Th17、Treg 与食管癌的关系及临床意义

王成师，华香，濮娟，祝丽晶

(南京医科大学康达学院附属涟水人民医院，江苏 涟水)

0 引言

食管癌是一种发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，是中国第四大常见恶性肿瘤，多年来一直威胁着人们的健康和生命。我国食管癌的发病率约占全球的50% ，有逐年升高趋势，并且食管癌的预后很差，5 年生存率小于5%[1]。寻找有效的方法和手段辅以食管癌的早期识别和诊断，是改善食管癌预后、降低死亡率的重要措施。本研究通过流式细胞术分别检测食管癌和健康人外周血辅助性T 细胞17(T helper cells 17，Th17)和调节性T 细胞(regulatory T cells，Treg)，拟从肿瘤免疫的角度探寻食管癌的发病机制及治疗干预靶点，对实现食管癌的早诊早治具有深远的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2018 年1 月至2019 年12 月收治的40 例食管癌患者做为病例组，其中男性24 例，女性16 例，年龄62～80 岁，平均（67.1±5.1）岁，所有患者均经病理证实，且在采集标本前尚未进行手术、放化疗以及免疫抑制剂等治疗，所有患者均不合并高血压、糖尿病、冠心病、结缔组织病等慢性疾病以及急性感染。另选取同期于我院体检健康者35 例作为对照组，其中男23 例，女12 例，年龄64～76 岁，平均（69.3±4.2）岁。两组在年龄和性别分布上差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 标本采集

收集我院初次住院患者入院次日空腹静脉血，体检者于体检当日空腹采集静脉血，分别采集肝素抗凝静脉血2mL。

1.3 Treg、Th17 检测

采集标本后，按照试剂盒说明书进行上机前处理准备。

1.3.1 Th17 的检测

取肝素钠抗凝的全血标本100uL，用RPMI 1640 1：1 等体积稀释，加入2ul 白细胞激活剂后置于37℃，5% CO2 培养箱培养3-6小时；加入20uL CD8 PerCP-Cy5.5 和5uL CD3 APC，避光放置15分钟；加入100μL 固定破膜剂中的试剂 A，避光孵育15 分钟；加入3mL PBS，1200 rpm 离心5 分钟，弃除上清；加入100μL 的固定破膜剂中的试剂 B 和20ul IL-17A PE，避光孵育15 分钟；加入3mL PBS，1200 rpm 离心5 分钟，弃除上清；0.5mL PBS 重悬细胞，上机检测。

1.3.2 Treg 的检测

在流式管内分别加入特异性标记的抗体；加入100μL 的待测样本后混匀；室温避光孵育15 分钟；加入红细胞裂解液，涡旋混匀，室温避光15 分钟；1200rpm 离心5min，弃去上清液；加入2mL 的PBS，涡旋混匀，1200rpm 离心5min，弃去上清液；加入0.5mL PBS混匀，上机检测。

1.4 流式细胞仪检测后用kaluza 分析软件分析Th17、Treg 占CD4+T 淋巴细胞的比例，并计算Th17/Treg。

1.5 统计学分析

采用 SPSS 统计学软件进行分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流式细胞术检测某一食管癌患者的外周血中Th17 和Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例，如图1。

图1 某食管癌患者外周血中Th17 和Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例

2.2 食管癌组外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例及Th17/Treg 分别为2.45±0.88、6.68±1.59、0.36±0.10，显著高于对照组（1.02±0.55、4.62±1.43、0.25±0.18），统计分析显示P＜0.05，如表1。

表1 食管癌组与对照组外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例及Th17/Treg 比较

表1 食管癌组与对照组外周血Th17、Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例及Th17/Treg 比较

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3 讨论

食管癌是最常见的消化道肿瘤之一，其发病率和死亡率世界上不同国家间差异很大，全世界每年约有30 万人死于食管癌[2]。我国是世界上食管癌高发地区之一，发病率在各类消化系统肿瘤中位居第2 位，男性多于女性，发病年龄多在40 岁及以上[3,4]。食管癌典型的症状为进行性吞咽困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，最后水和唾液也难以下咽，患者确诊时基本已处于中晚期，虽采用手术、放疗、化疗等治疗措施，但死亡率仍很高[5]。食管癌的发生、发展与机体的免疫功能状况密切有关。机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主，其中 T 淋巴细胞在机体抗肿瘤免疫中起调控及免疫监视作用[6]。因此，本文从肿瘤免疫的角度探寻食管癌的发病机制。

Treg 是一类具有免疫抑制功能的细胞亚群，在肿瘤的免疫逃逸以及肿瘤的发生、发展中起重要作用[7]。Th17 主要分泌白细胞介素-17（IL-17），还分泌IL-22、IL-23，参与机体的炎性反应过程，近年来发现其与肿瘤有密切关系[8,9]。Treg 和Th17 均由CD4+T 细胞在不同浓度的转化生长因子-β（TGF-β）作用下分化而来，二者在免疫稳态中发挥着相互拮抗的平衡作用[10,11]。

本研究通过流式细胞术检测食管癌组和健康对照组中Th17 和Treg 的相对量，结果提示食管癌患者外周血中Th17、Treg 占CD4+T淋巴细胞比例以及Th17/Treg 均明显高于健康对照组。近年来的研究显示，机体内Th17 的增多，其可通过上调趋化因子表达，促进血管内皮细胞的移行进而促进肿瘤的生长[12-14]；Treg 的增多可通过细胞与细胞间的接触以及细胞因子两种途径抑制T 细胞的免疫应答，减弱抗肿瘤效应[15]。另外，Th17/Treg 失衡亦已报道与某些疾病，尤其是恶性肿瘤肿瘤密切相关[16-18]。所以，食管癌患者体内Th17、Treg 占CD4+T 淋巴细胞比例以及Th17/Treg 较健康人明显升高，细胞免疫紊乱可能在食管癌发生、发展中起重要作用。

如果能够通过各种干预手段影响食管癌患者体内Th17、Treg，可能为食管癌提供新的治疗方案[19]。但目前仍存在许多问题尚待明确[20]，如：Th17、Treg 在食管癌发生、发展中的详细机制以及影响其分化的因素；Th17、Treg 数量变化是否功能也发生改变；干预时具体的目标数量是多少，如何避免引起自身免疫性疾病的发生等。因此，我们仍需对这两群细胞进行更深入的研究。