氨酸含量对平菇菌丝生长的影响
2020-04-16张磊郭普宇刘迪薛春梅
张磊，郭普宇，刘迪，薛春梅,2*
(1.佳木斯大学生命科学学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.佳木斯大学应用微生物研究所，黑龙江 佳木斯 154007)
平菇(Pleurotusostreatus)属于担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、伞菌目(Agaricales)、侧耳属(Pleurotus)的食用菌[1]。平菇是日常生活中一种常见的药食两用真菌，其菌丝分解有机物质的能力很强[2-3]，具有很高的营养价值、药用价值和经济价值，在消费者中深受喜爱[4]。平菇中含有丰富的蛋白质、多糖、氨基酸以及硫、铜、磷、钙、镁、铁、锌和硒等矿质元素[5-6]，平菇属于味甘、性温的食物，能够驱散风寒、舒畅经络。平菇可以吸收其中的多糖和硒元素，多糖具有抗肿瘤等药用效果。
试验对不同浓度组氨酸-PDA培养基中平菇菌丝的生长状况进行对比，从而筛选出最适合平菇菌丝生长的组氨酸浓度。我国拥有丰富的食用菌和药用菌资源，食用菌的生产使我们国家的农业资源利用率有了显著的提升。探究组氨酸对平菇菌丝生长的影响，为平菇菌丝生长提供一个简单有效的方法，促进氨基酸在平菇栽培上的应用。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
供试平菇现保存于佳木斯大学生命科学学院微生物实验室。为了进行本次筛选试验，于2019年3月中旬对平菇母种进行活化培养，母种培养基采用PDA培养基，无菌操作接种后，经过7 d的活化培养后筛选出最适合平菇菌丝生长的组氨酸浓度。
1.2 供试培养基及制备
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：马铃薯200 g、琼脂10 g、葡萄糖10 g、加水定容至1000 mL，pH自然。
将马铃薯洗净去皮，切成小块，称取200 g。加水煮烂，用8层纱布过滤。取滤液，加入10 g琼脂，不断地加热搅拌混匀，使琼脂溶解完全后过滤到1000 mL烧杯中。再加入10 g葡萄糖，搅拌均匀至葡萄糖完全溶解，定容至1000 mL。分别装入7个锥形瓶中，每个锥形瓶装100 mL，用封口膜和牛皮纸包扎完毕。将上述盛有培养基的锥形瓶放于高压蒸汽灭菌锅内。在120 ℃恒温高压[0.098～0.118 MPa(1.0～1.2 kg/cm2)] 灭菌30min，备用。
组氨酸-PDA培养基：组氨酸固体0.4 g、无菌水40 mL。
用电子天平称取0.4 g组氨酸固体加入40 mL无菌水中，摇匀至无沉淀出现，制备成浓度为10 mg/mL组氨酸母液，用注射器吸取组氨酸母液，将注射器的针头取下并换上细菌过滤器，匀速按压注射器，过滤出无菌的组氨酸溶液滴入提前备好的空锥形瓶中，放入4 ℃冰箱中备用。
分别吸取已经配置好的组氨酸母液0、150、300、450、600、750、900 μL加入到100 mL的PDA培养基中，摇晃使培养基中的营养物质混合均匀，分别制成浓度为0、30、60、90、120、150、180 μg/mL的组氨酸-PDA培养基。
1.3 培养方法
1.3.1 接种。用解剖刀切取平菇生长旺盛的组织块，约1 cm左右，放入不同浓度的组氨酸-PDA培养基中，封口膜封好，并用记号笔做好标注(日期、浓度等)。每个变量设置3个重复，放于恒温、恒湿相同条件下进行培养观察。记录菌丝生长过程及状态。以上均以未加入组氨酸母液的PDA培养基作为空白对照。
1.3.2 培养条件。放入25 ℃培养箱中培养。
1.3.3 观测方法。48 h后每天定时、定点标记并测量1次菌丝生长量、菌丝生长势及密度。分别记录上述培养基中菌丝生长情况并进行对比观察。
2 结果与分析
经过7 d的培养观测，在不同浓度培养基中平菇菌丝的生长状况各不相同(表1)。
表1 不同浓度组氨酸-PDA培养基中菌丝生长状态对比
2.1 不同浓度组氨酸培养基中平菇菌丝生长速度
如图1，平菇菌丝在不同浓度的组氨酸培养基中每天的生长速度是不同的。组氨酸浓度为120 μg/mL的培养基中平菇菌丝生长速度最快，7 d平均长度值最大。组氨酸浓度为0 μg/mL的培养基中平菇菌丝生长速度最慢。
图1 不同浓度组氨酸培养基平菇菌丝日生长速率对比
2.2 不同浓度组氨酸培养基中平菇菌丝的生长状况
通过对平菇菌丝整齐程度、浓密度、生长速度等生理指标对比(如图2、图3)，平菇菌丝在组氨酸浓度为120 μg/mL的培养基中生长速度最快、菌丝颜色为白色、菌丝最浓密、菌丝较粗壮、菌丝的长势最好。未加入组氨酸的培养基生长速度缓慢，菌丝稀疏散乱。
图2 组氨酸浓度为120 μg/mL的培养基中平菇菌丝生长状况
图3 组氨酸浓度为0 μg/mL的培养基中平菇菌丝生长状况
3 结论
试验结果表明，最适合平菇菌丝生长的组氨酸浓度为120 μg/mL，菌丝长势最好、菌丝最浓密、菌丝粗壮、菌丝边缘最整齐。
通过试验对于平菇母种的培养和菌种的保存具有重要的意义，同时对平菇母种培养基优化和栽培提供参考。
