Xpert MTB/RIF试剂盒检测痰标本结核分枝杆菌和利福平耐药的应用评价

安东成 王 杰 张 冬 周 洁 高 阳

（大连市结核病医院，辽宁 大连 116037）

全球约有20亿人感染了结核分枝杆菌，每年有200万人因结核病死亡。结核分枝杆菌主要存在于肺部，呼吸道感染是主要的传播途径，是一种传染性很强的空气传播疾病。传统检测结核菌方法有涂片抗酸染色法和固体培养法。涂片抗酸染色法用时较短但阳性率较低。固体培养法所需时间较长，且在菌量较低时容易漏检。Xpert MTB/RIF试剂盒是检测结核分枝杆菌复合群DNA和利福平耐药相关的rpoB基因突变，一种巢式实时荧光定量PCR方法的体外诊断试剂，整个检测过程只需2.5小时，并能对一线抗结核药利福平进行耐药分析。

1 资料与方法

1.1 痰标本：108份痰标本来自2019年1月至2019年2月大连市结核病医院住院患者，所有患者均经临床表现、实验室检查、影像学检查等手段或经抗结核药物治疗有效而证实（每份痰标本量约为5 mL，其中痰涂片需0.05 mL、Xpert MTB/RIF检测需1 mL、罗氏培养需1～2 mL）。

1.2 痰涂片检测：痰涂片：挑取痰标本中可疑部分约0.05 mL，进行痰涂片抗酸染色[1]，

1.3 Xpert MTB/RIF检测：无菌吸管吸取1ml痰标本并加入2 mL样本处理试剂于无菌离心管中，盖紧盖子，在涡旋振荡20 s，样本在室温下静置15 min，样本充分液化后，使用无菌移液管，将液化的样品吸入，直至弯月面在移液管的最低标记之上。打开检测匣盖子，将处理后的样品由检测匣的加样孔缓慢加入，关闭检测匣盖子。将检测匣放入GeneXpert系统仪器中进行检测。结果判读：Xpert检测对MTB检出的结果划分为高（Ct范围＜16）、中（Ct范围16～22）、低（Ct范围22～28）、极低（Ct范围＞28）。MTB检出情况下对利福平耐药的检测结果分为“利福平耐药检出”和“利福平耐药未检出”。阴性结果为未检出。

1.4 罗氏培养检测：罗氏培养：按照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》[2]中的相关要求，严格操作，完成后置于37 ℃培养箱中孵育。6～8周后，对培养阳性菌种进行比例法药敏试验及菌种鉴定（PNB）。

1.5 统计学处理：比较Xpert MTB/RIF检测与罗氏培养+比例法药敏鉴定符合率。

2 结果

2.1 Xpert检测与痰涂片结果比较：108份中涂片阳性27份，涂片阴性81份。涂片阳性样本中Xpert检测阳性26份，1份阴性；涂片阴性样本中Xpert检测阳性17份，64份阴性。Xpert检测与痰涂片检测的符合率为83.3%（79/108），见表1。

表1 Xpert与涂片结果对比

2.2 Xpert检测与罗氏培养结果比较：108份中罗氏培养阳性43份，罗氏培养阴性65份。罗氏培养阳性标本中Xper阳性41份，2份阴性，罗氏培养阴性样本中Xper阳性13份，52份阳性。Xper检测与罗氏培养符合率为86.1%（93/108），见表2。

表2 Xper与罗氏培养结果对比

2.3 Xper检测与罗氏培养+菌种鉴定结果比较：罗氏培养阳性标本43份，菌种鉴定41份为结核分枝杆菌，2份为非结核分枝杆菌。41份菌种鉴定结核分枝杆菌Xper检测41份；2份非结核分枝杆菌Xper检测均为阴性。Xper检测与罗氏培养+菌种鉴定符合率为100%（43/43），见表3。

表3 Xper与培养+菌种结果对比

2.4 Xpert MTB/RIF检测与比例法药敏利福平耐药结果比较：41份结核分枝杆菌中，Xpert MTB/RIF检测利福平敏感36份，耐药5份。比例法药敏利福敏感36份，耐药5份。36份Xpert MTB/RIF检测利福平敏感，比例法药敏利福敏感36份；5份Xpert MTB/RIF检测利福平耐药，比例法药敏利福耐药5份。Xpert MTB/RIF检测与比例法药敏利福平耐药结果符合率为100%（41/41），见表4。

表4 Xper与比例法药敏果对比

3 讨论

108份痰标本三种方法对分枝杆菌检出率分别为：痰涂片检测阳性率25.0%（27/108）；罗氏培养检测阳性率39.8%（43/108）；Xper检测阳性率50.0%（54/108）。剔除2例非结核分枝杆菌后痰涂片检测阳性率25.0%（27/108），罗氏培养检测阳性率37.8%（41/108），Xper检测阳性率50.0%（54/108）。Xper检测阳性率比痰涂片高25.0%，比罗氏培养高12.2%，在检测结核分枝杆菌方面Xper检测要高于痰涂片检测及罗氏培养检测。在痰涂片检测中，不同的检验人员操作可能会略有差异，经验丰富的检验人员占优，Xper检测严格按操作规范即可。

实验中Xper检测54例阳性，罗氏培养检测41例阳性（已剔除2例NTM），13例不符。对13例样本进行分析，其中Xper检测分级6例为极低含菌量，5例为低含菌量，2例为中含菌量。5例低含菌量中1例罗氏培养出现污染。10例样本（6例极低含菌量，4例低含菌量）说明随着菌量的下降，罗氏培养检出率降低，与相关报道相符[3]。2例为中含菌量罗氏培养检测为阴性，可能与住院患者用药后，结核菌分枝杆菌死亡后排出体外，Xper检测结核分枝杆菌复合群DNA可以检测，而罗氏培养只能检测活的结核分枝杆菌，未检出。

综上所述，罗氏培养阳性率要高于痰涂片，Xper检测阳性率要高于罗氏培养，这与相关报道一致[4-5]。利福平对巨噬细胞内外的结核分枝杆菌均有快速杀菌作用，特别是对C菌群有独特的杀灭菌作用。异烟肼与利福平联用可显著缩短疗程。经与Xpert MTB/RIF检测与比例法药敏利福平耐药结果比较，结果一致，说明实验室对于结核病诊断及对利福平耐药的患者筛查具有一定意义和应用前景[6]。Xper检测具有较高的成本，对患者有一定的经济压力。抗结核治疗需联合用药Xper检测目前只能检测利福平一种药耐药情况也是一种局限。