老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系

何春华 张斌忠 王胤达 董来荣

(嘉兴学院附属第二医院肿瘤外科，浙江 嘉兴 314000)

胃癌是消化系统常见恶性肿瘤，其预后比较差，对患者健康造成严重威胁。随着胃癌诊治技术的不断发展，胃癌的预后有所改善，但胃癌的早期诊断率仍比较低，使部分患者不能及时诊治，导致生存率仍不乐观〔1〕。探索胃癌发生发展的标志物对早期防治胃癌和改善胃癌预后具有重要意义。微小RNA(miR)在动植物中广泛存在，在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用〔2〕。miR-93-5p为新发现的miRNA，在多种恶性肿瘤中表达异常，在恶性肿瘤的发病过程中发挥重要作用〔3，4〕。本文对胃癌患者血清miR-93-5p水平进行研究，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 收集2011年1月至2013年11月嘉兴学院附属第二医院老年胃癌患者160例和同期老年健康体检者160例分别作为胃癌组和对照组。胃癌患者均为首诊、病理证实为胃癌；两组签署知情同意书、年龄≥60岁。研究经嘉兴学院附属第二医院伦理委员会审批后进行。胃癌组年龄(67.85±6.76)岁，肿瘤最大径(4.87±1.92)cm；TNM分期Ⅰ期37例、Ⅱ期58例、Ⅲ期51例、Ⅳ期14例；局部浸润深度T1 32例、T2 44例、T3 51例、T4 33例；分化程度：低分化128例、中分化18例、高分化14例；对照组年龄(68.13±7.02)岁，男110例、女50例。两组年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2研究方法 miR-93-5p测定：抽取患者外周静脉血5 ml，置于离心机中离心(2 000 r/min)10 min，分离血清，加入Trizol提取总RNA，酶标仪测定RNA质量和浓度，将总RNA反转录为cDNA，以U6为内参照，在PCR仪中扩增，PCR条件为：95℃ 10 min；95℃ 20 s、60℃ 30 s、72℃ 30 s，共42个循环。以2-ΔΔCT表示血清miR-93-5p水平。PCR试剂盒及miR-93-5p引物购自美国ABI公司。

1.3随访 胃癌术后通过门诊或电话随访，随访截止时间为2018年11月30日。

1.4统计学方法 采用SPSS20.0软件进行t检验，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-93-5p对胃癌的诊断价值，采用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线，预后影响因素采用Cox分析。

2 结 果

2.1胃癌患者血清miR-93-5p水平 与对照组血清miR-93-5p水平(1.00±0.08)比较，胃癌组血清miR-93-5p水平明显升高(1.86±0.14，t=67.464，P<0.001)。

2.2不同胃癌临床病理特征患者血清miR-93-5p水平比较 不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度者血清miR-93-5p水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；不同TNM分期、局部浸润深度、淋巴结转移者血清miR-93-5p水平比较差异有统计学意义(P<0.05)，TNM分期高、局部浸润深度深、有淋巴结转移者血清miR-93-5p水平明显高于TNM分期低、局部浸润深度浅、无淋巴结转移者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同胃癌临床病理特征患者血清miR-93-5p水平比较

2.3血清miR-93-5p诊断胃癌的效能 采用ROC曲线分析血清miR-93-5p诊断胃癌的效能，根据约登指数计算血清miR-93-5p最佳界值为1.324，ROC曲线下面积为0.871，95%CI为0.868～0.874，根据此界值判断胃癌的灵敏度为71.25%(114/160)，特异度为96.25%(154/160)。见图1。

图1 血清miR-93-5p诊断胃癌的ROC曲线

2.4血清miR-93-5p与胃癌预后的关系 160例胃癌患者随访5年，根据ROC曲线约登指数计算的血清miR-93-5p=1.324为界，将患者分为高表达组92例和低表达组68例，高表达组5年总生存率(51.09%)和无病生存率(39.13%)均明显低于低表达组(79.41%、70.59%，χ2=13.477、15.516，P<0.001)。见图2和图3。

2.5胃癌预后的Cox比例风险分析 以血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸润深度、分化程度、淋巴结转移为自变量进行胃癌预后影响因素Cox比例分析，结果显示：血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸润深度、分化程度、淋巴结转移为胃癌预后的独立影响因素(P<0.05)。见表2。

图2 血清miR-93-5p与胃癌无病生存率的关系

图3 血清miR-93-5p与胃癌累积生存率的关系

表2 胃癌预后影响因素Cox比例风险模型参数

3 讨 论

胃癌患者早期症状缺乏特异性，难以鉴别，往往发展至晚期时才得以确诊，错过最佳治疗时机，预后比较差〔5〕。胃癌死亡率比较高的主要原因为无有效的早期筛查和诊断胃癌的方法〔6〕。胃镜检查为早期诊断胃癌的主要方法，但其为有创操作，难以普及；临床常用的CA199、癌胚抗原等肿瘤标志物在胃癌的筛查中特异性和灵敏性不足，故探讨新的非侵入性胃癌诊断标志物具有重要价值。miRNA为非编码、单链小RNA，可参与多种关键的生理病理活动；miRNA在恶性肿瘤的发病过程中也发挥重要作用，在恶性肿瘤的组织和细胞中，多种miRNA表达异常〔7，8〕。miRNA通过调控癌基因表达或抑癌基因表达参与恶性肿瘤的发生发展过程，多数miRNA发挥促进恶性肿瘤发生的作用，也有部分miRNA发挥抑制恶性肿瘤发生的作用〔9〕。多种miRNA在胃癌的发生发展中也发挥重要作用，如Feng等〔10〕研究发现miR-27b可通过靶向NR2F2抑制胃癌转移；汤光华等〔11〕研究发现老年胃癌患者血清miR-18a水平升高，为胃癌筛查诊断中新的血清学指标；Jin等〔12〕研究发现miR-582-5p可通过靶向AKT3抑制胃癌细胞的增殖。miR-93-5p位于11q22.1染色体上，属于miR-106b-25家族，在哺乳动物中miR-93-5p比较保守〔13〕。近来研究发现miR-93-5p在多种恶性肿瘤中表达异常，在多种恶性肿瘤的发病中具有重要作用。如张春明等〔14〕研究发现喉癌组织和细胞中miR-93-5p表达升高，其为喉癌发生发展过程中的重要癌基因；胡怡然等〔15〕研究发现miR-93-5p在直肠癌组织中也高表达，miR-93-5p水平与直肠癌体积、淋巴结转移关系密切，其有望成为直肠癌新的生物标志物；Wang等〔16〕研究发现miR-93-5p可通过下调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A基因的表达增强人结肠直肠癌细胞的多药耐药性。本研究结果表明miR-93-5p在胃癌的发病过程中发挥重要作用，血清miR-93-5p水平和胃癌患者的病情严重程度关系密切，检测血清miR-93-5p水平在胃癌筛查、严重程度评估和预后评价中具有重要价值。