一例仔猪圆环病毒感染的诊断

肖海晗，谭健梅，王贵平

(湖南农业大学 动物医学院，湖南 长沙 410128)

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)是导致仔猪多系统衰竭综合征和皮炎肾病综合征的主要病原[1]。PCV可引起机体免疫抑制,从而导致免疫力下降，并引起其他病原的继发感染[2]。猪圆环病毒经常与猪繁殖与呼吸综合征病毒等混合感染，导致养猪业严重的经济损失[3]。2019年5月，湖南省永州市某规模化猪场发生一起疑似猪圆环病毒感染的病例，其诊断报告如下。

1 流行病学

该场存栏母猪120头，保育到育肥前的一批仔猪75头。2019年5月20日，10余头断奶仔猪陆续出现不吃食、腹泻、喘气等症状。采用防治呼吸道疾病和腹泻的药物对症治疗无效。5月底出现发热等现象后，有仔猪开始死亡。至6月10日，该批仔猪发病58头，陆续死亡33头。

2 临床症状

临床检查，患病猪精神沉郁、食欲减退；体表较脏、被毛粗糙；喘气、呼吸困难并伴有腹式呼吸；体表淋巴结肿大；部分仔猪明显消瘦并出现“鲤鱼脊”。

3 病理变化

对4头临床症状典型的病猪进行解剖。可见腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结肿胀并出血；肺脏充血出血，呈弥漫性病变，似橡皮样，出现气肿；脾脏出现轻微肿大；肾切开后乳头突出，可见针尖大小的出血点。

4 实验室诊断

取上述4头解剖仔猪的淋巴结、肺脏和脑，送实验室进行相关病毒检测。

4.1 核酸提取

取病理变化明显的4份病死猪的相关内脏，用灭菌的剪刀、镊子取约1g样品，每份样品加入约1.2ml生理盐水，用研磨器研磨至匀浆。处理后的样品在-80℃冰箱反复冻融3次后，8000 rpm离心5 min，取上清液保留备用。然后严格按照核酸提取试剂盒(TianDZ)要求提取核酸。

4.2 QPCR检测

按QPCR试剂盒(湖南国测生物制品)操作步骤进行操作，具体步骤如下：PCR扩增(50ul)体系，向每个反应管中加入5ul核酸释放剂、5ul模板。取5ul阴性对照、阳性对照和待测模板，分别加入对应孔中，静置10min。每孔加入40ul PCR-Mix，盖上管盖。

5 结果

用QPCR相关试剂盒对猪圆环病毒2型、蓝耳病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行了检测。结果发现：圆环病毒检测结果均为阳性；蓝耳病毒检测结果一份样品为可疑，其余为阴性；猪瘟病毒检测结果，一份样品为可疑，其余为阴性；猪伪狂犬病毒检测结果，样品均为阴性(表1)。相关QPCR检测照片见图1-图4。

表1 四份样品检测结果

注：*Ct值大于40者为阴性，Ct值在35以下者为阳性，Ct值位于35-40之间则为可疑

图1 猪蓝耳病毒(PRRSV)检测结果

图2 猪圆环病毒2(PCV2)检测结果

图3 猪瘟病毒(CSFV)检测结果

图4 猪伪狂病毒(PRV)检测结果

6 讨论与结论

在荧光定量PCR检测中，Ct值越小提示其含病毒量越高。PCV2-QPCR扩增结果，显示圆环病毒阳性对照Ct值为23.58，待测样品分别为25.15、30.31、27.62、27.51，出现特异性荧光曲线，阴性对照未出现，提示送检的4份样品均检测出PCV2。检测的四份样品均无蓝耳病毒、猪瘟病毒和伪狂犬病毒特异性荧光曲线，阳性对照出现特异性条带而阴性对照未出现，提示送检的4份样品中均没有检出上述3种病毒。根据实验室QPCR检测结果，结合该场流行病学、临床症状及病理变化，初步诊断为猪圆环病毒感染。鉴于该场一直没有免疫注射PCV2疫苗，建议该场选择合适的PCV2疫苗，按照厂家的参考使用方法，结合该场实际情况，制定合适的PCV2免疫程序并立即进行免疫接种。

从该4头解剖仔猪的临床症状和病理剖检变化分析，该猪群疑似有其他细菌感染，建议该场进行细菌分离和药敏试验，根据药敏试验结果选择合适药物对猪群进行防治。圆环病毒可以通过呼吸道传播[4]，因此建议该场加强饲养管理，设置合理的饲养密度，定期清扫和消毒栏舍，注意通风，保持适宜的温度、湿度，及时隔离发病猪，控制发病率。