行气祛瘀汤煎煮工艺研究*

罗伟良，梁晓燕，吴 利

（广东省佛山市中医院，广东 佛山 528000）

行气祛瘀汤为我院常用于气滞血瘀的制剂，疗效显著，由神曲、木香、香附、丹参、砂仁、栀子等多味中草药组方。方中丹参具有祛瘀止痛功效[1]，木香配砂仁可化湿、理气、调中、止痛[2]。丹参的水溶性有效成分主要为丹参酚酸B[3]，而木香和砂仁的功效与挥发油息息相关[4]。在煎煮行气祛瘀汤时，丹参酚酸B 会不断溶出，同时也会不断分解[5]，挥发油也易造成损失[6]，合适的浸泡时间、煎煮时间、煎煮温度、煎煮压力尤为重要[7]。本研究中以丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油的含量为考察指标，选择浸泡时间、煎煮时间、煎煮温度、煎煮压力为考察因素，采用L9（34）正交试验，改进行气祛瘀汤中丹参、木香、砂仁的煎煮工艺，以增强其药效。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KDM 型调温电热套（山东省郅城永兴仪器厂）；挥发油测定仪（上海玻璃仪器厂）；Agilent1100 型高效液相色谱仪，VWD 检测器，Agilent110LC 型色谱工作站（美国Agilent 公司）；ES-J120 型电子分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司，精度为0.1 mg）；KQ-50B 型超声提取器（昆山市超声仪器有限公司，功率为50 W）；UV-265 型紫外分光光度计（日本岛津公司）。

1.2 试药

丹参酚酸B 对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111562-201212，供含量测定用）；神曲Massa Medicata Fermentata（批 号 为 170804）、木 香Radix Aucklandiae（批号为170601）、香附Rhizoma Cyperi（批号为170701）、丹参Salvia（批号为170801）、砂仁Amomum villosum Lour（批号为170801）、栀子Gardenia jasminoides Ellis（批号为170501）均购于广州至信药业有限公司，经佛山市中医院吴利副主任药师鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

设立浸泡时间（因素A）、煎煮时间（因素B）、煎煮压力（因素C）、煎煮温度（因素D）为主要考察因素，每个因素3 个水平，以丹参酚酸B（F）、木香挥发油（M）、砂仁挥发油（S）的含量为考察指标，按L9（34）正交试验设计条件煎煮行气祛瘀汤，将所得汤液定容至250 mL。正交试验因素水平见表1。

表1 行气祛瘀汤中丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油正交试验因素水平表

2.2 丹参酚酸B 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-甲醇-甲酸-水（10 ∶30 ∶1 ∶59，V/ V/ V/ V）；检测波长：286 nm；流速：1.0 mL/min。

2.2.2 溶液制备

取丹参酚酸B 对照品10 mg，精密称定，水溶解，制成质量浓度为500 μg/mL 的对照品溶液。按行气祛瘀汤的成分先浸泡30 min，煮至水开后再煎煮20 min。吸取2 mL 置500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液。按行气祛瘀汤中的药材组方除去丹参，按供试品溶液制备方法制备不含丹参的阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：取上述3 种溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果阴性对照无干扰，理论板数按丹参酚酸B计不低于2 000，色谱见图1。

线性关系考察：称取丹参酚酸B 对照品10 mg，置20 mL 容量瓶中，加水至刻度，制备丹参酚酸B 对照品贮备液，分别吸取对照品贮备液，并加水稀释成质量浓度为5，25，100，125，200，300，400，500 μg/mL 系列溶液，各取10 μL 注入高效液相色谱仪，以丹参酚酸B 质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=990.25X-843.32，r=0.999 8（n=8）。结果表明，丹酚酸B 质量浓度在38 ～381 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取质量浓度为100 μg/mL 的对照品溶液10 μL，连续进样测定5 次。结果丹参酚酸B峰面积的RSD为1.36%（n=5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一样品，依法平行制备供试品溶液6 份，依法进样测定含量。结果的RSD为0.98%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液适量，分别于0，1，2，3，4，5，7，9 h 时按拟订色谱条件进样测定。结果丹参酚酸B 峰面积的RSD为0.36%（n=8），表明供试品溶液在9 h 内稳定。

加样回收试验：精密吸取已知含量的供试品溶液1 mL，共6 份，分别加入质量浓度为500 μg/mL 的对照品溶液0.5，1.0，1.5 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算含量及回收率。结果见表2。

2.2.4 样品含量测定

吸取不同条件下制备的行气祛瘀汤供试品溶液各2 mL，分别置500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液。各取10 μL进样测定，采用外标法计算样品中丹参酚酸B 含量。结果见表3。

表3 行气祛瘀汤中丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油含量正交试验结果（ n=9）

表4 丹参酚酸B、木香挥发油、砂仁挥发油含量方差分析结果

2.3 木香与砂仁挥发油含量测定

按行气祛瘀汤组方除去砂仁，先浸泡30 min，煮至水开后再煎煮20 min，然后按L9（34）正交试验设计法，取不同煎煮条件下的木香挥发油。以2015 年版《中国药典（一部）》附录挥发油的测定方法测定行气祛瘀汤中木香挥发油的含量[8]。按行气祛瘀汤组方除去木香和砂仁，然后按行气祛瘀汤的一般方法煎煮，即为空白对照。按2015 年版《中国药典》挥发油的测定方法测定空白对照煎煮液中不含挥发油。分别吸取各条件项下行气祛瘀汤供试品溶液10 mL，测定各木香挥发油含量，计算溶出百分率。按行气祛瘀汤的成方除去木香，同法测定各砂仁挥发油含量，计算溶出百分率。结果见表3。

2.4 正交试验结果

9 份样品中丹参酚酸B 含量、木香挥发油溶出度、砂仁挥发油溶出百分率测定结果见表3。根据正交试验结果进行方差分析，结果见表4。可见，丹参酚酸B 含量的影响程度为B ＞A ＞C ＞D；显著影响因素为因素B 和因素D，因素C 和因素D 影响不明显，丹参酚酸B 最佳煎煮工艺为A3B3C1D1。木香挥发油溶出的影响程度为B ＞A ＞D ＞C。非常显著影响因素为因素B，显著影响因素为因素A，因素C 和因素D 影响不明显，木香挥发油最佳煎煮工艺为A3B2C1D1。砂仁挥发油溶出的影响程度为B ＞A ＞C ＞D；非常显著影响因素为因素B，因素A具有相当影响，因素C 和因素D 影响不明显，砂仁挥发油最佳煎煮工艺为A2B1C1D1。综合分析，行气祛瘀汤的最佳煎煮工艺为行气祛瘀汤（除去砂仁和木香）先浸泡丹参和其他药物30 min，煎药机煎煮丹参至水开后再煎煮20 min，然后加入已浸泡30 min 的木香，煎煮15 min，再加入已浸泡20 min 的砂仁，再煎煮5 min，木香和砂仁的煎煮过程均在100 ℃的正常大气压下完成。

2.5 最佳工艺验证

称取5 份行气祛瘀汤方中药材（除去砂仁），分别按行气祛瘀汤最佳煎煮工艺进行煎煮，测定木香挥发油含量，得木香挥发油平均溶出百分率为16.77%，RSD为0.25% （n=5）。称取5 份行气祛瘀汤方中药材（除去木香），分别按照行气祛瘀汤最佳煎煮工艺进行煎煮，测定各汤液的丹参酚酸B 含量和砂仁挥发油含量，得砂仁挥发油平均溶出百分率为33.24% ，RSD为0.25%（n=5）；丹参酚酸B 平均质量浓度为2 818.00 μg/mL，RSD为0.25% （n=5）。可见，行气祛瘀汤中丹参酚酸B、木香挥发油和砂仁挥发油的最佳煎煮工艺稳定可靠，且得到的丹参酚酸B 含量、木香挥发油和砂仁挥发油的溶出百分率优于其他工艺。详见表5。

表5 行气祛瘀汤的最佳煎煮工艺验证试验结果

3 讨论

行气祛瘀汤中的丹参作为一般煎煮药物的代表，其祛瘀止痛的作用与丹参酚酸B 含量密切相关。试验中影响丹参酚酸B 含量的因素首先是药材的浸泡，丹参由于是根和茎类药物，质地坚硬，丹参酚酸B 的溶出较困难[9]，而煎煮前适当浸泡可软化，煎煮时丹参酚酸B易溶出[10]，浸泡时间过短会造成煎煮时药材蛋白质受热凝固，淀粉糊化，堵塞溶出通道[11]，浸泡时间过长会导致杂质增多[12]；而作为特殊煎煮药物的砂仁由于质地较苏松，浸泡时间相对较短。其次，煎煮时间的长短对行气祛瘀汤的疗效影响很大[13]。由于药材质地的不同，每种药物的煎煮时间都不同。丹参酚酸B 为水溶性，但易分解，煎煮时间过长会导致丹参酚酸B 的含量降低，丹参素含量升高[14]；不同煎煮时间对挥发油的含量影响明显，木香和砂仁的有效成分都是挥发油，相对短时间的煎煮，挥发油就会逸出，长时间的煎煮会导致挥发油大量散失[15]。本试验中，丹参质地最坚硬，木香次之，砂仁更次，在遵循药材与溶剂之间溶质浓度的平衡关系，延长煎煮时间会使提取物增多的一般规律时，选择每种药物适当的煎煮时间。

药材中的丹参来自全国各地，产地不同[16]，有效成分含量差异较大。丹参坚硬，必须切成厚片才能促进丹参酚酸B 的溶出。砂仁入药的有阳春砂、绿壳砂和海南砂，品种不同，所含有效成分不同，含量不同[17]，且在试验时，经打碎的砂仁，溶剂更容易浸透，挥发油溶出更快；木香长圆柱形，不易控制用量，且质地坚硬，有效成分不易溶出，需经过切成薄片[18]，才能使溶剂易于渗透，有效成分易于溶出。煎煮次数也同样影响着行气祛瘀汤的质量，汤剂的煎煮一般以2 ～3 次为宜，第一次煎煮一般能煎煮出药物有效成分的60%，第二次煎煮时重新构建浓度平衡，能煎出30%[19]。试验中一次煎煮的方法不能使药材中的有效成分尽出，需要在后续研究中改良。溶剂用量也会影响丹参酚酸B、木香挥发油和砂仁挥发油的浓度，溶剂用量增多可促进药物有效成分的扩散[20]，但用量过多同样会给后续药液浓缩带来困难，迫使延长煎煮时间，丹参酚酸B 易分解，挥发油逸散[21]。

本研究中优化了行气祛瘀汤中作为一般药物丹参和特殊煎煮药物木香和砂仁的煎煮方法，但行气祛瘀汤中还有其他药物的煎煮需要优化，仍需进一步探究，且药物反应更需深入研究，以充分发挥行气祛瘀汤的功效。