免疫印迹法检测HIV 抗体条带常见模式分析及在随访中的价值

王万海 ，孟 真，杨若男，高 楠，王庆芳，张 磊，王梅芬，明 亮

（1.郑州大学第一附属医院检验科 河南省检验医学重点实验室，河南 郑州 450052；2.郑州大学医学检验系，河南 郑州 450052）

2009年，我国医疗机构实施了《医疗机构医务人员主动提供HIV检测与咨询指南》。该指南要求医疗机构主动向就诊者提供获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）检测及咨询服务。近几年，医疗机构人类免疫缺陷病毒（h u m a n immunodeficiency virus，HIV）检测人次数明显增多[1]，AIDS病例数也明显增加[2-4]。大型综合性医院开展HIV确证试验势在必行。目前，我国最常用的HIV血清学确证试验是免疫印迹法。这种确证试验具有很好的特异性，在检测HIV感染时会出现不同的条带情况[5]。本研究拟通过分析就诊患者的HIV血清学确证试验数据，了解HIV感染者的免疫印迹法反应条带特征，为有效开展HIV检测、监测和预防工作提供依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

回顾分析2015年1月—2017年12月郑州大学第一附属医院就诊患者中免疫印迹法检测HIV抗体为阳性的460例患者和结果为不确定的16例患者的资料。460例HIV抗体阳性者中男314例（68.26%）、女146例（31.74%），年龄1～86岁；婚姻状况为已婚356例（77.39%）、未婚81例（17.61%）、丧偶15例（3.26%）、离婚8例（1.74%）。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 HIV（1+2）抗体筛查试剂盒[酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）]购自珠海丽珠试剂股份有限公司。HIV（1+2）抗体诊断试剂盒（胶体硒法）购自美国雅培公司。HIV抗体和抗原（p24）检测试剂盒（电化学发光法）购自瑞士罗氏公司。HIV确证试剂为HIV-1/2抗体免疫印迹试剂盒，购自新加坡MP生物医学亚太私人有限公司。上述试剂均经国家食品药品监督管理总局批准，批批检均合格，均在有效期内使用。Multiskan MK3型酶标仪和Wellwash洗板机购自赛默飞世尔（上海）仪器有限公司。cobas e602全自动电化学发光分析仪购自瑞士罗氏公司。

1.2.2 检测流程 首先采用HIV（1+2）抗体筛查试剂盒对所有待测样本进行初筛检测，各板均带内、外质控血清，严格按试剂盒说明书进行操作，严格遵守HIV筛查实验室的规范化程序。初筛阳性者再做双孔复试（ELISA），同时采用胶体硒法进行复检，结果仍为阳性者或一阴一阳者进行确证试验。采用HIV-1/2抗体免疫印迹试剂盒进行HIV的确证检测，按《全国艾滋病检测技术规范》（2015年修订版）并结合试剂盒说明书判定结果。对免疫印迹法首次检测时有条带出现，但不满足HIV抗体阳性的诊断标准[6]的患者进行随访。

2 结果

2.1 HIV抗体阳性免疫印迹法条带分布

在3个基因编码的3组HIV特异性抗体中，env基因编码的包膜蛋白抗体gp160、gp120和gp41的检出率分别为100.00%（460/460）、99.35%（457/460）和96.30%（443/460）；pol基因编码的核酸内切酶及聚合酶抗体p66、p51和p31的检出率分别为92.61%（426/460）、86.96%（400/460）和91.96%（423/460）；gag基因编码的核心蛋白抗体p55、p39、p24和p17的检出率分别为56.30%（259/460）、13.26%（61/460）、100.00%（460/460）、87.17%（401/460）。HIV抗体免疫印迹法条带图谱见图1。

2.2 HIV抗体阳性常见免疫印迹法条带模式

图1 免疫印迹法检测HIV抗体的条带图谱

免疫印迹法检测的HIV-1抗体条带共有10条，分别为gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p39、p31、p24和p17。共检测到34种条带模式，其中常见的条带模式为：gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p39/p31/p24/p17[全条带，占11.30%（52例）]、gp160/gp120/p66/ p55/p51/gp41/p31/p24/p17[p39缺失，占41.74%（192例）]、gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24/ p17[p55和p39缺失，占23.70%（109例）]、gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24[p55、p39和p17缺失，占5.65%（26例）]、gp160/gp120/p66/gp41/p31/p24/p17[p55、p51和p39缺失，占2.39%（11例）]。这5种模式合计占84.78%。其他条带模式较少见，除5例为3条带模式[gp160/gp120/p24（4例）、gp160/p24/p17（1例）]外，其他条带模式均不少于4条条带。见表2。

表2 HIV抗体阳性条带模式

2.3 免疫印迹法不确定结果的随访

有16例患者的免疫印迹法结果为不确定，需进行随访。共涉及8个首诊科室，主要为感染内科、血液内科、呼吸内科、泌尿外科和生殖医学科等。随访间隔时间为1～6月，中位时间为2个月。采用免疫印迹法首次检测时共出现6种条带模式，分别为p24[10例（62.5%）]、gp120[2例（12.5%）]、gp160/p24[1例（6.2%）]、p66/p24[1例（6.2%）]、gp160[1例（6.2%）]、p66[1例（6.2%）]。随访发现有5例患者的检测结果发生变化，其中4例符合HIV抗体阳性诊断标准，其特征主要为出现env基因编码的包膜蛋白抗体条带；另1例为p66/p24模式，随访时p66条带消失，仅出现p24条带。其他11例患者的条带模式在随访期内未见变化。见表3。

表3 免疫印迹法结果为不确定的16例患者随访期间HIV抗体条带模式的变化

2.4 HIV抗体阳性者首诊临床科室分布

HIV抗体阳性者的首诊科室主要为内科的相关科室，占66.31%，其中感染内科占29.35%（135/460）、呼吸内科占17.61%（81/460）、神经内科占8.48%（39/460）、血液内科占6.96%（32/460）、其他内科（肾脏内科、心血管内科和内分泌科）占3.91%（18/460）。另外，外科（骨科、甲状腺外科、胸外科、泌尿外科和肝胆胰外科等）占10.43%（48/460），五官科及口腔科占7.61%（35/460），妇产科占6.52%（30/460），肿瘤科占3.70%（17/460），皮肤科占2.83%（13/460），儿科占2.61%（12/460）。

3 讨论

AIDS是由HIV感染引起的慢性传染病，是以免疫缺陷为主要特征的慢性综合征[7]，其临床表现特异性不强，临床上需与其他病因引起的有类似症状的疾病相鉴别，而且已知自身感染HIV的患者就医时不主动告知的比例又较高[8]，易造成误诊、漏诊，甚至造成医院内感染或医护人员的职业暴露。HIV抗体检测是目前HIV感染者和AIDS患者主要的诊断依据。

本研究结果显示，HIV 3组基因编码的特异性抗体检出率中，抗env基因编码的包膜蛋白抗体整体检出率普遍较高（＞96%），其中最高为gp160，其次为gp120和gp41，与文献报道一致[9]。抗gag基因编码的核心蛋白抗体检出率差异较大，最高为p24，与gp160成对出现，其次为p17，p55和p39的检出率较低，与文献报道一致[10]。抗pol基因编码的核酸内切酶和聚合酶抗体条带检出率大致相同，均超过86%。在免疫印迹法条带模式中，最常见的条带模式为gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p17（p39缺失），占41.74%；其次为gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24/p17（p55和p39缺失），占23.70%；全条带模式占11.30%。这3种常见模式占76.74%。有研究结果显示，p39和p55条带缺失与AIDS疾病进展密切相关[11-12]。随着HIV感染的进展，AIDS的临床症状及其并发症的出现促使患者到医院就诊，这进一步验证了上述条带缺失与AIDS疾病进展相关。

在16例HIV抗体免疫印迹法结果为不确定的随访者中，4例首次检测含有HIV包膜蛋白抗体条带的随访者在随访期间HIV抗体均转为阳性，而首次检测仅有p24条带或p66条带以及p66/p24条带模式的12例随访者排除了HIV感染。这可能与p24抗原为非特异性抗原有关[13]。

AIDS是以免疫缺陷为主要特征的慢性传染病，其无症状期长，临床表现复杂多样，加上患者“症状就医”的观念根深蒂固，因此本研究的HIV感染者首诊科室涉及28个，涵盖了医院的绝大多数临床科室，其中有66.31%的就诊者首诊科室为内科相关科室，这与HIV感染者常见的并发症为内科系统疾病相一致[14]。

鉴于目前综合性医院已经成为AIDS防治工作的主力，因此相关医疗机构应重视HIV检测，避免AIDS被误诊、漏诊以及发生医院内感染或医护人员的职业暴露，确保HIV感染的早发现、早干预、早治疗。