参麻益智方的急性毒性实验研究

刘剑刚刘美霞李 浩孙成成宋博策周丽娟

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体质量(18～20)g，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK(京)2014-0006。中国中医科学院西苑医院屏障环境实验动物室喂养，温度控制(24～26)℃，相对湿度控制在50%～70%，光照条件(白昼)为每12 h交替。

1.1.2 药物与试剂 参麻益智方(由人参、天麻、川芎、鬼箭羽组成，比例3∶3∶3∶2)浸膏，生药含量为2.44 g/g，由中国中医科学院西苑医院中药制剂室制备，试验前用蒸馏水配制成含生药浓度2.44 g/mL的药液。

1.2 方法

1.2.1 半数致死量(LD50)测定 进行LD50测定之前先进行预实验，按照临床剂量计算分成若干组，每组4只，以0.2 mL(10 g)的容量给药，组间给药浓度以10倍递增，找出引起动物死亡的药物浓度。然后进行正式试验，以ICR种小鼠，雌雄各半，每组10只，根据预实验确定的最高、最低剂量，分为6组，以公式计算各组剂量并给药，观察并详细记录动物反应情况，记录动物死亡分布情况，连续观察7～14 d，用Bliss统计方法计算LD50值。

1.2.2 最大耐受量试验 若测不出LD50，则进行最大给药量测定。将ICR种小鼠，雌雄各半，分为对照组和给药组，每组20只。对照组给予最大容积生理盐水一次灌胃，给药组给予最大浓度、最大容积药物一次灌胃，连续观察14 d，记录动物反应情况，计算最大给药量(40 mL/kg)，并推算相当于临床用药量的倍数。

1.2.3 观察指标 观察小鼠形态外观、行为活动、饮食情况、粪便形状等，填写单次给药毒性试验观察记录表，给药后4 h内连续观察，2～14 d时每日上午、下午各观察1次，给药前、给药后7 d、观察期结束时分别测定体重，麻醉[3.5%水合氯醛溶液0.9 mL/(100 g体质量)]，之后安死术处理动物，常规解剖，对小鼠主要脏器进行大体观察，对脑组织进行病理制片检查。动物实验过程及实验动物处理方式符合实验动物伦理的要求，遵循国家科学技术委员会颁布《实验动物管理条例》的规定。

2 结 果

2.1 半数致死量 给药后连续观察7 d，结果无一只动物死亡，给药后小鼠一般状态、行为活动、饮食情况、分泌物和排泄物等均未见明显异常，因受试药物质量浓度和体积限制，无法测出受试药物的半数致死量，故进行了最大耐受量测定。

2.2 最大耐受量 给药后连续观察14 d，记录小鼠中毒症状和死亡情况，结果给药组小鼠在给药后无明显不良反应及死亡。开始灌胃后，对照组与给药组小鼠体质总体趋势一致，在7～9 d、12～15 d给药组雄小鼠有小幅度的波动，但所有小鼠体质量持续增长，在合理范围内波动。所有小鼠体质量增长无明显异常，精神状态佳，毛色白而有光泽，二便正常。连续观察14 d后解剖小鼠，各重要脏器肉眼可见无异常。经统计学分析，各平行时点小鼠体质量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见图1、表1。

表1 参麻益智方对小鼠体质量的影响比较(±s) 单位：g

3 讨 论

参麻益智方由人参、川芎、天麻和鬼箭羽组成，方中以人参为君药，具有大补元气、安神增智之功效。天麻为臣药，具有平肝息风，滋阴潜阳，活血通经之功效。鬼箭羽为佐药，具有行血通络，散瘀之功效，使人参益气养荣而不壅腻。川芎为使药，兼具引经作用，为血中之气药，可载诸药直入血分，具活血化瘀，行气之功，载诸药直入脑窍。全方诸药合用，共奏补虚益智，平肝潜阳，化瘀通络之功。

既往文献报道人参主要活性成分有人参皂苷、人参多糖、人参挥发油等，其中人参皂苷为人参中的主要有效物质，对于神经系统具有兴奋、抑制的双向作用[2]，其毒性报道，主要为关于其胚胎毒性及对新生大鼠心脏毒性的研究[3]。苏晓梅等[4]汇总分析国内外关于人参皂苷文献，发现人参皂苷-Rg3具有抗肿瘤、降低化疗药物心脏毒性及肾毒性、反转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药性、保护中枢神经系统和心血管系统、抗疲劳、降低血糖、修复创面药理的作用。吴晓刚等[5]研究180 d慢性毒性试验结果证实，食用人参未对大鼠血液学指标产生明显影响。天麻能有效保护细胞凋亡及氧化损伤[6]，在神经衰弱的临床治疗中效果确切[7]，天麻素对于小鼠的急性毒性试验、亚急性毒性试验和对犬的亚急性毒性实验结果显示无毒性、无致畸和致突变作用，说明天麻素临床应用安全[8-10]。鬼箭羽的毒性报道研究发现其细胞毒活性[11]和对健康志愿者外周血单核细胞有微弱毒性作用[12]，谢家骏等[13]对由鬼箭羽水提物和黄柏、葛根有效成分提取物混合物的长期毒性观察实验发现，其有减少大鼠耗食量、降低胆固醇作用。王相[14]以临床用量300倍剂量给小鼠，未发现鬼箭羽的急性毒性作用。夏荃等[15]实验发现低剂量(2 g/kg，相当于临床正常剂量)川芎水煎液有弱胚胎毒性，对于具体的毒性成分和毒理机制仍有待研究。而郑旭霞等[16]对活血化瘀类中药饮片引起的不良反应分析发现，川芎毒性不明显，其导致的不良反应主要表现在皮肤、消化系统。参麻益智方的组方配伍已具有知识产权[17]，文献查询未发现其四味药配伍的毒性研究，本研究未测出参麻益智方的半数致死量，小鼠在给药后无死亡，一般状态、行为活动、饮食情况、分泌物和排泄物等均未见明显异常，说明参麻益智方药味配伍是安全的。

参麻益智方用于小鼠灌胃的最大给药量为生药97.6g/kg，约为临床用量的207倍(临床用量为生药0.47 g/kg)。一般认为，按照体质量计算，小鼠一天内最大给药量相当于常人临床日计量的100倍以上是较安全的[17]。本研究通过灌胃给药无法测出参麻益智方的半数致死量。在该剂量下，给药前、给药后两组体质量间比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明参麻益智方对小鼠消化吸收功能无显著影响。给药组雄小鼠14 d内出现两次体质量波动，考虑与灌胃(药液容量)不当影响小鼠消化有关，也有可能与药物益气活血的功效有促进排便作用有关[18]，从体质量趋势线可以看出，小鼠体质量在合理范围内轻微波动，并逐渐增加。给药后小鼠精神状态佳，毛色白而有光泽，二便正常，没有出现困倦、竖毛、弓背等症状，说明参麻益智方没有神经系统的刺激作用。因此，可以认为参麻益智方的急性毒性较小，在常规剂量下服用是安全的。

本实验为参麻益智方的急性毒性试验研究，结果表明参麻益智方未发现不良反应和死亡，这也为随后开展的慢性毒性试验及药效药理试验提供了剂量依据。