腹腔镜结直肠癌手术治疗对结直肠癌患者血清中 miR-17、miR-21、miR-20a 和 miR-92 水平的影响

陈明干，丁新德，章波，朱松明

（上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院 普外科，上海 202150）

关键字：腹腔镜结直肠癌手术；结直肠癌；miR-17；miR-21；miR-20a；miR-92

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是西方国家癌症死亡的第二大常见原因[1]。作为一种异质性疾病，CRC 因为多种遗传和表观遗传改变的积累而发生发展，这些改变使全球基因表达谱得到拓展[2]。正是这种遗传进展促成了CRC 的多样性表型。miRNA 是最近发现的一类非编码RNA，其通过降解靶向mRNA或通过类似于小干扰RNA 介导的基因沉默机制来调节基因表达[3]。ZHANG 等[4]研究发现，PRL-3 诱导的miR-21、miR-17 和miR-19a 能促进结肠癌的增殖和转移。CHAI 等[5]发现，miR-20a 能够靶向BNIP2，并在结直肠腺癌SW480 和SW620 细胞系中提供化疗耐药性。TSUCHIDA 等[6]发现，miR-92 是结肠癌中miR-17-92 簇的关键致癌成分。因此，本研究旨在探究腹腔镜结直肠癌手术对CRC 患者血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳 入2015年6月－ 2018年6月 本 院 收 治 的CRC 患者120例作为研究对象。其中，男71例，女49例；年龄29 ～51岁，平均（39.13±9.37）岁。120例CRC 患者均经本院病理科证实。纳入标准：术前结直肠肿瘤临床分期为Ⅱ期及Ⅲ期者。排除标准：①同时患有其他癌症者；②精神疾病者；③近3 个月经过化疗放疗的患者；④严重心、肝、肾功能损伤者。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。受试者均签署知情同意书。

1.2 手术方法

采用腹腔镜结直肠癌手术。基于加速康复外科理念，患者在术前8 h 内禁食、4 h 内禁饮，手术前1晚口服洗肠散清洁肠道。在肿瘤下方切断封闭直肠，保证切缘和肿瘤的距离足够，中高位结直肠癌大于5cm，低位结直肠癌大于3cm。修理结肠系膜血管，距肿瘤预切点置入荷包钳，切除、移去标本，检查近端结肠的血运情况以及吻合的长度是否足够，必要时继续游离结肠脾曲。游离结肠脾曲时，将横结肠向右侧牵引，降结肠向内侧牵引，超声刀切断脾结肠韧带以及部分胃结肠韧带。收紧结扎荷包线，放入腹腔，缝合关闭左下腹横切口。重新建立气腹。扩肛，碘伏水冲洗直肠腔，圆形吻合器经肛门于直肠切割线附近刺穿，与抵钉座对合，完成吻合。用50 ml 注射器往直肠腔内注气。冲洗及引流管放置重建气腹，反复以生理盐水冲洗盆腔，确切止血，盆底腹膜可不关闭，腹腔镜监视下将腹腔引流管放到直肠膀胱陷凹。

1.3 观察指标

1.3.1 实时荧光定量PCR（RT-qPCR） 采集120例CRC 患者行腹腔镜结直肠癌手术前8 h 和术后24 h时的肘前部静脉血5 ml。采用红细胞溶解法分离有核细胞，TRIZOL 法抽取总RNA，RT-qPCR 法对血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平进行相对定量检测。引物序列见表1，交由北京擎科公司合成。

表1 目的基因和内参基因RT-qPCR 引物序列Table 1 Quantitative PCR primer sequence of target gene and internal reference gene

1.3.2 生活质量评分 采用生活质量核心调查问卷第3 版（quality of life core questionnaire version 3.0，QLQ-C30）评分，对患者行腹腔镜结直肠癌手术前后躯体、认知、情绪、角色和社会功能评分进行认定。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验，采用Pearson 相关系数确定相关性。P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者手术前后QLQ-C30 评分比较

经过腹腔镜结直肠癌手术治疗后，患者的躯体、认知、情绪、角色和社会功能评分均得到明显提高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

表2 患者手术前后QLQ-C30 评分比较 （分，±s）Table 2 Comparison of QLQ-C30 scores before and after surgery （score，±s）

表2 患者手术前后QLQ-C30 评分比较 （分，±s）Table 2 Comparison of QLQ-C30 scores before and after surgery （score，±s）

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2.2 手术前后患者血清miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平比较

经过腹腔镜结直肠癌手术治疗后，患者血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的相对水平均明显下降，治疗前后差异具有统计学意义（P ＜0.05）。见附图。

2.3 手术前后患者QLQ-C30 评分变化与血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 变 化 的 相关性

采用Pearson 相关系数对手术前后QLQ-C30评分变化与血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的变化进行相关性分析，结果显示，miR-17、miR-20a 和miR-92 的相对表达量变化与QLQ-C30 评分变化有相关性（P ＜0.05），而miR-21 则无相关性（P ＞0.05）。见表3。

附图 手术前后患者血清miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 水平比较Attached fig. Comparison of serum levels of miR-17, miR-21, miR-20a and miR-92 before and after surgery

表3 手术前后患者QLQ-C30 评分变化与血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 变化的相关性Table 3 Correlation between changes of QLQ-C30 score and serum miR-17, miR-21, miR-20a and miR-92 before and after surgery

3 讨论

CRC 是世界上第四大致命的癌症，全球CRC 的死亡率约为50%[7]。许多国家的发病率逐年上升，这可能与饮食和生活习惯的改变有关[8]。腹腔镜结肠直肠癌手术现已广泛用于治疗结直肠肿瘤，该手术在过去15年中使用率稳步增加[9-10]。本研究发现，采用腹腔镜结直肠癌手术治疗后，患者的躯体、认知、情绪、角色和社会功能评分均得到明显提高，提示：腹腔镜结直肠癌手术已成为外科医生治疗CRC 的重要工具，能够有效改善患者身体状况。

miRNA 属于一类内源表达的约22 个核苷酸的非编码小RNA[11]。这些小RNA 通过与蛋白质编码基因的mRNA 配对来影响基因调控，通过降低翻译效率或mRNA 水平来抑制基因表达[12]。有研究表明，miRNA 表达的失调有助于多种多样的人类疾病的发生发展，包括CRC[13]。本研究采用腹腔镜结直肠癌手术治疗CRC，术后患者的健康状况得到明显改善，疗效明显。PRL-3 在结肠癌细胞中过表达，并且通过 激 活STAT3 诱 导miR-21、miR-17 和miR-19a 表达[4]，这些miRNA 有助于结肠癌细胞的增殖和加强侵袭性。然而，本研究中患者术后血清中miR-17、miR-21、miR-20a 和miR-92 的相对水平均明显下降，提示：腹腔镜结直肠癌手术能够减缓癌细胞增殖和侵袭。miR-20a 的调节改变了SW620 和SW480 细胞对化疗药物的敏感性；敲除miR-20a 使SW620 细胞对化学治疗剂敏感，而在SW480 细胞中过表达miR-20a导致化学抗性[5]。提示：经腹腔镜结直肠癌手术治疗后，能够有效降低耐药性，使化疗药物敏感。最近的3 项研究[6，14-15]将miR-92 鉴定为miR-17-92 区域内的关键致癌介质，证明了miR-92 能抑制c-Myc 诱导的细胞凋亡，并通过c-Myc 抑制磷酸酶和张力蛋白同源物两个肿瘤抑制因子来促进淋巴瘤形成，提示：腹腔镜结直肠癌手术治疗能使细胞的凋亡水平恢复到正常。本研究通过相关性分析发现，miR-17、miR-20a和miR-92 的相对表达量变化与QLQ-C30 评分变化有相关性（P ＜0.05），而miR-21 则无相关性（P ＞0.05），提示：患者血清中miR-17，miR-20a 和miR-92 水平可作为临床评价疗效的一种辅助标志物。

综上所述，腹腔镜结直肠癌手术治疗后，能够有效改善患者身体状况，患者血清中miR-17、miR-20a和miR-92 的水平可以作为评估治疗效果的潜在标志物。