改良的抗酸染色法联合细胞沉淀仪法在结核杆菌检测中的价值

王雨婷

(西平县人民医院 检验科，河南 驻马店 463900)

近年来结核性疾病的发病率及死亡率逐年上升，选取一种简单且有效的检查方法以提升结核性疾病早期诊断准确率显得尤为重要[1]。目前临床上结核性疾病诊断方法较多，但仍以培养、涂片方法为主，其中培养结果为结核性疾病的诊断金标准，但无菌体液培养所需标本量大、耗时较长，临床应用存在一定的局限性[2]。涂片染色检查已成为无菌体液检查常用手段，但传统制片、染色方法检出率较低，极易造成误诊、漏诊[3]。本研究旨在观察改良的抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查在结核杆菌检测中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2018年1—12月西平县人民医院接诊的疑为结核性疾病患者75例，其中男45例，女30例；年龄38～76岁，平均(53.74±6.37)岁；抽取无菌体液，收集关节滑液8例、腹水12例、胸水25例、脑脊液30例。本研究经西平县人民医院伦理委员会审核通过，患者均自愿参与本研究并签署知情同意书。

1.2 入选标准纳入标准：(1)所有患者均出现咳嗽、咳痰、痰内带血丝或小血块等临床症状；(2)经实验室检查、体格检查等确诊者。排除标准：(1)严重急性感染者；(2)严重肝肾功能或呼吸功能不全者；(3)表达障碍或精神疾病者。

1.3 操作方法将收集的无菌体液采用传统制片、染色法及改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查，其中传统制片、染色法检查步骤如下：离心标本，向洁净玻片上涂抹沉渣，涂完1层后实施自然干燥，随后再次涂抹处理，以形成较厚涂片，染色采用萋尼抗酸染色法，初染采用石碳酸复红加温，将结核杆菌染色，随后通过盐酸酒精将其他成分脱色，并通过美兰复染，分枝杆菌为红色，背景中物质、其他细菌为蓝色，涂片干燥后实施镜检。改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查具体操作步骤如下：通过细胞沉淀仪，将无菌体液(3 mL左右)中结核杆菌收集至无菌玻片上，制片完成，染色利用改良染色法，固定标本，将3 g·L-1Triton X-100加入染液中，利于溶解脂质，提升染料、结合杆菌结合率，向3 g·L-1Triton X-100液中置入待检玻片，浸泡0.5 h，通过0.01 M磷酸盐缓冲液洗涤，每次3～5 min，共洗涤3次，自然干燥玻片并置于染色架，将石碳酸复红溶液滴加完毕以将玻片盖满，染色15 min，随后用蒸馏水冲洗(自玻片一端)，将染色液冲去，将3 g·L-1盐酸酒精溶液滴加完成以将玻片盖满，脱色每次2～3 min，共2次，通过蒸馏水冲洗(自玻片一端)，将盐酸酒精溶液冲去，将标本上剩余水沥去，亚甲基蓝溶液滴加染色5 min，蒸馏水冲洗，干燥涂片后实施镜检。

1.4 评价指标以培养结果作为金标准，评估传统制片、染色法及改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查方法诊断的敏感度、特异度、准确率。

1.5 统计学方法采用SPSS 21.0统计软件进行数据处理分析。诊断的敏感度、特异度、准确率比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 培养结果本次研究中纳入的75例标本中，培养结果阳性48例、阴性27例。见表1。

表1 传统制片、染色法及改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法 联合检查结果对比(n)

2.2 传统制片、染色法及改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查结果以培养结果作为金标准，与传统制片、染色法相比，改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查诊断敏感度、准确率较高，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表2。

表2 两种检查方式诊断情况比较(%)

3 讨论

结核病作为一种慢性传染病，多由结核杆菌感染所致，其中多数患者呈现慢性发展，结核杆菌侵入机体各个器官，极易造成结核性滑膜炎、结核性腹膜炎、结核性胸膜炎及结核性脑膜炎等，影响患者的身心健康[4]。

结核性疾病的诊断以涂片为主，其中针对胸水、脑脊液、滑膜及腹水等无菌体液，采取传统制片方法多为离心沉淀，并留取沉渣，以实施涂片处理[5]。但经临床实践发现，多数无菌体液具有较低的含菌量，故采取离心沉淀往往无法获得沉渣，极大限制了收集的菌量，而为了提高染色效果，多将制作较厚涂片，以增加玻片上菌量，但由于涂片较厚，在染色期间，极易导致标本脱落，故而沉渣获得有限及染色中标本脱落均可降低阳性率，并影响最终诊断结果[6]。近年来，细胞沉淀仪被用于收集结核杆菌中，利于将无菌体液中的全部结核杆菌留取至玻片上，并可将多余液体去除，可实现在玻片上收集较多结核杆菌外，利于避免涂片过厚的弊端，进而可促使结核杆菌留取量增加，解决了传统制片法中的不足现象。结核杆菌细胞壁含有较多的脂质，采用传统抗酸染色法染色往往冲破难度较大，极易降低染色阳性率，采用改良抗酸染色法中固定了标本，利于降低标本脱落率，同时将3 g·L-1Triton X-100加入染液中，将脂质溶解，进而将促使染料、结核杆菌结合，提升染色阳性率[7]。本次研究结果显示，纳入的75例标本中，培养结果阳性48例、阴性27例；以培养结果作为金标准，与传统制片、染色法相比，改良抗酸染色法、细胞沉淀仪法联合检查诊断敏感度、准确率较高，可为结核性疾病的诊治提供信息。

综上所述，改良抗酸染色法联合细胞沉淀仪法诊断结核杆菌准确率、敏感度较高，利于提升结核杆菌检出率，为结核性疾病诊断提供依据。