滇桂艾纳香乙酸乙酯部位化学成分研究

陈美安，姜建萍，马雯芳

(广西中医药大学 药学院，广西 南宁 530001)

滇桂艾纳香为菊科艾纳香属植物滇桂艾纳香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，又名白花九里明、管芽、假东风草，主要产于我国云南东南部和广西西南部，在印度、缅甸、泰国、马来西亚、中南半岛、菲律宾、印度尼西亚、巴布亚新几内亚和所罗门群岛也有分布。壮医认为其味微苦淡、性微温，具有活血调经、祛风除湿、止血、利水等作用，用于经期提前、产后流血不止、产后浮肿、不孕症、阴疮、风湿骨痛等征[1-3]。目前，国内外对滇桂艾纳香化学成分及药理作用的研究报道较少。现代药理研究表明滇桂艾纳香具有止血、缩宫、抗炎、镇痛、保肝、保护胃黏膜及抗菌等多种药理作用[4]，从该药材中分离得到的化学成分包括苷类、糖类、黄酮类、酚酸类、香豆素、甾体类和挥发油等，其中主要以黄酮类、酚酸类及挥发性成分为主[5-14]。滇桂艾纳香作为广西民间常用壮药，其中药复方制剂在临床上主要作为妇科药被广泛使用，如妇血康颗粒、滇桂艾纳香胶囊和伊血安颗粒等，常用于治疗产后出血、瘀血阻滞所致的月经量多、经期延长等妇科症，且均具有较好的治疗效果。另外，课题组前期研究发现[15-16]，滇桂艾纳香药材具有止血及缩宫活性，并通过活性筛选明确了其乙酸乙酯提取物是止血、缩宫活性的主要有效部位，但有效成分及作用机制尚不明确，而且很多具有生物活性的成分尚未被挖掘出来。

为了进一步研究滇桂艾纳香生物活性的物质基础，本文采用反复硅胶色谱法和重结晶法对滇桂艾纳香乙酸乙酯部位进行化学成分研究，分离得到11个化合物，通过理化方法和波谱数据对化合物的结构进行鉴定，分别为：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、邻苯二甲酸二丁酯(7)、原儿茶醛(8)、原儿茶酸(9)、咖啡酸(10)、水杨酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次从该植物中分离得到，为扩大及充分开发利用其药用资源提供了实验依据。

1 材料与仪器

1.1 药物与试剂

新鲜滇桂艾纳香药材采自广西百色，经广西中医药大学药用植物教研室朱意麟实验师鉴定为菊科艾纳香属植物滇桂艾纳香Blumeariparia(Bl.) DC.的干燥全草，除杂，阴干，粉碎成粗粉，备用。

柱层析用硅胶(75～150 μm、48～75 μm，青岛海洋化工厂)；薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)；除体积分数95%食用级酒精和纯水外，其余试剂均为分析纯，均购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 主要仪器

双聚焦磁质谱仪(ZAB-HS，英国VG公司)；Bruker Dre-500 MHz，Bruker AV-400 MHz核磁共振仪(瑞士Bruker)；YRT-3型熔点仪(天津大学精密仪器厂)；AJ150电子分析天平(瑞士梅特勒)；RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科技公贸有限公司)；优普纯水仪(四川优普超纯科技有限公司)。

2 提取与分离

取滇桂艾纳香干燥药材粗粉8.9 kg，用适量体积分数70%乙醇浸泡3 d后，以10倍量体积分数70%乙醇渗漉提取，收集渗滤液，减压回收溶剂，得乙醇总提取物1 173.9 g。将乙醇总提取物溶解，分散于硅胶中，依次用石油醚(60～90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇回流提取，回收溶剂，分别得石油醚浸膏(18.62 g)、氯仿浸膏(23.94 g)、乙酸乙酯浸膏(22.34 g)和正丁醇浸膏(154.92 g)。

取乙酸乙酯浸膏20.56 g，经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇(100∶0 → 100∶1 → 80∶1 → 40∶1 → 25∶1 → 20∶1 → 15∶1 → 10∶1 → 5∶1 → 2∶1 → 1∶1 → 0∶100，体积比，全文同)梯度洗脱，经薄层色谱检识，合并相似的组分，得8个组分Fr.1～Fr.8。Fr.1经硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0 → 0∶100)梯度洗脱，得4个组分Fr.1-1～Fr.1-4；Fr.1-1经硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯(5∶1 → 1∶10)梯度洗脱，得化合物7(20.2 mg)；Fr.1-3经硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯(50∶1 → 1∶1)梯度洗脱，石油醚-乙酸乙酯(2∶1)重结晶得化合物1(13.5 mg)，氯仿-丙酮(1∶1)重结晶得化合物2(17.1 mg)；Fr.1-4经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮(50∶1 → 1∶2)梯度洗脱，丙酮重结晶得化合物3(9.6 mg)。Fr.3经硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮(80∶1 → 0∶100)梯度洗脱，丙酮重结晶得化合物4(7.0 mg)。Fr.5经硅胶柱层析分离，以氯仿-丙酮(10∶1 → 1∶10)梯度洗脱，甲醇重结晶得化合物5(11.5 mg)。Fr.6经硅胶柱层析分离，以氯仿-丙酮(100∶0 → 0∶100)和丙酮-甲醇(50∶1 → 0∶100)梯度洗脱，得3个组分Fr.6-1～Fr.6-3；Fr.6-1经硅胶柱层析分离，以氯仿-丙酮(30∶1 → 1∶50)梯度洗脱，甲醇重结晶得化合物6(18.7 mg)；Fr.6-2经硅胶柱层析分离，以氯仿-丙酮(20∶1 → 1∶20)梯度洗脱，氯仿-甲醇(1∶1)重结晶得化合物8(9.5 mg)；Fr.6-3经硅胶柱层析分离，以氯仿-甲醇(10∶0 → 1∶10)梯度洗脱，丙酮重结晶得化合物9(7.4 mg)，乙酸乙酯重结晶得化合物10(18.1 mg)，丙酮-水(1∶3)重结晶得化合物11(8.2 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色针状结晶(乙酸乙酯)，m.p. 260～262 ℃。EI-MS(m/z)：426 [M]+，分子式C30H50O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 1.18(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-30), 1.01(3H, s, H-29), 1.00(3H, s, H-27), 0.95(3H, s, H-26), 0.88(3H, s, H-25), 0.87(3H, s, H-23), 0.72(3H, s, H-24)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 22.3(C-1), 41.5(C-2), 213.3(C-3), 58.2(C-4), 42.1(C-5), 41.2(C-6), 18.2(C-7), 53.0(C-8), 37.4(C-9), 59.4(C-10), 35.3(C-11), 30.5(C-12), 39.6(C-13), 38.2(C-14), 32.3(C-15), 35.9(C-16), 30.0(C-17), 42.7(C-18), 35.6(C-19), 28.1(C-20), 32.7(C-21), 39.2(C-22), 6.8(C-23), 14.6(C-24), 17.9(C-25), 20.2(C-26), 18.6(C-27), 32.1(C-28), 35.0(C-29), 31.7(C-30)。以上数据与文献[17-18]报道基本一致，故鉴定化合物1为木栓酮。

化合物2：白色鳞片状结晶(乙酸乙酯)，m.p. 285～287 ℃。EI-MS(m/z)：428[M]+，分子式C30H52O。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 3.67(1H, s, H-3), 1.17(3H, s, H-28), 1.05(3H, s, H-27), 1.00(3H, s, H-29), 0.95(3H, s, H-30), 0.94(3H, s, H-24), 0.90(3H, s, H-23), 0.86(3H, s, H-25)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 15.7(C-1), 35.9 (C-2), 72.5(C-3), 49.0(C-4), 39.5(C-5), 41.6(C-6), 17.4(C-7), 53.0(C-8), 37.0(C-9), 61.2(C-10), 35.2(C-11), 30.5(C-12), 37.7(C-13), 38.2(C-14), 32.0(C-15), 35.4(C-16), 29.9(C-17), 42.7(C-18), 35.4(C-19), 28.0(C-20), 32.6(C-21), 39.1(C-22), 11.4(C-23), 16.2(C-24), 18.1(C-25), 18.5(C-26), 20.0(C-27), 32.0(C-28), 31.6(C-29), 34.9(C-30)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定化合物2为木栓醇。

化合物3：无色针状结晶(氯仿)，m.p. 137～139 ℃。Liebermann-Burchard呈阳性，氯仿-浓硫酸反应呈阳性，α-萘酚-浓硫酸反应呈阴性，推测为甾醇类化合物，与β-谷甾醇对照品共薄层色谱，在3种不同的展开溶剂系统中，两者Rf值及显色行为一致，与对照品混合后熔点不下降，并与文献[19]报道一致，故鉴定化合物3为β-谷甾醇。

化合物4：黄色粉末状结晶(氯仿)，m.p. 189～191 ℃。EI-MS(m/z)：328 [M]+，分子式C18H16O6。1H-NMR(500 MHz, CDCl3): 12.79(1H, s, 5-OH), 7.52(1H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6′), 7.34(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.98(1H, d,J=8.2 Hz, H-5′), 6.60(1H, s, H-3), 6.48(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.37(1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 3.99(3H, s, 7-OCH3), 3.96(3H, s, 4′-OCH3), 3.90(3H, s, 3′-OCH3)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 165.8(C-2), 104.8(C-3), 182.7(C-4), 162.2(C-5), 98.3(C-6), 164.2(C-7), 93.0(C-8), 157.8(C-9), 105.7(C-10) ,124.0(C-1′) ,109.2(C-2′) ,152.6(C-3′), 149.5(C-4′), 111.5(C-5′), 120.3(C-6′), 56.2(7-OCH3), 56.5(4′-OCH3), 56.6(3′-OCH3)。以上数据与文献[20]报道基本一致，故鉴定化合物4为5-羟基-7, 3′, 4′-三甲氧基黄酮。

化合物5：黄色针状结晶(甲醇)，m.p. 275～276 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.46(1H, s, 5-OH), 10.86(1H, s, 7-OH), 10.15(1H, s, 4′-OH), 9.41(1H, s, 3-OH), 8.01(2H, d,J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.90(2H, d,J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.43(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.17(1H, d,J=2.0 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 148.0(C-2), 137.1(C-3), 177.3(C-4), 162.5(C-5), 99.2(C-6), 165.5(C-7), 94.4(C-8), 158.2(C-9), 104.5(C-10), 123.7(C-1′), 130.6(C-2′, 6′ ), 116.3(C-3′, 5′), 160.5(C-4′)。以上数据与文献[21]报道基本一致，故鉴定化合物5为山奈酚。

化合物6：黄色粉末状结晶(甲醇)，m.p. 328～330 ℃。EI-MS(m/z)：286 [M]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.98(1H, s, 5-OH), 10.83(1H, s, 7-OH), 9.93(1H, s, 4′-OH), 9.43(1H, s, 3′-OH), 7.43(1H, d,J=8.1 Hz, H-6′), 7.40(1H, brs, H-2′), 6.89(1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.68(1H, s, H-3), 6.44(1H, d,J=2.1 Hz, H-8), 6.19(1H, d,J=2.1 Hz, H-6)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)： 163.9(C-2), 102.9(C-3), 181.7(C-4), 161.5(C-5), 98.8(C-6), 164.2(C-7), 93.9(C-8), 157.3(C-9), 103.7(C-10), 121.5(C-1′), 113.3(C-2′), 145.7(C-3′), 149.7(C-4′), 116.0(C-5′), 119.0(C-6′)。以上数据与文献[22]报道基本一致，故鉴定化合物6为木犀草素。

化合物7：淡黄色油状物(氯仿)。EI-MS(m/z)：278[M]+，分子式C16H22O4。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)：7.71(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-3, 6), 7.53(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-4, 5), 4.30(4H, t,J=6.4 Hz, H-8, 8′), 1.72(4H, m, H-9, 9′), 1.46(4H, m, H-10, 10′), 0.96(6H, t,J=7.2 Hz, H-11, 11′)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3): 131.0(C-1, 2), 128.8(C-3, 6), 132.2(C-4, 5), 167.7(C-7′, 7″), 65.6(C-8′, 8″), 30.6(C-9′, 9″), 19.1(C-10′, 10″), 13.7(C-5′, 5″)。以上数据与文献[23]报道基本一致，故鉴定化合物7为邻苯二甲酸二丁酯。

化合物8：无色针状结晶(甲醇)，m.p. 151～152 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 10.13(1H, s, 7-CHO), 9.70(1H, brs, 3-OH), 9.57(1H, brs, 4-OH), 7.27(1H, dd,J= 8.0, 1.6 Hz, H-6), 7.23(1H, d,J=1.6 Hz, H-2), 6.91(1H, d,J= 8.0 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 128.8(C-1), 114.3(C-2), 146.0(C-3), 152.3(C-4), 115.5(C-5), 124.5(C-6), 191.0(—CHO)。以上数据与文献[24]报道基本一致，故鉴定化合物8为原儿茶醛。

化合物9：无色针状结晶(甲醇)，m.p. 199～200 ℃。EI-MS(m/z)：154[M]+，分子式C7H6O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.35(1H, s, 7-COOH), 9.70(1H, s, 3-OH), 9.32(1H, s, 4-OH), 7.34(1H, d,J= 1.9 Hz, H-2), 7.30(1H, dd,J=8.2, 1.9 Hz, H-6), 6.80(1H, d,J= 8.2 Hz, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 121.8 (C-1), 116.6(C-2), 145.0(C-3), 150.1(C-4), 115.2(C-5), 122.0(C-6), 167.4(—COOH)。以上数据与文献[25]报道基本一致，故鉴定化合物9为原儿茶酸。

化合物10：黄色粉末状结晶(甲醇)，m.p. 208～210 ℃。EI-MS(m/z)：180[M]+，分子式C9H8O4。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 12.09(1H, s, 8-COOH), 9.39(1H, s, 4-OH), 9.19(1H, s, 3-OH), 7.40(1H, d,J=16.2 Hz, H-7), 7.01(1H, brs, H-2), 6.96(1H, d,J=7.8 Hz, H-6), 6.75(1H, d,J=7.8 Hz, H-5), 6.16(1H, d,J=16.2 Hz, H-8)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6)：128.0(C-1), 115.0(C-2), 146.7(C-3), 149.2(C-4), 116.7(C-5), 122.0(C-6), 146.1(C-7), 116.4(C-8), 171.8(—COOH)。以上数据与文献[26]报道基本一致，故鉴定化合物10为咖啡酸。

化合物11：无色针状结晶(甲醇)，m.p. 158～160 ℃。EI-MS(m/z)：138[M]+，分子式C7H6O3。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6): 13.78(1H, s, 6-COOH), 11.42(1H, s, 2-OH), 7.80(1H, dd,J=1.6, 7.8 Hz, H-6), 7.52(1H, m, H-4), 6.97(1H, d,J= 7.5 Hz, H-3), 6.90(1H, m, H-5)。13C-NMR(125 MHz, DMSO-d6): 113.9(C-1), 163.2(C-2), 118.1(C-3), 136.6(C-4), 120.0(C-5), 131.5(C-6), 173.5(—COOH)。以上数据与文献[27]报道基本一致，故鉴定化合物11为水杨酸。

4 结果与讨论

本研究对滇桂艾纳香乙酸乙酯部位进行了化学成分分离纯化，鉴定了11个化合物，分别为：木栓酮(1)、木栓醇(2)、β-谷甾醇(3)、5-羟基-7,3′,4′-三甲氧基黄酮(4)、山奈酚(5)、木犀草素(6)、邻苯二甲酸二丁酯(7)、原儿茶醛(8)、原儿茶酸(9)、咖啡酸(10)、水杨酸(11)。其中，化合物1、2、4、7首次从该植物中分离得到。

滇桂艾纳香具有较好的止血、活血化瘀及缩宫活性。据文献报道[28-30]滇桂艾纳香药材可显著缩短小鼠凝血时间、出血时间和血浆复钙时间，可增强子宫收缩，促进子宫内膜螺旋动脉闭合，且可促进子宫内膜修复，调节子宫局部活性物质。其中，从滇桂艾纳香药材中分离得到的原儿茶酸可缩短凝血时间，并能增强子宫收缩频率，其作用与剂量成正相关；咖啡酸也具有缩短凝血时间及出血时间的作用，能明显增强子宫收缩。另外，原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、水杨酸等是许多传统中药及其复方制剂的有效成分，具有止血或活血或双向平衡调节作用[31-32]。因此，可以推断这些化合物可能是滇桂艾纳香药材止血、活血作用的主要药效物质基础之一，而原儿茶醛、原儿茶酸和咖啡酸等酚酸类成分一直被作为该药材及其中药复方的药效指标成分进行质量标准研究[33-36]。但是，分离出来的有些化合物是否具有该药材作为妇科常用药的相关活性以及如何发挥这些作用的机制，这是下一步要开展的工作，是研究的重点。当然，这些化合物大多都具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等活性，而且滇桂艾纳香在某些药理活性方面也显示出较大的药用潜力，其作用相关性亦需进一步探究。

本研究结果分离得到的化合物较少，未发现新化合物或新活性成分，但也在一定程度上丰富了滇桂艾纳香的药效物质基础，对今后滇桂艾纳香的合理开发与利用具有重要的指导意义。在后期工作中，将根据这些化合物的结构特点进行相关药理活性筛选及作用机制研究，力争从该植物中发现更多具有药效的化合物，以期阐明其作用与滇桂艾纳香传统功效的相关性。