CD34和Ki67的表达预测肝癌术后复发的风险

贾磊 李豪 白鸿太 陈国勇 魏思东

肝细胞癌(HCC)是常见的恶性肿瘤，其发病率位于所有恶性肿瘤第3位，仅我国每年导致33万多例肝癌的相关死亡，病死率居于恶性肿瘤前列[1]。目前肝癌最好的治疗方式仍是根治性的手术切除，肝癌根治性手术术后在6、12、24个月时的复发率分别为27.0%、39.7%和45.6%，近半都在两年内复发，5年相对生存率为12.1%[2]，术后复发制约了患者的长期生存。如何预测肝癌复发对治疗具有重要的意义。我们通过对比分析发现，肝癌组织CD34和Ki-67的表达能够预测肝癌的术后复发，为肝癌术后复发的预测提供了方向。

资料与方法

一、一般资料

回顾性分析从2014年10月至2018年12月我院因肝细胞癌行根治性手术治疗患者的临床资料及病理免疫组化结果，排除术前证实有肝内外转移、无法行根治性手术、或根治性手术前给予过介入或射频消融手术、术后无随访、病理资料不全、不能定性或无免疫组化结果的患者资料后。共50例患者纳入统计分析。

二、 资料采集

收集患者的性别、年龄、是否患有乙肝、肿瘤最大直径、临床病理结果、免疫组化结果和复发的时间。

三、复发时间及分组

所有患者行根治性手术切除，于术后定期复查彩超、甲胎蛋白(AFP)等，当彩超提示肿物或AFP再次升高，怀疑复发之后再进一步进行增强CT、MRI明确诊断。以手术后2年内复发定义为早期复发组，2至5年复发定义为晚期复发组，早期复发组及晚期复发组合并定义为复发组， 5年内未复发者定义为治愈组。

四、统计学方法

运用统计学软件SPSS 22.0数据进行分析。计数资料采取例数和百分比表示，单因素分析采用χ2检验、Fisher确切概率法；计量资料使用均数±标准误表示，差异比较采取t检验，3组间比较使用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、患者一般资料比较

在纳入统计的50例患者中，其中32例男性，18例女性；14例患者早期复发，16例晚期复发，20例未复发；首先将早期复发和晚期复发合称为复发组共30例，未复发的治愈组20例。复发组年龄(53.5±1.9)岁，治愈组(50.6±3.9)岁。肿瘤最大直径复发组为(5.4±0.7)cm，治愈组(4.9±0.6)cm。复发组96.7%(29/30)患有慢性乙型肝炎，治愈组80%(16/20)患慢性乙型肝炎。一般资料比较复发组和治愈组无统计学差异。

二、复发组和治愈组免疫组化分析

通过对两组患者的免疫组化分析发现，CD34的阳性表达在复发组明显高于治愈组(P<0.05)，复发组和治愈组表达率分别为73.3%(22/30)和45.0%(9/20)。Ki67的表达在复发组高于治愈组(P<0.05)，复发组和治愈组表达率分别为(39.0±3.3)%和(25.3±5.1)%；同时我们分析了两组间CD10、CK19、Hep、Arg和GPC-3的表达，结果显示这些蛋白的阳性率在复发组均稍高于治愈组，但无统计学差异(P>0.05)。结果见表1。

三、早期复发组、晚期复发组和治愈组免疫组化分析

为进一步分析是否CD34和Ki67的表达在不同时间段复发组有差异，我们把早期复发组、晚期复发组和治愈组免疫组化结果再进一步对比。结果显示CD34早期复发组阳性表达为71.4%(10/14),晚期复发为75%(12/16)，和治愈组三组进行卡方检验，χ2=4.129，P=0.127，三组之间无差异。Ki67早期复发组的表达为41.4±5.0(%)，晚期复发组为(36.9±4.5)%，治愈组为(25.3±5.1)%，3组行方差分析，F=2.943，P=0.063，不能认为三组间有差异。

讨 论

肝细胞癌术后复发转移其危险因素的分子预测尚不明确，干细胞的理论认为，肿瘤的复发与干细胞的存在密切相关，CD34蛋白是一种高度糖基化修饰的跨膜糖蛋白，选择性表达于人类干细胞表面，在细胞成熟后表达下降，肝脏病理研究显示CD34的表达在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌中的表达依次增强[3]，在研究肝脏结节性病变中发现，肝癌中CD34的表达明显高于肝脏再生结节(RN)不典型增生结节(DN)，并且CD34的表达从RN到DN再到肝癌依次升高[4]，同时，在甲胎蛋白阴性的原发性肝癌中，伴有局灶性结节性增生(FNH)的患者的CD34蛋白表达明显高于不伴有FNH的患者[5]。CD34是特异性和敏感性都比较强的血管内皮细胞标志物，和肿瘤的血管生成、毛细血管密度密切相关，对血管的生成起促进作用，肿瘤的微血管越多增值指数越高；CD34分子有可能通过促进血管生成促进癌变的过程，研究显示CD34阳性表达的骨髓源性细胞被招募聚集于脑肿瘤中，支持新生的血管，促进肿瘤的生长。虽有研究显示CD34的表达在分化较好的肝癌组织中表达的阳性较高，但因CD34和血管生成的关系，更容易形成脉管瘤栓，这就使CD34阳性表达的肝细胞癌更容易发生血行转移，该研究显示CD34的表达是肝细胞癌术后复发的关键因素，CD34的高表达可能预示肝细胞癌的不良预后，其机制可能是CD34的高表达与更容易形成脉管癌栓转移相关。

表1 复发组与治愈组免疫组化蛋白表达比较的数据统计分析

a:CD34阳性表达;b:CD34阴性表达;c:Ki67高表达;d:Ki67低表达

图1CD34和Ki67在肝癌组织中的表达

Ki67 抗原是细胞增殖标志抗原，与多种肿瘤细胞的增殖活性、细胞周期以及肿瘤的生长方式、复发、转移等多种生物学行为相关，其表达随细胞周期的不同而发生改变，G0期不表达，而在G1 、S 期、G2期、M期的表达逐渐升高[6]。有研究证实Ki67的表达越弱，则其组织的分化越好，反之，Ki-67高表达，则其分化程度低[7]，相关研究也证实Ki-67 的过表达与肝细胞癌肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移、静脉侵犯、浸润深度有关，较高的Ki-67表达可使肝细胞癌患者进展快，预后差，其生存率明显降低，在口腔鳞癌中也得到相似结论[8-9]。本研究发现，根治性手术切除术后，复发组的Ki-67和治愈组的表达有差异，且复发组Ki-67的表达明显大于治愈组，提示Ki-67的高表达能够预测术后肝癌复发的风险。

在CD34及Ki67两种蛋白三组对比时得出结果均不能证明三组间存在差异，可能是由于对比三组间的差异使每组的数据减少，有待增加样本量进一步分析。细胞角蛋白(CK)19属于胆管细胞型细胞角质素，参与肿瘤侵袭和血管生成，CK19表达阳性的组织分化较低[10]，CK19与不良预后有关，但本研究中无统计学差异，考虑数据较少，其与复发的关系有待进一步研究。