CLEC12B在肝癌中的表达及其临床意义*

卢雪兰 刘 娟 严景全 王春玲 蓝云翠 林占洲

广东省惠州市中心人民医院肝病内科 516001

肝癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，其具有高发、易复发、危害大等特点[1]，死亡率占所有恶性肿瘤死亡率的第二位[2]。目前肝癌主要采用手术联合放化疗进行治疗，术后死亡主要因肝癌复发。因此，研究肝癌术后复发的机制成为降低肝癌死亡率的重要突破口。凝集素受体是一类高特异性的糖蛋白，已有研究证实凝集素受体表达量可作为肝癌诊断的辅助标准之一[3]。此外，研究表明凝集素受体阳性可作为急性淋巴细胞性白血病的易复发标志之一。然而，凝集素受体是否能预测肝癌复发尚不确定。C型凝集素受体12B(CLEC12B)作为凝集素受体超家族的一员，与肝癌易感性相关[4]。因此，本研究利用TCGA公共数据库，分析CLEC12B在肝癌中的表达情况，探讨CLEC12B在肝癌发生发展及预后中的作用。

1 资料和方法

1.1 资料数据来源 从TCGA官方网站下载数据，包括肝癌数据集的mRNA表达数据以及对应的临床资料数据。临床资料包括生存时间、生存状态、年龄；病理资料包括组织学分型、TNM分期等。TCGA肝癌数据集样本数为424例，其中癌组织样本374例，癌旁组织样本50例。

1.2 数据库筛选和分组 利用R软件对数据进行预处理，筛选生存资料完整的370例进行相关性分析和生存分析。利用肝癌与癌旁配对样本(50例)比较CLEC12B在癌及癌旁组织的表达。利用Survminer包计算CLEC12B表达量最佳截断值，并依据最佳截断值将样本分为高表达组和低表达组。

1.3 基因富集分析 利用clusterProfiler包进行基因富集分析，分析CLEC12B的表达水平对其他功能集的影响，参照基因集为h.all.v6.2.entrez.gmt数据集，设置随机组合次数1 000次。

1.4 统计学方法 所有数据处理和统计分析利用R 3.4.0完成。癌组织和癌旁组织表达量比较用单因素方差分析。生存分析采用Kaplan-Meier曲线，显著性分析采用Log-rank检验。利用Cox回归模型分析临床特征与肝癌预后的关系，将单因素分析中P<0.1的参数纳入多因素分析。

2 结果

2.1 癌组织与癌旁组织中CLEC12B的表达 在同一个患者中，与癌旁组织相比，癌组织中CLEC12B表达量明显较低(P<0.001)。提示肝癌的发生过程中CLEC12B表达被抑制，见图1。

图1 CLEC12B在配对的癌组织和癌旁组织的表达水平

2.2 CLEC12B表达量对肝癌预后的影响 将CLEC12B表达≥5.75定义为高表达组，<5.75定义为低表达组。CLEC12B表达与总体生存显著相关，高表达患者总体生存期优于低表达患者，见图2。在单因素COX回归模型中，TNM分期、年龄、CLEC12B表达状态能够影响患者的预后(P<0.05),性别、病理分期对预后没有明显影响(见表1)。将以上P<0.1的因素纳入多因素分析，TNM分期、年龄、CLEC12B表达状态是影响肝癌患者预后的独立因素，见表1。

图2 CLEC12B表达状态与肝癌患者预后的关系

2.3 CLEC12B表达与临床病理学参数相关性 相关性分析显示CLEC12B表达与年龄、性别、TNM分期以及病理分期均无关，见表2。

2.4 基因富集化分析 基因富集分析示，CLEC12B高表达样本富集到DNA修复相关的基因集(P<0.05,FDR=0.012)，低表达样本富集到炎症反应相关的基因集(P<0.05,FDR=0.002)，见图3。

表1 影响肝癌预后的因素

表2 CLEC12B表达与临床病理学参数相关性

图3 GSEA分析CLEC12B表达相关富集分析

A：DNA修复 B：炎症反应

3 讨论

CLEC12B是C型凝集素受体超家族的一员[5]。本研究显示，相比癌旁组织，CLEC12B在癌组织中呈现低表达，CLEC12B高表达组总体生存期明显优于低表达组。这些结果提示CLEC12B与肝癌的发生发展呈负相关，可以作为肝癌预后的预测指标。基因富集分析提示CLEC12B高表达与炎症反应、DNA修复相关，提示CLEC12B可能通过影响肝脏炎症反应以及DNA修复调节了肿瘤的发生发展。

研究发现CLEC12B主要表达在骨髓细胞表面，能够抑制单核细胞来源的免疫细胞的活性，从而参与机体的炎症调控[6-7]。肝癌的发生发展与肝脏炎症密切相关[8]，基因富集分析提示CLEC12B高表达与炎症反应有关。因此，我们推测CLEC12B可能通过影响肝脏的炎症，进而影响肝癌的发生。此外，DNA损伤是肝癌发生的重要机制之一[9]，基因富集分析提示CLEC12B高表达与DNA修复有关，因此推测CLEC12B可能通过上调DNA修复相关的基因，从而抑制肝癌的发生发展[10]。

本研究有一定不足之处。首先，TCGA数据库提供的是CLEC12B的mRNA表达水平，无法完全代表CLEC12B的蛋白质表达水平。其次，本研究的结论来源于在线数据库分析，分析结果具有一定的提示作用，但还需要临床以及基础研究进一步证实。

综上所述，CLEC12B可能通过炎症及DNA修复等影响肝癌发生发展及预后。该结果将为深入研究CLEC12B在肝癌中的作用提供线索和依据。