XPO1共价抑制剂的虚拟筛选及皮肤损伤治疗分析

康黔莉

（贵航贵阳医院药剂科，贵州 贵阳 550000）

1 虚拟筛选

近年来，更多的XPO1抑制剂逐渐被发现，从特异性强、典型的LMB，到毒性小的SINE类化合物，至今没有应用于临床的药物，LMB化合物为选择性抑制剂，因存在毒性，不可应用于临床研究，而部分SINE类化合物可开展研究，因此低毒性XPO1共价抑制剂受到临床的关注。很多XPOI抑制剂作用机制为NSE序列中活性氨基酸结合，进而产生迈克尔加成反应。CYS为共价化合物和靶蛋白间共价结合重要氨基酸，因此，靶向XPO1中NES序列结合口袋中发现部分XPO1共价结合小分子化合物。

1.1 以Pubchem数据库为基础的虚拟筛选

Pubchem为NCBI旗下有机小分子生物活性数据库，属于开放性数据库，是美国健康研究院所开发，启动于2004年，以小分子数据资源的提供为目的，以便研究者能够实施小分子高通量筛选，对活性小分子探针进行鉴定与发展，促使化学生物研究与药物开发研究不断加快。Pubchem是由三个数据库交叉相连组成分别为BioAssay、Substanse与Compound，其中BioAssay数据库是对生化实验有关数据进行储存；BioAssay数据库是个人或者机构单位上传化合物的原始数据；Compound数据库是对化合物的化学结构数据进行储存。

1.2 共价对接虚拟筛选

共价对接数据库是Nir London等学者研发所得，为高通量的共价虚拟在线服务数据库，其目的在于发现不同靶向蛋白的活性亲核基因可逆共价小分子，比如MSK1、JAK2激酶中Cys等。共价对接数据库库中存在65000个亲电化合物，主要是合成化合物组成的母核数据库，如醛类、醛铜类、硼酸类等。对于不同配体，其共价化合物、质子化态、立体异构体等均为使用计算方法或者然健方法准备好，以便研究者快速对接亲核活性基团。对于配体而言，其目的在于发现与靶点亲核残基共价可结合的小分子化合物。共价对接虚拟筛选首先分析与模拟配对可能构象。对接过程中，存在于小分子化合物中的亲电部分为固定的，使用程序设定亲电集团、亲核原子，形成虚拟键。

2 皮肤损伤治疗分析

皮肤为生理性屏障，具有面授病原体、化学性刺激、物理性刺激损伤预防作用，其中紫外线为危害性最强的环境刺激，而UV辐射引发皮肤急性炎症反应，例如晒斑、红斑、皮肤癌等。UV辐射中，VB的细胞毒性与诱变效应最强。DNA可对入射光子直接吸收，进而引发DNA损伤，尤其是6-4刚产物与环丁烷嘧啶二聚体，极易诱发皮肤细胞的DNA突变，进而产生皮肤癌。紫外辐射也可诱发皮肤的氧化应激反应，促使皮肤细胞活性自由基水平增加，活性自由基将细胞表面有关受体激活，使得UVR有关信号通路启动，并将特定转录因子激活，对靶蛋白基因表达进行调节，最终引发真皮层、胶质层细胞的蛋白、细胞脂质、核酸损伤，以及癌变与光老化。

大量具有UV保护作用的抗氧化剂的研究中，例如维生素E、维生素C、阿魏酸等均存在UV保护作用。有研究指出，UV与NRF2引发的皮肤氧化应激中，存在重要作用。以NRF2细胞防御机制为基础，对皮肤进行保护，预防UV损伤的研究较多，其中姜黄素、槲皮素、白藜芦醇、EGGG等天然氧化剂为当前最终的一项NRF2氧化剂。研究指出，以上激活剂均具有UV保护作用。其中，NRF2激活剂将NRF2信号通路激活，使得细胞核中有NR进入，使得去毒酶与抗氧化酶等多种细胞保护基因表达被激动，产生饥饿昂ROS。还有眼睛指出，NRF2被激活以后，且在细胞核中进入达8小时，便存在XRO1核输出蛋白作用下，输出核，因此，使用XPO1小分子抑制剂，介导NRF2核输出被视为UV引发氧化应激损伤的治疗手段之一。

3 总 结

以XPO1介导的炎症相关蛋白如IKB、N也等的核输出机制，用第二章通过计算机模拟筛选得到的xPol小分子共价抑制剂CAPE和PEITc，以uV照射引起的红斑定性半定量地分析uV照射引起的皮肤损伤程度，建立UVB照射引起的皮肤损伤动物模型，来验证xP01小分子共价抑制剂cAPE和PEITc保护皮肤免受紫外损伤的作用。通过虚拟筛选结果得到CAPE能够与XP01发生弱的共价相互作用，动物模型实验结果可以得到CAPE具有一定的UV保护作用。