余苣降酸茶质量标准研究*

郑江萍，张志权，吉慧敏，黄良永

(1.湖北医药学院附属十堰市太和医院药学部，十堰 442000；2.湖北医药学院药学院，十堰 442000)

余苣降酸茶是我院根据传统经验方研制的中药袋泡茶，具有利尿消肿、清热凉血、通经活络、疏散风热之功效，主要用于高尿酸血症所致痛风、痛风性关节炎及无症状型高尿酸血症。余苣降酸茶处方由余甘子、菊苣、粉葛、桑叶、淡竹叶5味中药组成，处方中余甘子为君药，具有清热凉血、消食健胃、生津止渴功效；菊苣和粉葛为臣药，具有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿和解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒之功效；桑叶和淡竹叶为辅助药物，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目和清热泻火、除烦止渴、利尿通淋之功效[1]。该制剂为新开发制剂，为控制该制剂质量，笔者参考文献[2-7]，依据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则中茶剂质量标准要求，对该茶剂性状、水分、装量差异、微生物限度进行常规检查，对桑叶和淡竹叶进行薄层色谱(TLC)鉴别，对余甘子和粉葛药材的指标成分没食子酸和葛根素采用高效液相色谱(HPLC)法进行定性和定量测定，并对其制备工艺进行考察。

1 仪器与试药

1.1仪器 DIAON U3000高效液相色谱仪(美国戴安公司，四元梯度泵、自动进样器、多波长紫外检测器、柱温箱)；Chromeleon色谱工作站；Waters SunFire C18色谱柱(美国WATERS公司，4.6 mm×250 mm，5 μm)；KM3400超声波提取仪(广东科盟仪器厂，可调功率)；AUW120D电子分析天平(日本岛津公司，感量：0.01 mg)；FA-2004电子分析天平(上海精密仪器，感量：0.1 mg)；MAC50/1/NH红外水分测定仪(欧盟波兰RADWAG Wagi Elektroniczne)。

1.2试药 没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110831-201204，含量：89.9%)；葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110752-201313，含量：100%)；余甘子、菊苣药材由湖北清大药业科技有限公司提供(批号：170301)；粉葛、桑叶、淡竹叶由湖北神农本草中药饮片有限公司提供(批号分别为：20170907，2180301，20170801)，药材由湖北医药学院药学院中药教研室叶方副教授鉴定，均符合《中华人民共和国药典》2015年版一部规定；余苣降酸茶(湖北医药学院附属十堰市太和医院制剂室生产，规格：每袋5 g，批号：20180521，20180718，20180922)；乙腈(美国TEDIA公司，色谱纯)；水为超纯水；甲醇、三氯甲烷、石油醚、甲苯、乙酸乙酯、甲酸均为分析纯；硅胶G薄层板(青岛海洋化工有限公司，批号：20170917)。

2 方法与结果

2.1处方 余甘子、菊苣、粉葛、桑叶、淡竹叶各200 g。

2.2制备 将处方药材以水快速抢洗，流通蒸汽灭菌30 min，混干，粉碎成粗粉，过筛，混匀，分装成每袋5 g。

2.3质量标准研究

2.3.1性状和检查 性状：本品为灰棕色粉末，味微苦；水分检查[1]：依据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则水分测定操作方法测定，≤12.0%。测得结果均符合规定，数据见表1。

微生物限度检查[1]：依据《中华人民共和国药典》2015年版通则四部“微生物限度”检查法检查，需氧菌总数≤10-4cfu·g-1，真菌和酵母菌数≤10-2cfu·g-1，不得检出大肠埃希菌(1 g)，不得检出沙门氏菌(10 g)，耐胆盐革兰阴性菌应<102cfu·g-1。测定结果均无菌生长。

2.3.2鉴别 桑叶的TLC鉴别[1]：取本品粉末5 g，加石油醚(60～90 ℃)30 mL，加热回流30 min，弃去石油醚液，药渣挥干石油醚，加乙醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10 mL，60 ℃搅拌使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含桑叶的处方量其他药材，按制备工艺制备缺桑叶的阴性样品，并按上述供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。另取桑叶对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5：2 ：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外灯(波长365 nm)检视，3批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色斑点。

淡竹叶的TLC鉴别[8]：取本品粉末2.5 g，加纯化水50 mL，加热煮30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加三氯甲烷60 mL，超声30 min，滤过，滤液水浴浓缩至1 mL，作为供试品溶液；取不含淡竹叶的处方量其他药材，按制备工艺制备阴性样品，并按上述供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。另取淡竹叶对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(19：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(波长254 nm)下检视，3批供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色荧光斑点；阴性样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。见图1。

表1 余苣降酸茶水分测定结果

Table.1DeterminationresultsofwatercontentinYujujiangsuantea%

批号第1次第2次平均值201805214.024.064.04201807183.893.853.87201809224.134.114.12

装量差异[1]：依据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则“装量差异检查法”操作方法测定。测得结果均符合规定，数据见表2。

余甘子和粉葛的鉴别：在含量测定项下，3批供试品溶液色谱图中没食子酸和葛根素色谱峰的保留时间和对照品溶液色谱图中的保留时间一致；而且缺余甘子的阴性样品溶液色谱图中无相应没食子酸色谱峰，缺粉葛的阴性样品溶液色谱图中无相应的葛根素色谱峰。

表2 余苣降酸茶装量检查结果

Table.2InspectionresultofthequantityofYujujiangsuanteag

批号12345678910平均装量201805215.004.995.024.984.965.005.015.105.054.985.01201807184.985.025.125.104.995.115.064.955.075.195.06201809225.034.894.925.105.095.184.955.205.135.085.06

2.3.3余甘子和粉葛的含量测定 色谱条件：Waters SunFire C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；流动相A：0.2%磷酸溶液，流动相B：乙腈，按表3进行梯度洗脱；检测波长273 nm；柱温30 ℃；流速1.00 mL·min-1。

图1 薄层色谱图(1.供试品，批号：20180521；2.对照药材；3.阴性样品)

Fig.1TLC(1.sample：20180521;2.medicinalmaterialsreference;3.negativesample)

对照品储备液的制备：精密称取没食子酸对照品(89.9%)101.4 mg置于50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得1.823 2 mg·mL-1没食子酸对照品储备液；精密称取葛根素对照品31.38 mg，置于50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得0.627 6 mg·mL-1葛根素对照品储备液。分别精密量取没食子酸和葛根素对照品储备液2.5 mL，置于同一20 mL量瓶，用甲醛稀释至刻度，混匀，即得对照品混合溶液。

表3 梯度洗脱表

供试品溶液的制备：精密称定余苣降酸茶粉末5 g，加70%甲醇50 mL，称定质量，回流30 min，放置至室温后，用甲醇补充丢失质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液即得供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：按原处方量和工艺制备缺余甘子的降酸茶，按“供试品溶液的制备”方法制备阴性对照溶液Ⅰ(缺余甘子)。按原处方量和工艺制备缺粉葛的降酸茶，按“供试品溶液的制备”方法制备阴性对照溶液Ⅱ(缺粉葛)。

色谱系统适用性实验：取对照品混合溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪。在规定色谱条件下，供试品溶液在与对照品色谱相应的位置有没食子酸峰和葛根素峰，二成分峰与其相邻峰完全分离，理论板数以葛根素峰计均>4 000；且阴性对照溶液Ⅰ中无相应没食子酸峰，阴性对照溶液Ⅱ中无相应葛根素峰；其他成分对测定无干扰，见图2。

标准曲线的绘制：分别精密量取没食子酸对照品储备液和葛根素对照品储备液各10.0，5.0，2.5，1.0，0.5 mL置于同一20 mL量瓶，混合均匀，用甲醇定量稀释成含没食子酸911.6，455.8，227.9，91.2，45.58 μg·mL-1，含葛根素313.8，156.9，78.45，31.38，15.69 μg·mL-1系列混合对照品溶液，精密量取5 μL，注入高效液相色谱仪，以峰面积(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标，经线性回归，得标准曲线方程：Y没食子酸=0.003 7X没食子酸+0.016 7，R2=0.999 3，线性范围45.58～911.6 μg·mL-1；Y葛根素=0.005 6X葛根素+0.005 2，R2=0.999 3，线性范围15.69～313.8 μg·mL-1。在线性范围内，二者进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。

A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液Ⅰ；D.阴性对照溶液Ⅱ；1.没食子酸；2.葛根素

精密度实验：取混合对照品溶液5 μL，在规定色谱条件下，连续平行进样6次，记录没食子酸和葛根素的峰面积，计算6个峰面积值RSD值，没食子酸、葛根素峰面积RSD分别为1.575%、0.179%，表明分析方法精密度良好。

重复性实验：取同一批(批号：20180521)样品，按规定供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液6份，分别取5 μL进样，记录两种成分峰面积，并计算峰面积RSD值。结果没食子酸峰面积平均值为111.279 2，RSD为0.98%；葛根素峰面积平均值21.542 6，RSD为1.16%，表明测定方法重复性好。

稳定性实验：取同一批(批号：20180521)样品，按照规定供试品溶液制备方法制成供试品溶液，在室温下放置1，6，12，24 h，分别测定色谱峰面积，计算得没食子酸和葛根素峰面积RSD分别为0.55%，0.67%，表明样品在24 h内稳定。

回收率实验：精密称取同一批(批号：20180718)样品0.5 g，共6份，分别精密加入没食子酸对照品5.5 mg、葛根素对照品2.0 mg，加入70%甲醇溶液10 mL，按照规定供试品溶液的制备方法，制备样品并测定没食子酸和葛根素的峰面积，用外标一点法计算含量和回收率。结果见表4。

样品含量测定：取3批样品，按规定供试品溶液制备方法制成样品溶液，在规定色谱条件下，分别取对照品混合溶液(含没食子酸455.8 μg·mL-1、葛根素156.9 μg·mL-1)和样品溶液5 μL，进样，测定两种成分峰面积，以外标一点法计算没食子酸、葛根素含量。结果见表5。

3 讨论

在筛选色谱条件时，流动相采用0.2%磷酸溶液-乙腈(95：5)等度洗脱，没食子酸、葛根素与相邻杂质分离不理想；采用梯度洗脱，流动相极性由强到弱(乙腈比例由5%增大到70%)，使2种成分与相邻色谱峰完全分离，取得较为理想的结果。没食子酸的最大吸收波长为273 nm，葛根素的最大吸收波长为254 nm。本实验分别对254和273 nm进行测定，结果显示273 nm波长可兼顾2种被测成分的最大灵敏度，故采用273 nm作为检测波长。

表4 没食子酸和葛根素加样回收实验结果

Table.4Experimentalresultsofrecoverytestongallicacidandpuerarin

成分取样量/g样品量加入量测得量mg加样回收率平均回收率RSD%没食子酸0.650 95.165.5410.4695.670.652 25.175.5710.6197.670.649 55.155.5610.5396.760.643 55.105.5910.95104.650.649 85.155.6211.00104.090.653 85.185.5610.96103.96100.474.16葛根素0.650 92.041.883.8194.150.652 22.041.853.7994.590.649 52.041.923.8091.670.643 52.022.164.21101.390.649 82.042.104.0997.620.653 82.052.023.9393.0795.413.70

表5 没食子酸和葛根素含量测定结果

Table.5Contentdeterminationofgallicacidandpuerarinn=3，mg·g-1

样品批号没食子酸葛根素20180521 含量8.093.04 RSD/%1.471.9020180718 含量7.933.14 RSD/%0.940.4920180922 含量7.793.29 RSD/%0.530.18

在样品溶液制备时，分别采用50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇、100%水作为提取溶媒，采用超声和回流提取方法，采用0.5，1，1.5 h不同提取时间，进行单因素优化，比较提取效果，结果表明70%甲醇回流0.5 h提取效果最好。

根据3批样品含量测定结果，以没食子酸和葛根素含量平均值的80%作为最低含量限度来控制成品中2组分的含量，即每克样品中没食子酸、葛根素含量分别不得低于6.36和5.53 mg。