木贼镰刀菌最适营养条件筛选

裴双康 刘彦妮 弓玉红 田晶

摘 要：以菌落生长速率、菌落直径及产孢量为指标，从5种常用培养基中筛选最适合木贼镰刀菌生长的培养基，再通过正交试验对所选培养基进行优化。结果表明，木贼镰刀菌在SDAY培养基上生长最快，速率达6.736mm·d-1;直径最大，为56.33mm;产孢量最大，达到3.66×107cfu·mL-1。正交试验优化后，最适合木贼镰刀菌生长的培养基成分为蛋白胨10g、葡萄糖48g、酵母粉1.5g、琼脂15g、蒸馏水1L。

关键词：木贼镰刀菌;培养基;菌落直径;产孢量;正交实验

中图分类号 Q 939.5文献标识码 A文章编号 1007-7731（2020）（02-03）0024-03

Fusarium equiseti most Suitable Nutrition Condition Screening

Pei Shuangkang et al.

（Lvliang College of Life Sciences Department， Lvliang 033000， China）

Abstract： With the Fusarium equiseti as the research object， the growth rate， the diameter of the colony and the production of spores were the index， the medium best suited for its growth was selected from several commonly used mediums， and the selected medium was optimized by orthogonal test. The results showed that the F.equiseti grew fastest on SDAY， with a rate of 6.736 mm d-1， the largest diameter， 56.33 mm， and the largest spore production， reaching 3.66 x 107 cfu mL-1. After optimization through orthogonal testing， the most suitable medium components for the growth of  F.equiseti are protein sucrose 10 g， glucose 48 g， yeast powder 1.5 g， agar 15 g， distilled water 1 L.

Key words： Fusarium equiseti; Medium; Colony diameter; Spore production; Orthogonal experiment.

木賊镰刀菌（Fusarium equiseti）是一种重要的虫生真菌，分布方泛。木贼镰刀菌能产生植物刺激素，如赤霉素等，这些刺激素可使农作物在一定程度上增产[1]，而且部分可产生纤维酶、果胶酶、脂肪酶等具有极大应用价值的酶类。

1986年有研究初步表明：木贼镰刀菌在人工培养基上生长良好，对菜青虫有较高的致病力，具有田间使用价值[1]。2013年有研究表明：黄海海域海蜇的共生微生物包括木贼镰刀菌，并通过实验确定了其4个次生代谢产物，包括Alternariol，Djalonensone，腺嘌呤核苷和过氧麦角甾醇，其中过氧麦角甾醇具有广泛抗痛、抑菌等生物活性[2]。本研究以木贼镰刀菌为研究对象，以菌落生长速率、菌落直径及产孢量为指标，从5种常用培养基中筛选最适合其生长的培养基，通过正交试验优化后，得出最适合木贼镰刀菌生长的培养基成分，为此菌的扩大培养提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种供试 菌株：木贼镰刀菌，试管斜面保存于4℃的冰箱中。使用时，取出活化，接种于PDA培养基，置于28℃生化培养箱中培养，待制作孢子悬浮液。

1.1.2 培养基 5种培养基成分见表1。

1.1.3 仪器与设备 BSA224S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司;HZJK-1 KDM型控温电热套，山东鄄城华鲁仪器公司;YX-24LDJ手提式压力蒸汽灭菌器（简），江阴滨江医疗设备有限公司;HH0-C1112B超净工作台，上海智城分析仪器制造有限公司;SPX-250生化培养箱，上海跃进医疗器械有限公司;SMART生物显微镜，重庆奧特光学仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 扩大培养 将保存于4℃冰箱试管斜面上的木贼镰刀菌取出活化，并接种于PDA培养基中，置于28℃生化培养箱培养。5d后，待其长满整个培养皿2/3，即可用于制作孢子悬浮液。

1.2.2 接种及菌落直径测定 按照表1中的5种培养基配方进行培养基配制，每种培养基在灭菌后分别倒至5个培养皿内，以做重复。取出已长满培养皿2/3的木贼镰刀菌，用无菌水将其制作成孢子悬浮液，用灭菌的滤纸片（直径约5mm）蘸取孢子悬浮液，置于培养皿中心，倒置于28℃生化培养箱中培养[3-5]。接种后，从第2d开始，每天同一时间双向测量菌落直径，取平均值并记录，最终计算其生长速率，期间观察各培养皿的菌落形态特征。

1.2.3 产孢量测定 用灭过菌的打孔器在各培养基的菌落上打5个孔，再将5个菌饼置于5mL无菌水中，搅拌均匀，用2层灭菌的纱布过滤，滤液即为孢子悬浮液。利用血球计数板进行计数，根据公式计算其产孢量[6]。

1.2.4 正交实验 在确定了最适合木贼镰刀菌生长的培养基之后，针对其配方，选择蛋白胨，麦芽糖，酵母粉作为3个试验因素，每个因素设置3个水平，进行正交试验，记录菌落直径与产孢量。