不同ACD与全血的体积比对供者外周血单个 核细胞采集前后血液、离子及安全性的影响

王国征，吴远彬，陈瑶，代喜平

(广州中医药大学 第二附属医院 血液科；广东省中医院 血液科，广东 广州 510120)

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)是目前根治多种血液系统恶性疾病的唯一方法[1-2].利用血细胞分离机采集经粒细胞刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员的外周血单个核细胞，具有效率高、无须麻醉、创伤小、安全性高及受者粒细胞和血小板重建快等优点，已成为一种比较理想的造血干细胞来源，远比骨髓干细胞移植更普遍地应用于国内临床[3-4].采集过程中为防止血液凝固利用血液保存液(anticoagulant citrate dextrose solution,ACD)抗凝，比例高容易发生低钙反应等并发症，比例低易形成血栓堵塞管道，本研究应用COM.TEC 型血细胞分离机AutoMNC 程序采集单个核细胞，探讨不同ACD与全血体积比对外周血单个核细胞采集前后血液、离子及供者安全性的影响.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象

回顾性分析2016年7月至2018年2月广东省中医院血液科异基因造血干细胞移植的同胞健康供者45例，其中男35例，女10例，最大年龄49岁，最小13岁，平均年龄(30.56±10.94)岁，平均体质量(58.00±15.70)kg；采集前均已经常规体检合格，无粒细胞刺激因子、葡萄糖酸钙等药物过敏史，并签署外周血单个核细胞采集知情同意书.

1.1.2 主要仪器与试剂

COM.TEC 型血细胞分离机与一次性干细胞采集管路P1YA 为德国费森尤斯(卡比)公司产品，Olympus显微镜为广州奥林巴斯有限公司产品；血液保存液(I) (ACD) 600 mL/袋：成分为枸橼酸钠，枸橼酸等购自广州费森尤斯卡比医疗用品有限公司；体积分数为0.9%氯化钠注射液1 000 mL/袋、体积分数为5%葡萄糖注射液250 mL/袋购自青岛华仁药业股份有限公司；体积分数为10%葡萄糖酸钙1 g 10 mL/支购自四川美大康华药业有限公司，重组人粒细胞刺激因子注射液125 μg/支购自深圳未名新鹏生物医药有限公司.

1.2 方法

供者经粒细胞集落刺激因子250 μg每隔12 h动员3 d，第4天开始应用COM.TEC 型血细胞分离机AutoMNC程序，输入供者性别、身高、体质量、外周白细胞计数、血红细胞压积(Hct)等数据，程序根据输入资料自动预测CD34+细胞采集数，循环血量设定为9 000～12 000 mL，全血流速为40～60 mL/min.采集前用体积分数为0.9%氯化钠注射液预冲管道，排出管道内气体同时检测机器所有蠕动泵、阀门和传感器是否工作正常.

1.2.1 加抗凝剂分组

采用ACD作为血液抗凝剂，COM.TEC 型血细胞分离机采集抗凝要求ACD与全血体积比一般为：1∶9～1∶14；本研究ACD与全血体积比按1∶10、1∶12、1∶14分为3组，每组15人，每人采集1次.由于ACD随血液回到供者体内可能会导致供者出现低钙反应，采集过程中体积分数为10%葡萄糖酸钙10 mL用体积分数为5%葡萄糖稀释为250 mL后同步缓慢静脉滴注.

1.2.2 试验指标观察

采集前当日早晨和采集后立即复查供者血常规：血红蛋白(Hb)、血小板(Plt)；Ca2+、K+、Na+、Cl-的变化；观察供者的安全性.

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 采集前后血液成分变化

采集前后血红蛋白下降、不同组间相比较不明显，无统计学差异(P>0.05，表1，图1)；血小板下降有统计学差异(P<0.05)，不同组间相比较，无统计学差异(P>0.05，表2，图2).

表1 采集前后血红蛋白质量浓度的变化Table 1 The changes in hemoglobin before and after collection

表2 采集前后血小板的变化Table 2 The changes in platelet before and after collection

图1 采集前后血红蛋白质量浓度的变化1 The changes in hemoglobin before and after collection

图2 采集前后血小板的变化
Fig.2 The changes in platelet before and after collection

2.2 采集前后离子浓度变化

采集前后Ca2+、K+浓度下降，不同比例ACD组间Ca+浓度下降均有显著差异(P<0.05)(表3、表4，图3、图4)；而Na+、Cl-浓度下降不显著(P>0.05)，组间相比较，无显著差异(表5、表6，图5、图6).

表3 采集前后Ca2+浓度变化Table 3 The changes in Ca2+ before and after collection

表4 采集前后K+浓度变化Table 4 The changes in K+ before and after collection

图3 采集前后Ca2+浓度变化3 The changes in Ca2+ before and after collection

图4 采集前后K+浓度变化4 The changes in K+ before and after collection

表5 采集前后Na+浓度变化Table 5 The changes in Na+ before and after collection

表6 采集前后Cl-浓度变化Table 6 The changes ion Cl- before and after collection

2.3 采集中有无不良反应

1∶10组低钙反应发生率较其他两组明显，差异有统计意义(P<0.05，表7)；1∶14组出现2例供者采集管流出口小血栓形成.

图5 采集前后Na+浓度变化
Fig.5 The changes in Na+before and after collection

图6 采集前后Cl-浓度变化6 The changes ion Cl- before and after collection

表7 不同组别低钙反应和血栓形成例数Table 7 The low calcium response and thrombosis in different groups

3 讨论

随着造血干细胞移植技术进步，移植费用减少，异基因半相合造血干细胞移植可达到同胞全相合移植疗效和无病生存率，进入人人有供者时代，越来越多的恶性血液疾病患者选择异基因造血干细胞移植术[5-6].以及微移植、活化免疫细胞输注等治疗方式广泛地应用临床，外周血单个核细胞的采集越来越多、越来越普遍.采集前后血液成分、电解质变化和供者安全是值得关注问题.常见的不良反应有：(1)周围静脉痉挛：供者焦虑不安，引出血管不畅，机器反复报警压力过低，影响采集继续.(2)血容量失衡：因采集速度过快引起，可出现胸闷、呼吸困难、血压升高、心律失常，重者出现充血性心力衰竭.(3)ACD与全血体积比过低引起的采集管路中凝血.(4)采集后红细胞、血小板的丢失.(5)枸橼酸盐抗凝引起的低钙反应[7]：常见有口唇、四肢麻木，胃肠道痉挛、腹肌痉挛，恶心、呕吐，严重时出现四肢抽搐等.

目前采集外周单个核细胞的血细胞分离机有多种，其中COM.TEC 血细胞分离机可进行人机对话，能随时观察收集效果、及时调整采集参数，目前市场占有率较高.采集过程中为防止血液凝固利用血液保存液抗凝，比例高容易发生低钙反应等并发症，比例低易形成血栓堵塞管道，本研究应用COM.TEC型血细胞分离机采集正常健康供者外周血单个核细胞，设定ACD与全血不同体积比观察采集前后血液、离子及供者安全性的影响.结果显示：不同ACD与全血体积比组均能够采集完毕；未发生严重不良反应；采集后供者的血红蛋白下降不明显，血小板下降明显；采集后Ca2+、K+浓度下降明显，不同组间Ca2+浓度下降有差异，而Na+、Cl-下降不显著，与曹宇华等[8]报道一致.1∶10组低钙反应较其他两组明显，1∶14组出现2例供者采集管流出口小血栓形成，可能与ACD与全血体积比低，供者血管条件差，机器反复报警暂停有关.综合评估ACD/全血为1∶12时低钙反应发生较低，安全性较高，供者耐受性好.

采集后造成的血红蛋白和血小板下降不足以影响供者身体健康，因为造血干细胞有很强的再生能力，正常人捐献后，骨髓加速代偿，1～2周内血液中各种成分可恢复到原来水平.应用COM.TEC型血细胞分离机采集时血小板丢失较多，可能与血小板和单个核细胞的比重相近，离心后分层时血小板位于单个核细胞上层，自动探测收集有关，可参照陆颖等[9]手动采集方法可以减少血小板损失.采集中血液保存液中枸橼酸盐与Ca2+形成难以解离的可溶性复合物，引起Ca2+浓度下降，速度合适，ACD与全血体积比高，易引起低钙反应，尤其体质量较小的女性供者.可能与体质量低、身体素质差，耐受性差有关，与Setia等[10]研究一致.静脉穿刺针采集时，对那些血管较细的供者由于血流速度较慢，压力低，机器反复报警，导致采集时有中断，如果ACD比例太低，易发生采集管路血栓形成.必要时留深静脉，但创伤较大，有一定穿刺风险，供者不易接受，可考虑桡动脉穿刺，为一种简单、易行的方法.另外，采集后血K+浓度下降，可能与采集过程中生理盐水冲洗管道、采集输注ACD液引起血液被稀释有关；采集后Na+、Cl-浓度有升高现象，可能与采集前、中及采集后应用生理盐水冲管有关，有待进一步研究.

综上，供者外周血单个核细胞采集时，选择合适的ACD与全血体积比，采集过程中全程静脉补钙、适度补钾，可减轻不适反应.COM.TEC 型血细胞分离机采集外周血单个核细胞是一种安全、有效干细胞采集方式.