基于香豆素母核的磺酰腙类乙酰胆碱酯酶抑制剂的制备

2020-03-10赵友芳黄国娟陈娅芳

山东化工 2020年2期

赵友芳，黄国娟，陈娅芳，於祥

(贵州中医药大学药学院，贵州贵阳 550025)

香豆素是一种具有苯并α-吡喃酮的结构，分子式为C9H6O2，分子量为146.04，其结构式如图1所示。香豆素类化合物是一类具有香豆素母核的杂环化合物，具有抗癌[1]、抗炎[2]、抗菌[3]等生物活性。此外，香豆素类化合物对乙酰胆碱酯酶也具有抑制活性，如8-羟基香豆素[4]、蛇床子素[5]等，都表现出一定的对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。磺酰腙类化合物因含有-NHN=CH-结构，具有很强的配位能力，也具有多种生物活性[6]。

为研究新型高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂，本论文采用亚活性结构拼接的方法，以7-二乙氨基香豆素为母核，引入磺酰腙结构，将两种活性结构连接在一起，设计合成了3个衍生物(合成路线如图2所示)，并采用Ellman法[7]测定了目标化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。

图1 香豆素结构

图2 目标化合物的合成路线

Fig.2 The synthetic route of the target compounds

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Bruker Avance 600 MHz 核磁共振仪 (Bruker 公司)，TMS为内标；Thermo DSQ 质谱仪(Thermo 公司)；YRT-3型熔点仪(南京旭析仪器有限公司)；旋转蒸发仪(Heidolph公司)RT-6100酶标分析仪(雷杜公司)；所有试剂与溶剂均为市场所售分析纯级。

1.2 实验部分

1.2.1 中间体2的合成将称取好的7-二乙氨基-4-甲基香豆素(1，1 mmol)置于50 mL 的圆底烧瓶中，加入10 mL 1,4-二氧六环，升温至60 ℃。称取二氧化硒(1.1mmol)加入反应液中，然后将温度升高到80 ℃，搅拌反应。TLC检测反应进度。反应进行4小时后，底物反应完全。将反应液冷却至室温，过滤，除去反应液中的沉淀。沉淀用20 mL二氯甲烷洗涤。合并有机溶剂，用旋转蒸发器浓缩，薄层硅胶层析分离，得黄色固体2，产率为73%，熔点171～173 ℃。

1.2.2 目标化合物的合成称取1 mmol 中间体2、1 mmol取代磺酰肼于50 mL圆底烧瓶中。10 mL 无水乙醇溶解。室温搅拌反应。TLC进行跟踪检测反应是否反应完全。5 ～ 12h后，底物反应完全。将反应液冷却至室温直到没有固体析出。然后抽滤，所得固体用无水乙醇重结晶得腙类衍生物3a -c。

1.2.3 活性测定采用Ellman法[7]对AChE体外抑制活性进行测试。将称好的样品加适量二甲亚砜溶解后加pH 7.4的0.1mol/L磷酸缓冲液(PBS)溶液，配制成1mmol/L的待测溶液。阳性对照采用他克林，空白对照采用磷酸缓冲液(PBS)溶液。测定时首先在96孔板上加入用待测样品10 μL，再依次加入40 μLPB、20 μL 2.5 mmol/L 的5,5-二流双硝基苯甲酸(DTNB)、10 μL的电鳗乙酰胆碱酯酶，振荡混匀，37℃预孵10min，然后加入20 μL 10 mmol/L的碘化硫代乙酰胆碱，37℃反应10min，加入30μL 1%的SDS终止反应，酶标仪测定405nm吸收值并计算样品对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。

2 结果与讨论

目标化合物的合成路线图如图2所示。本论文以1,4-二氧六环做溶剂，SeO2做氧化剂，将7-二乙氨基-4-甲基香豆素的甲基氧化成醛基，然后与取代磺酰肼反应，生成7-二乙氨基香豆素磺酰腙类衍生物。所有目标化合物都经熔点、1H NMR和MS进行结构确证。解谱数据如下;

3a：产率70%，黄色固体，熔点176～178 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO ～ d6) δ：12.21(s，1H)，8.00 (d，J=9.6 Hz，1H)，7.98 (s，1H)，7.91～7.92 (m，2H)，7.69～7.71 (m，1H)，7.64 (t，J=7.2 Hz，2H)，6.69 (dd，J = 9.6，2.4 Hz，1H)，6.51 (d，J=2.4 Hz，1H)，6.15 (s，1H)，3.41 (q，J=7.2 Hz，4H)，1.11 (t，J=7.0 Hz，6H)；MS m/z：422.1 ([M+Na]+，100)。

3b：产率67%，黄色固体，熔点160～162 ℃；1H NMR (600 MHz，DMSO～d6) δ：12.12 (s，1H)，7.99 (d，J=9.0 Hz，1H)，7.96 (s，1H)，7.79(d，J=8.4 Hz，2H)，7.45(d，J=7.8 Hz，2H)，6.67(dd，J=9.0，2.4 Hz，1H)，6.51(d，J=2.5 Hz，1H)，6.15(s，1H)，3.41(q，J=7.2 Hz，4H)，2.37(s，3H)，1.11(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：436.0 ([M+Na]+，100)。

3c：产率62%，黄色固体，熔点161～163 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO～d6) δ：12.64 (s，1H)，8.53 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.40 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.35 (d，J=7.2 Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.80(d，J=9.0 Hz，1H)，7.72(t，J=8.4 Hz，1H)，7.61(t，J=8.4 Hz，1H)，7.26(d，J=7.2 Hz，1H)，6.55(dd，J=9.6，2.4 Hz，1H)，6.46(d，J=2.4 Hz，1H)，6.09(s，1H)，3.39(d，J=7.2 Hz，4H)，2.80(s，6H)，1.09(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：515.3([M+Na]+，100)。

采用改进型的Ellman法测定了目标化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，活性结果如表1所示。