消炎止痒浸膏质量标准研究

吴艳蓉

（辽宁省沈阳市肛肠医院药剂科，辽宁 沈阳 110002）

消炎止痒浸膏为我院特色中药制剂，由蛇床子、苦参、防风、荆芥、苍术、连翘等组方，具有消炎、止痒、祛风功效，适用于肛门湿疹及肛周瘙痒症。该制剂为外用制剂，应用时以温水稀释后熏洗患处，直接作用于肛肠病变部位，临床疗效确切，用药简便安全，患者感觉舒适。但其质量标准较简单，且无主要成分含量测定方法，无法全面进行质量控制。本研究中采用薄层色谱（TLC）法定性鉴别该制剂中的苦参碱和连翘苷，采用高效液相色谱（HPLC）法测定该制剂中蛇床子素含量，为其质量控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；FA1104 型电子天平（上海精天电子仪器有限公司）；DL-180 型超声波清洗机（浙江省象山县石浦海天电子仪器厂）。

1.2 试药

苦参碱对照品（批号为110843-201011）、连翘苷对照品（批号为110821-201213）、蛇床子素对照品（批号为110822-201308）均购自中国食品药品检定研究院；消炎止痒浸膏（沈阳市肛肠医院自制制剂，批号分别为20170823，20170906，20170920，规格为每袋10 g）；甲醇、乙腈（山东禹王实业有限公司化工分公司）均为色谱纯；丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯、硫酸、乙醇、氢氧化铵、甲苯、正丁醇、氢氧化钠（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）均为分析纯；纯净水（杭州娃哈哈集团）。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

苦参[1]202：取本品10 mL，加三氯甲烷20 mL，浓氨试液0.3 mL，摇匀，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作为对照品溶液。按样品处方工艺制备缺苦参的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。按2015 年版《中国药典（四部）》通则0502 TLC 法试验，吸取上述3 种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇（8 ∶3 ∶0.5，V/ V/ V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同橙色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。

连翘[1]170：取本品10 mL，加硅藻土12 g，研匀，加三氯甲烷60 mL，超声处理20 min，滤过，弃滤液，药渣挥干，加甲醇50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL 使溶解，用水饱和的正丁醇提取2 次，每次25 mL，合并提取液，用氨试液洗涤2 次，每次30 mL，再用水洗涤2 次，每次30 mL，正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1 mL 含2 mg 的溶液，作为对照品溶液。按样品处方工艺制备缺连翘的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。按2015 年版《中国药典（四部）》通则0502 TLC 法试验，吸取上述3 种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15 ∶40 ∶22 ∶10，V/ V/ V/ V）10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Topsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（63 ∶37，V/ V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：322 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

取蛇床子素对照品2.5 mg，精密称定，置25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含蛇床子素0.1 mg/mL 的对照品溶液。取消炎止痒浸膏1 mL，加硅藻土12 g，研匀，加甲醇60 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL 使溶解，用乙酸乙酯提取2 次，每次25 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇定容于50 mL 容量瓶中，用0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按样品处方工艺制备缺蛇床子的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2.2 项下3 种溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，色谱图见图2。理论板数按蛇床子素峰计应不低于3 000，与相邻峰的分离度大于

1.5，系统适用性良好。

线性关系考察：分别精密吸取蛇床子素对照品贮备液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各10 μL 注入高效液相色谱仪测定。以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=58 195X+692 537，r2=0.999 6（n=5）。结果表明，蛇床子素质量浓度在5.0 ～80.0 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，按拟订色谱条件重复进样6 次，记录峰面积。结果蛇床子素峰面积的RSD为1.82%（n=6），表明仪器精密度良好。

图2 高效液相色谱图

重复性试验：精密量取样品（批号为20170823）6份，各1 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果蛇床子素峰面积的RSD为0.93%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一批（批号为20170823）供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h 时按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果蛇床子素峰面积的RSD为1.32%（n=6），表明供试品溶液在室温下12 h 内稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为20170823）6 份，精密称定，分别精密加入高、中、低3 种浓度的对照品溶液适量，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取3 个批次的样品，精密称定，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定样品中蛇床子素的峰面积，并计算含量。结果批号分别为20170823，20170906，20170920 的样品中蛇床子素的含量分别为1.438，1.424，1.457mg/mL。

3 讨论

消炎止痒浸膏具有消炎、止痒、祛风功效，现代化学和药理学研究表明，蛇床子、苦参和连翘为该方药理作用的主要物质基础[2-5]，且为该制剂处方中的主要药物。蛇床子的有效化学成分为香豆素类化合物，包括蛇床子素、欧前胡素等[6]，具有较强活性的单体成分为蛇床子素，其含量为蛇床子的质量控制标准之一[1，7]。苦参碱和连翘苷分别为苦参和连翘的主要药效成分，且二者分别为苦参和连翘的质量控制指标之一[1，8-9]。

参考2015 年版《中国药典（一部）》和文献[2-3，10-11]，本研究中通过对样品的提取方法、点样量、展开剂种类和溶剂比例等条件进行筛选，最终确定了苦参碱和连翘苷的TLC 定性鉴别方法；参考文献[4-5，12]和2015 年版《中国药典（一部）》中蛇床子药材项下蛇床子素的含量测定方法[1] 315测定蛇床子素的含量，以乙腈-水（65 ∶35，V/ V）为流动相，但用于本样品的分离度与理论板数均不理想，于是对流动相比例进行了筛选，最终确定乙腈-水（63 ∶37，V/ V）可满足样品中蛇床子素的分离要求。

综上所述，本研究中建立的方法操作简便，专属性强，样品整体分离效果良好，可用于消炎止痒浸膏的质量控制。