分析DLAT 在结直肠癌中的表达和临床意义

刘振兴，张震，高翔

（武安市中医院，河北 邯郸 056300）

0 引言

结肠癌发生过程中具有多种影响因素，具有复杂的病理机制，其中主要的高危因素为环境因素，占比近50%，与高脂肪、高热量自己低纤维素等饮食习惯均存在密切关联[1]。在结肠癌遗传易感性的机制中外来致癌物以及抑癌物质代谢相关酶基因的多态性具有关键作用。体内Ⅱ相解毒酶中的二氢硫辛酸转乙酰基酶（Dihydrolipoyl transacetylase，DLAT）具有重要作用，可促进乙酰化反应，直接或间接影响体内芳香胺类、杂环胺类等致癌物的活化剂灭活过程，其活性具有显著的遗传多态性。本项研究旨在研究二氢硫辛酸转乙酰基酶基因多态性对结肠癌易感性的影响，现汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。分别选取210 例、242 例2017 年3 月至2018 年5 月本院收治的结肠癌患者以及体检结果正常的成人作为研究对象。上述研究对象分别分为研究组及常规组。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取：采用由上海某生物科技公司购买的DNA试剂盒提取外周血淋巴细胞基因DNA。

1.2.2 分析基因型：引物序列由大连某生物科技公司合成，引物序列分别为为5’→3’GGAACAAATTGGACTTGG、5’→3’TCTAGCATGAATCACTCTGC。由上海某生物工程有限公司购买PCR 反应体系，扩增条件为先在95℃温度下反应5 分钟，再在相同温度下反应60s，改用57℃持续反应1 分钟，最后在72℃温度下反应90s，重复35 次，在72℃下反应5 分钟。酶切后置于1.5%质量分数琼脂糖凝胶中电泳，持续1 小时，经30 分钟EB 染色后，置于紫外线灯下观察。

1.2.3 吸烟情况：研究组具有吸烟史的患者例次为150 例，60 例患者不吸烟；常规组吸烟例次为140 例，102 例不吸烟。

1.3 统计学分析。研究数据录入SPSS 12.0 软件进行统计分析。组间基因型分布的差异采用χ 2 检验。相对危险度采用非条件Logistic 回归分析，P＜0.05 时，差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 DALT 基因型与结肠癌遗传易感性关系。研究组检查出154 例不同基因型，常规组共检出188 例。研究组Wt/M2的频率远高于常规组，而Wt/M3 基因型频率远低于常规组，（P＜0.01，P＜0.05），差异均具有统计学意义。经比较，两组的慢速乙酰化基因型频率差异不明显，P＞0.05，无统计学意义，附表1，表2。

表1 DLAT 基因型与结肠癌关系（例）

表2 DLAT 慢速没基因型与结肠癌关系（例）

2.2 DLAT 基因型与吸烟相关性。吸烟组DLAT 快速乙酰化型个体发生结肠癌的风险高于不吸烟组，P＞0.05，组间差异无统计学意义，附表3。

表3 DLAT 基因型与吸烟相关性

3 讨论

单个基因位点对DLAT 基因多态性起决定性作用，多以常染色体隐性遗传形式存在。导致酶活性差异的主要原因的编码及非编码区点发生突变，继而对个体间由芳香胺进行诱导的肿瘤易感性产生影响。根据DLAT 结构基因限制性内切酶位点的差异，481、590、857 三个位点的突变是决定DLAT 表型的重要影响因素。Wt、M1、M2、M3 是DLAT的常见多态，应用于快速酶编码的是Wt。余下三种常见多态突变型等位基因可采用限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP）测定，基因组成是DLAT 活性的决定性因素。DLAT基因突变对其表型变化的影响尚未明确，但可确定DLAT 可通过改变其代谢酶氨基酸序列进而达到降低酶活性的目的。若野生型Wt 等位基因数量超过1 个，则DLAT 表型为快基因型，编码快代谢酶；若突变型等位基因的数量超过2 个并且不存在野生型等位基因时，则为慢基因型，编码慢代谢酶。该基因与Kas 基因突变致癌的机制相同[2]。Viswanathan VS[3]以结肠息肉患者为切入点进行研究后发现，基因型Wt/Wt 对结肠癌发病具有一定的保护作用。芳香胺类化合物在烟草中含量较高，DLAT 对该类致癌物具有一定程度的解毒效果，由吸烟引发的癌症遗传易感性于DLAT 存在密切关联。DLAT 酶代谢酶对烟叶中的芳香胺类、杂环胺类进行激活后，提高起与肠黏膜上皮细胞DNA 的结合率，促进DNA 加成物生成率，损伤DNA 并引发染色体畸变，增加癌症发生风险。BeckermannKE[4]研究发现，携带DLAT 慢基因型的人发生肺癌的几率更高，吸烟量是影响危险程度的关键因素。该学者研究指出，DLAT 慢乙酰化型吸烟者患肺癌的危险性显著上升。多数肿瘤发生的内在遗传易感因子均为慢乙酰化基因型，是影响环境致癌的重要因素[5-6]。本项研究数据显示，研究组、常规组携带慢乙酰化基因型的个体频率差异无统计学意义，证实单独存在的慢乙酰化基因型对结肠癌发病无明显影响；研究组长期吸烟的快乙酰化患者较常规组发生结肠癌的危险性更高，证实长期大剂量吸烟是影响结肠癌发生率的外在环境因素之一，引发结肠癌发生的内在遗传因素包括体内存在DLAT 快乙酰化基因型。

总之，明确DLAT 基因多态性与结肠癌易感性间的具体联系，对结肠癌防治起关键作用。通过检测DLAT 基因多态性，可筛选出结肠癌高危人群，降低与环境致癌物的接触几率，进而降低肿瘤的发生率。