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岩果止咳液质量标准改进

2020-04-11吕情花

中国药业 2020年7期
关键词:三氯甲烷甘草酸批号

吕情花

(湖南省娄底市食品药品检验检测所,湖南 娄底417000)

岩果止咳液是由石吊兰、果上叶、甘草流浸膏制成的纯中药制剂,具有清热化痰、止咳润肺的功效,用于治疗急、慢性支气管炎,咳嗽痰多的呼吸道疾病。现行质量标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第十九册)》(WS3-B-3610-98),但只有1个化学鉴别、石吊兰的薄层色谱(TLC)鉴别和制剂通则常规检查项。本试验中增加了具有润肺止咳、解毒消肿功效的果上叶的TLC鉴别法[1-2],以有抗菌抗炎、化痰止咳等作用的石吊兰中石吊兰素[3-4]及有抗炎抗过敏等作用的甘草中甘草酸铵[5-6]作为指标成分进行定量测定,用高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法同时测定二者含量,旨在更好地控制岩果止咳液的质量,完善其质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CAMAGⅢ型薄层扫描仪(瑞士Canag公司,配置半自动点样);Waters e2695型高效液相色谱仪(配置2998二极管阵列紫外检测器、控温箱、自动进样器、Empower色谱工作站,美国Waters公司);AUW220D型电子天平(日本岛津公司,精度为十万分之一);KQ5200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

果上叶对照药材(批号为110726-201014),石吊兰素对照品(批号为111555-200602,含量98.1%),甘草酸铵对照品(批号为110731-201720,含量97.7%),均购自中国食品药品检定研究院;岩果止咳液(贵州光正制药有限公司,批号分别为HAE0928,HAE1020,HAE1228);硅胶G板(青岛胜海精细硅胶化工有限公司);甲醇为色谱纯(德国Merck公司);Ⅰ级纯化水(自制);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 果上叶TLC鉴别[7-8]

取本品10 mL,用三氯甲烷振摇提取2次,每次20 mL,合并三氯甲烷液,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇2mL使溶解,即得供试品溶液。取果上叶对照药材3g,加乙醇50 mL,加热回流1 h,滤过,滤液回收溶剂至干,残渣加无水乙醇2 mL使溶解,即得对照药材溶液。取缺果上叶的阴性对照样品10 mL,同法制成阴性对照品溶液。照2015年版《中国药典》(通则0502)TLC法试验,吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-甲醇(1∶1,V/V)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液,烘干,在日光下检视。供试品溶液色谱中,在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,详见图1。

图1 果上叶薄层色谱图

2.2 石吊兰素、甘草酸铵含量测定[9-14]

2.2.1 色谱条件

色谱柱:GeminiC18110A柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.05%磷酸溶液(68∶32,V/V);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;检测波长:250 nm。

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

取石吊兰素、甘草酸铵对照品适量,精密称定,置同一10 mL容量瓶中,加80%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得0.243 3,1.140 mg/mL混合对照品贮备液。精密量取本品2 mL,置25 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按处方及制备工艺分别制备缺石吊兰(石吊兰素)和甘草流浸膏(甘草酸铵)的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性考察:在拟订色谱条件下,分别进样混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液,测定。结果石吊兰素、甘草酸铵的保留时间与对照品一致,各色谱峰与相邻峰的分离度均大于1.5,阴性对照品溶液在相应保留时间处无相应峰,阴性对照无干扰。详见图2。

线性关系考察:精密量取混合对照品贮备液(溶液Ⅰ)10 mL,用甲醇稀释至100 mL(溶液Ⅱ)。在拟订色谱条件下分别取溶液Ⅰ和Ⅱ各2,5,10 μL进样。以质量浓度(X,mg/mL)为横坐标、峰面积值(Y)为纵坐标进行线性回归,得石吊兰素和甘草酸铵回归方程分别为Y石=2.76×103X-5.60×104(r=0.999 9,n=6),Y甘=3.49×102X-1.02×104(r=0.999 9,n=6)。结果表明,石吊兰素和甘草酸铵的质量浓度分别在0.004 866~0.243 3 mg/mL和0.022 8~1.140 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一混合对照品溶液,按拟订色谱条件连续进样6次。结果石吊兰素、甘草酸铵的峰面积的RSD分别为1.02%和0.87%(n=6),表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液,在拟订色谱条件下分别于0,2,6,12,18,24 h时进样10 μL。结果石吊兰素、甘草酸铵峰面积的RSD分别为1.22%和1.34%(n=6),表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批(批号为HAE1228)样品,依法平行制备供试品溶液6份,按拟订色谱条件进样测定。结果石吊兰素、甘草酸铵的平均含量分别为0.242,2.022 mg/mL,RSD分别为1.43%和1.36%(n=6),表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密量取已知含量的同一批(批号为HAE1228)样品9份,每份1.00 mL,置25 mL容量瓶中,分别加入石吊兰素、甘草酸铵(130.92,1088.34μg/mL)混合对照品溶液1.1,1.9,2.6 mL,依法制备供试品溶液,使三者含量均约为已知样品的60%,100%,140%,每个浓度平行3份,精密吸取10 μL,进样测定,计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2.2.4 样品含量测定

取3个批号的样品,依法制备供试品溶液方法制备,每批平行3份,计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定(mg/mL,n=3)

3 讨论

展开剂选择:果上叶的TLC鉴别过程中,参考文献[3-4],以三氯甲烷、乙酸乙酯提取,以三氯甲烷-甲醇-水(7∶2∶1,V/V/V)上层溶液、三氯甲烷-甲醇(2∶1,V/V)、甲苯-甲醇(1∶1,V/V)为展开剂,发现以三氯甲烷提取,甲苯-甲醇(1∶1,V/V)分离度好,可有效降低边缘效应。同时,比较氨蒸气熏、喷以5%三氯化铁乙醇溶液、喷以1%铁氰化钾-1%三氯化铁溶液(1∶1,V/V)混合溶液3种显色方式,发现5%三氯化铁乙醇溶液斑点显色清晰,效果好。

流动相选择:在HPLC分析过程中,参考文献[9-14]分别以甲醇-1%冰醋酸(68∶32,V/V)、甲醇-1%冰醋酸-0.2 mol/L醋酸铵溶液(67∶1∶32,V/V/V)、甲醇-0.05%磷酸(68∶32,V/V)为流动相进行洗脱,发现以甲醇-0.05%磷酸(68∶32,V/V)进行洗脱时,基线平稳,目标峰峰形良好,分离效果佳。

检测波长选择:将2种对照品溶液进行紫外扫描,发现石吊兰素、甘草酸铵最大吸收波长为334 nm和250 nm。相同条件下,在250 nm波长处2种成分的吸收都很明显,且阴性对照品溶液无杂峰干扰。综合考虑灵敏度和专属性,确定最佳检测波长为250 nm。

岩果止咳液是传统药,疗效可靠,使用广泛。目前质量标准仅有TLC鉴别,故建立HPLC法对其活性成分进行多组分定量测定,可更好地控制该制剂的质量。该方法准确度高、重复性好,可作为该制剂的质量控制方法。

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