高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认

2020-04-07夏玲玲

科技资讯 2020年3期

夏玲玲

摘要：目的研究与分析高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认情况。方法采取高效液相色谱-串联质谱分析方法来同时建立测定肌肉组织中新霉素、多黏菌素B、灰黄霉素、喹乙醇以及其代谢物3-甲基喹啉-2-羧酸，同时采取外标法定量。结果在质量浓度1.0～200.0g/L范围内，4种药物均表现出良好的线性关系，且R2均超过0.9980。喹乙醇及MQCA的方法检出限为0.5g/kg，灰黄霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法检出限为5.0g/kg，4种药物在阴性样品中的加标回收率为82.1%～98.5%。结论采取高效液相色谱-串联质谱法来进行处理，操作简单便捷，对结果干扰性较小，可以加以广泛应用。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法肌肉组织药物残留

中图分类号：X824 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2020）01（c）-0230-02

随着药物的滥用，在动物肌肉组织中会残留很多药物，目前已经有部分报道了灰黄霉素、喹乙醇、黏菌素以及新霉素等药物的检测方法，很多法律法规也对各类药物的检测方法进行了规定[1]。该文对高效液相色谱-串联质谱法建立同时测定肌肉组织中4种药物残留的方法及其确认情况进行研究与分析，现报道如下。

1. 材料与方法

1.1 材料和试剂

试验样品选取购买自市场的8份猪肉，4份兔肉以及8份鸡肉。试剂选取德国Dr.Ehrenstorfe公司生产的纯度>99.0%的MQCA、纯度>99.0%的喹乙醇、纯度>84.0%的硫酸多黏菌素B、纯度>98.0%的灰黄霉素、纯度>90.0%的硫酸新霉素标准品。德国Merck公司生产的乙腈以及甲醇。此次试验均为超纯水，同时该实验使用甲酸为上海安谱实验科技股份有限公司生产，分析纯为广州化学试剂厂生产。

1.2 仪器与设备

德国CNW公司生产的200mg、6mL HLB固相萃取小柱，德国IKA公司生产的T18高速均质机以及MS3 Basic漩涡振荡器，美国Agilent公司生产的6490串联三重四极杆质谱仪以及1260超高效液相色谱仪，昆山市超声仪器有限公司生产的250W KQ-250DV超声波清洗仪，美国Millipore公司生产的Milli-Q纯水仪，KDC-1044离心机采用由北京中科佳仪科技有限公司生产的仪器。

1.3 方法

1.3.1 配制标准溶液

准确称取10.0mg5种标准品，放置于100mL的棕色容量瓶中，溶解标准品采用50∶50，V/V10mL乙腈-1%甲酸水溶液，采用乙腈进行定容处理，将5种单标储备液分别吸取1.0mL，随后定容至100mL，随后得到混合标准溶液。在-18℃条件下保存标准溶液。

1.3.2 样品处理

（1）提取。

首先切碎肌肉组织，随后将其打碎，混合均匀，将均质后的5.00g样品放置在塑料离心管（50mL）内，向其内加入提取溶剂10mL，随后进行涡旋，涡旋时间为1min，在超声提取10min，离心速度为4000r/min，离心时间为3min，向25mL比色管中加入上清液，随后进行重复提取，合并2次对上清液进行提取，使用提取溶剂进行定容，需要定容至25.0mL，随后进行摇匀，待净化[2-3]。

（2）净化。

预先将HLB固相萃取柱进行活化，活化采取超纯水10mL，甲醇5mL，待完全流出液体后，对固相萃取柱采用5mL超纯水淋洗，随后进行减压抽干处理，目标化合物采用10mL净化洗脱液进行洗脱，洗脱完毕后将其放置于15mL离心管内，将洗脱液用氮气在50℃条件下浓缩至近干。采用1.0mL初始流动相溶解浓缩物，采取0.22m滤膜来进行过滤处理，测定采用HPLC-MS/MS[4-5]。50℃条件下将洗脱液用氮气浓缩至近干。浓缩物采用1.0mL初始流动相溶解，过滤采取0.22m滤膜，最后采用HPLC-MS/MS进行测定[4-5]。

2 结果

2.1 樣品提取和净化条件的选择

很多脂溶性的内源性物质存在于动物肌肉组织内，在检测过程中这些物质会对化合物的相应产生影响，因此将干扰物质采取合适的净化方式和提取溶剂去除十分必要[6]。

2.1.1 选择提取溶剂

极性较大的药物包括新霉素、多黏菌素B和喹乙醇，可以使用极性溶剂进行提取，而极性较小的药物包括MQCA和灰黄霉素，可以使用有机溶剂进行提取，在酸性条件下多黏菌素B和新霉素具有较高的提取效率。此次实验结果显示，喹乙醇、MQCA以及灰黄霉素可以通过单一有机溶剂体系来进行提取，但是提取新霉素以及多黏菌素的效果较差，使用单一的5%甲酸水溶液来提取灰黄霉素几乎没有提取效果。

2.1.2 净化洗脱液的选择

利用固相萃取小柱净化提取液，可以有效地去除杂质，同时将基质的干扰减少。此次实验结果显示，采用体积分数为20%和50%的乙腈来洗脱杂质，具有较佳的去除效果，但是仍有30%和45%未被洗脱的灰黄霉素残留，洗脱采用纯乙腈洗脱液后，会具有较多的杂质。而采取5%甲酸水-80%乙腈来进行洗脱时，具有较少的杂质，而药物的回收率均超过80%，因此，最佳的洗脱液为10mL 5%甲酸水-80%乙腈。

2.2 线性方程和检出限

在质量浓度1.0～200.0g/L范围内，4种药物均表现出良好的线性关系，且R2均超过0.9980。喹乙醇及MQCA的方法检出限为0.5g/kg，灰黄霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法检出限为5.0g/kg（见表1）。

2.3 回收率

4种药物在阴性样品中的加标回收率为82.1%～98.5%。

3 结语

采取高效液相色谱-串联质谱法来进行处理，操作简单便捷，对结果干扰性较小，可以加以广泛应用。

参考文献

[1] 宁霄，金绍明，高文超，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中氟虫腈及其代谢物残留[J].分析化学，2018，46（8）：1297-1305.

[2] 周广运，王桂姬，任皓威，等.超高效液相色谱-串联质谱法鉴定猪肉的特异性肽生物标志物[J].分析化学，2017，45（2）：205-210.

[3] 李文廷，瑞雨，师真，等.桑椹中11种真菌毒素的检测分析[J].环境化学，2018，37（1）：185-187.

[4] 周理，邹宇聪，张佩，等.急性非特异性腰痛的腰肌横截面积、脂肪浸润与不对称性及其临床意义[J].中国疼痛医学杂志，2017，23（2）：148-151.

[5] 吴红然，陈雪晓，宋学琴，等.肯尼迪病一例患者的临床表现、肌肉病理、基因检测及其家系遗传学分析[J].脑与神经疾病杂志，2017，25（2）：107-110.