双指标加权评分法优选颈康酊提取工艺*

潘 东，邓聿胤，饶伟源，2，蓝保强，2△

（1.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁530022）

颈康酊来源于广西壮族民间验方，是上林县中医医院临床应用了10多年的颈康贴基础上研制的院内制剂，由千斤拔、岗梅、三七、苏木、路路通5味药材组方。方中千斤拔、岗梅为君药，三七、苏木为臣药，佐以路路通，诸药合用，共奏活血祛瘀、消肿定痛、舒筋活络、强筋壮骨之功效，用于治疗颈椎病。早期在民间，将颈康酊的药材粉碎后用米酒浸泡后，连同药渣一起外敷于患处，后因患者使用增多，用药过程麻烦，且不利于携带、运输和保存。将其开发成医疗机构制剂，经系统研究，将该制剂制成工艺稳定、易于保存、使用方便、质量稳定等的酊剂。本研究中对颈康酊的提取工艺进行研究，优选最佳提取工艺条件。现报道如下。

1 材料与仪器

千斤拔（批号为20160801）、岗梅（批号为20150501）、三七（批号为20160202）、苏木（批号为20151201）、路路通（批号为20151201），均购于广西天方医药有限公司；人参皂苷Rb1对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110704-201223，供含量测定用，纯度95.9%）。AUW220D型电子天平，LC-10AT型高交订色谱仪（包括SPD-10A型紫外检测器，日本岛津公司）。

2 方法与结果

2.1 溶剂用量确定

为保证与传统用药统一，不引起质的改变，不影响疗效，采用浸渍法进行提取。按酊剂的要求，100 mL药液相当于20 g药材，多次试验结果表明，用6倍量的溶剂浸渍后所得药液最接近理论产量，加入少量溶剂调整至规定量即可。

2.2 L9（34）正交试验设计

根据经验，选择影响浸渍提取的药材粒度（因素A）、浸渍时间（因素B）和溶剂浓度（因素C）3个关键因素，采用L9（34）正交试验法设计，以人参皂苷Rb1含量和总固体为考察指标，人参皂苷Rb1含量作为三七的主要活性成分，更能直接反映提取效果和制剂疗效的关系，故设加权比重为60%，总固体量设加权比重为40%[1-3]。因素水平见表1。取处方中5味药材，按表1以6倍量溶剂进行浸渍提取，滤过，加入适量相应的溶剂定容至1 000 mL，搅拌均匀，即得。正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

2.3 考察指标测定方法

2.3.1 人参皂苷Rb1含量测定

色谱条件[4]与系统适用性试验：色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温为25℃；流动相为乙腈-水（30∶70，V/V）；检测波长为203 nm。理论板数按人参皂苷Rb1计算应不低于3 500。

专属性试验：按处方量称取处方中5味药材中粉共200 g，以45%乙醇为溶剂，加6倍量溶剂浸渍15 d，滤过，加入适量溶剂定容至1 000 mL，搅拌均匀，作为阴性对照样品。取阴性对照样品，以0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为阴性对照品溶液，进样5 μL测定。结果阴性对照品溶液色谱中，在人参皂苷Rb1出峰位置无吸收峰，表明阴性对照无干扰。详见图1。

图1 含量测定高效液相色谱图

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交试验结果

表3 方差分析结果

溶液制备：取适量人参皂苷Rb1对照品，精密称定，以甲醇为溶剂制成质量浓度为0.3 mg/mL的溶液，摇匀，即得对照品溶液。取各工艺浸渍液，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

含量测定：照2015年版《中国药典（四部）》通则0512中高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1含量。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，进样测定，记录色谱图，计算各提取工艺每100 mL浸渍液含人参皂苷Rb1（C54H92O23）的总量。色谱图见图1。

2.3.2 总固体量测定

蒸发皿干燥至恒重，取各工艺浸渍液，摇匀，分别精密量取10 mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，在105℃烘箱中干燥3 h，将蒸发皿移至干燥器，冷却30 min，快速精密称定质量，记录遗留残渣量，计算各提取工艺每100 mL浸渍液总固体的总质量（g）。

2.3.3 测定结果

分别依法测定计算各提取工艺每100 mL浸渍液含人参皂苷Rb1（C54H92O23）的总量（mg）和总固体质量（g）。结果见表4。

表4 人参皂苷Rb1含量和总固体测定结果

3 讨论

由表2可见，因素B（浸渍时间）的影响最显著，其次为因素A（药材粒度），因素C（溶剂浓度）影响最小。直观分析由3个因素的Ki水平可得到本试验的最佳条件为A2B3C1。由表3可见，因素影响的主次关系为因素B（浸渍时间）＞因素C（溶剂浓度）＞因素A（药材粒度），其中因素B影响显著。由3个因素的Ki水平可得到本试验的最佳条件为A2B3C1。故可优选出最佳工艺条件为A2B3C1，即以粉碎粒度为粗粉，浸渍时间为15 d，乙醇浓度为45%。

在中药制剂的提取工艺研究过程中，由于中药成分的复杂性，有效成分难以完全确定，故某单一成分或提取率不应作为考察的唯一标准[5-6]。双指标甚至多指标加权评分法的应用，可更好地作为考量标准，有效地控制制剂提取工艺。

皂苷类为三七的主要活性成分。本研究结果显示，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re分离不好，三七皂苷R1与处方中其他成分分离不好，影响定量的准确性，最终选定人参皂苷Rb1作为考察指标[7-8]。