硝苯地平缓释片含量测定方法的改进与研究

王涛，高园霞，王发，王嫦鹤

（1.陕西省食品药品监督检验研究院，陕西 西安；2.西安力邦制药有限公司，陕西 西安）

0 引言

硝苯地平缓释片，英文名：Nifedipine Sustained release tablets，本品主要成分为硝苯地平，中文别名：利心平； 1，4-二氢-2，6-二甲基-4-（2-硝基苯基）-3，5-吡啶二羧酸二甲酯； 心痛定； 硝苯吡啶；英文名称：Nifedipine。

相关文献[1-4]表明，硝苯地平为第一代二氢吡啶类钙拮抗剂，可选择性抑制钙离子进入心肌细胞和平滑肌细胞的跨膜转运，并抑制钙离子从细胞内库释放，而不改变血浆钙离子浓度。用于预防和治疗冠心病心绞痛，特别是变异型心绞痛和冠状动脉痉挛所致心绞痛。对呼吸功能没有不良影响，故适用于患有呼吸道阻塞性疾病的心绞痛患者，其疗效优于β受体拮抗剂。还适用于各种类型的高血压，对顽固性、重度高血压也有较好疗效。由于能降低后负荷，对顽固性充血性心力衰竭亦有良好疗效，宜于长期服用。增加硝苯地平剂量可使外周血管过度扩张，导致或加重低血压状态。

因此，严格控制硝苯地平的含量显得尤为重要，在2019年抽检过程中，硝苯地平缓释片以往的质量标准《国家药品标准新药转正标准第五十二册》中含量测定方法为紫外-可见分光光度法，该方法专属性不够，杂质以及辅料对测定结果影响较大，本文针对此类情况进行了高效液相色谱法的方法学研究，根据中国药典以及相关文献[5-10]，建立了硝苯地平的简便快速、定量准确的检测方法，用于对其含量进行更精确的控制，为群众安全用药提供保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Waters公司高效液相色谱仪（Alliance E2695色谱系统，2489紫外检测器，Empower工作站），美国赛默飞Evolution 300型紫外-可见分光光度计，瑞士梅特勒公司ME204型、XPE105型全自动电子分析天平，超声波清洗器（KQ-500DE型，昆山超声仪器有限公司生产）。

1.2 试药

甲醇（色谱纯，默克公司）；实验用水均为电阻率为18.3ΜΩ·CM的超纯水；硝苯地平杂质A对照品（中国食品药品检定研究院提供，规格：30mg，含量：99.7%，批号：100340-201103）和硝苯地平杂质B（中国食品药品检定研究院提供，规格：30mg，含量：100%，批号： 100340-200602） ；硝苯地平对照品（中国食品药品检定研究院提供，规格：100mg，含量：99.9%，批号：100338-201404）。

1.3 实验样品

硝苯地平缓释片（I）（德州德药制药有限公司生产，批号：2101190317）；硝苯地平缓释片（I）（亚宝药业集团股份有限公司生产，批号：19040131）；硝苯地平缓释片（I）（陕西省万寿制药有限责任公司生产，批号：190504）。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agela Technologies C18（150×4.6 mm，5μm），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：水-甲醇（40：60）；柱温：35℃；流速：1.0mL·min-1；检测波长：235nm；进样体积：20μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制

避光操作。精密称取硝苯地平对照品10.12mg，置50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取5mL，置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的配制

避光操作。取本品20片，除去包衣，精密称定，精密称取适量（约相当于硝苯地平10mg），置50mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 系统适用性及专属性试验

避光操作。精密称取硝苯地平杂质A对照品10.06mg；硝苯地平杂质B对照品10.18mg，硝苯地平对照品10.12mg，置于同一50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液；取空白溶液、硝苯地平对照品溶液、混合对照溶液、样品溶液按2.1项下色谱条件进行分析，记录色谱图。在此色谱条件下，硝苯地平样品溶液主峰与对照品溶液主峰保留时间一致，混合对照溶液中硝苯地平峰能与其他色谱峰分离度均大于1.5。理论板数按硝苯地平峰计算不低于3000。

2.4 检测限和定量限

取上述2.2.1项下对照品溶液用甲醇逐级稀释，进样，按10倍信噪比计算，得出上述色谱条件下的硝苯地平的定量限为0.506ng。

图1 HPLC色谱图A.空白溶液(Blank solution)；B.对照品溶液（Control solution）；C.混合对照溶液（Mixed control solution）；D.样品溶液（Sample solution）1.硝苯地平杂质A（Nifedipine impurity A）；2.硝苯地平杂质B（Nifedipine impurity B）；3.硝苯地平（Nifedipine）

取上述2.2.1项下对照品溶液用甲醇逐级稀释，进样，按3倍信噪比计算，得出上述色谱条件下的硝苯地平的检测限为0.2024ng。

2.5 线性关系考察试验

避光操作。精密吸取对照品贮备液1mL、2mL、3mL、5mL、10mL各置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得一系列浓度的线性关系对照品溶液，量取上述5个溶液各精密量取20μL，分别注入液相色谱仪中，以浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，计算回归方程：Y=72454+6260，回归系数：r=1.0000；结果表明硝苯地平在4.0～40.0μg·mL-1浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

避光操作。取2.2.1项下对照品溶液，取上述对照溶液20μL注入高效液相色谱仪，在上述的色谱条件下重复进样6次进行分析测定，记录硝苯地平峰面积，对照品溶液硝苯地平的峰面积RSD值为0.7%，说明该方法的精密度良好。

2.7 回收率试验

避光操作。精密称取硝苯地平对照品12mg，10mg，8mg，各三份，置9个50mL棕色容量瓶中，取硝苯地平缓释片（I）（陕西省万寿制药有限责任公司生产，批号：190504）20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取9份（每份约相当于硝苯地平10mg），置上述9个50mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为回收率溶液。取上述回收率溶液，按2.1项下色谱条件进行分析，记录色谱图。计算回收率，结果硝苯地平的平均回收率为99.42%， RSD为0.23%。结果见表1。

表1 硝苯地平回收率测定结果

2.8 重复性

避光操作。取2.7项下样品细粉，精密称取6份（每份约相当于硝苯地平10mg），置上述6个50mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为重复性实验溶液。按2.1项下色谱条件进行分析，记录色谱图。6份样品含量测定结果见表2，结果表明该方法重复性良好，硝苯地平含量均值为99.95%， RSD为0.51%。

2.9 稳定性试验

避光操作。取2.8项下供试品溶液1，分别在0小时、2小时、4小时、8小时、12小时、24小时各取20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，溶液在24小时室温放置，样品峰面积基本不变，各图谱中硝苯地平峰面积RSD为0.16%。结果表明，本法测定硝苯地平供试品溶液在避光条件下在24小时内具有良好的稳定性。

2.10 耐用性

避光操作。取2.3项下对照品溶液、混合对照溶液、样品溶液，各量取 20μL，分别在 20、25、30、35、40℃柱温条件下注入色谱仪，记录色谱图，比较各组分在不同柱温下的分离情况。由结果可看出柱温的变化对各组分分离情况无影响，该方法对温度耐用性良好。

2.11 含量测定

避光操作。取硝苯地平对照品以及1.3项下三批样品，按照2.2项下方法制成对照溶液与供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行分析；同时按《国家药品标准新药转正标准第五十二册》中含量测定方法测定该三批样品含量，结果见表3。

3 小结与讨论

3.1 溶剂的选择

硝苯地平在丙酮和三氯甲烷中易溶，在甲醇中可溶，水中几乎不溶，出于对安全性和溶解性的考虑，选择甲醇作为其溶剂。

表3 含量测定结果表

3.2 色谱柱的选择

选定C18柱为分析柱后，比较了Agela Technologies C18（150×4.6 mm，5μm），Capcell PAK C18 （150×4.6 mm，5μm），结果表明 Agela Technologies C18（150×4.6 mm，5μm）柱的分离效果和耐用性更好。

3.3 检测波长的选择

硝苯地平在320～355nm波长范围呈较大的宽幅吸收，在235nm波长处有较大的吸收，其吸光值为333nm波长处的4.4倍；另外由于硝苯地平的化学性质不稳定，见光可发生降解，且降解产物在333nm波长处均有吸收，故选择波长为235nm为其检测波长。