宫颈上皮内瘤变Ⅲ级与宫颈癌患者及其配偶人乳头状瘤病毒16型和18型感染情况▲

许娟秀 吴海根

(江西省妇幼保健院肿瘤科，南昌市 330006，电子邮箱：juanxiu_xjx@163.com)

宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)，或称为宫颈非典型增生，其特征是子宫颈表面细胞的异常生长并具有癌前转化的潜力，可致宫颈癌[1-2]，其最常发生于宫颈鳞状柱状细胞交界处[3]。人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与CIN发生有关，HPV感染是宫颈恶性肿瘤的重要致病因素[4]。研究发现，HPV16型或HPV18型感染引起CIN的快速进展[5]，如果不及时治疗有小部分患者会发展为宫颈癌[6]。

目前，我国宫颈癌的发生率已上升为世界第二位[7]。HPV感染是宫颈恶性肿瘤的重要致病因素，预防HPV感染具有重要意义。研究表明，有99.7%的宫颈癌组织存在HPV DNA，而且HPV16型、18型是引起宫颈癌最常见的高危类型[8]。有研究证实，男性阴茎感染HPV可增加配偶患宫颈癌的概率[9-10]。因此，男性HPV感染在宫颈癌发生和发展中的作用不可忽视。本研究通过分析CINⅢ级和宫颈癌患者及其配偶HPV16、HPV18型的感染特点，以期为宫颈癌的预防及男性HPV疫苗接种提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入2017年1月至2018年1月于江西省妇幼保健院肿瘤科确诊的CINⅢ级或宫颈癌患者及其配偶各100例。纳入标准：(1)CIN组：CINⅢ级患者均为行宫颈锥切术或宫颈电热圈环切术后患者，并经病理检查证实为CINⅢ级。(2)宫颈癌组：宫颈癌患者为宫颈活检或宫颈癌术后经病理检查证实。排除标准：婚前有初次性生活，夫妻二人的性伴侣数>1个；离异、丈夫死亡或丈夫外出且近1年无性生活史。CINⅢ级患者59例，宫颈癌患者41例，年龄(34.1±5.9)岁；男性配偶100例，年龄(37.2±8.2)岁。本研究经江西省妇幼保健院医学伦理委员会批准，所有研究对象均知情同意。

1.2 主要试剂和仪器 病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司，批号：20160083]；HPV16型、HPV18型核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法，北京华大吉比爱生物技术有限公司，批号：20133400984、20173401097)；CFX96荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)。

1.3 样本采集与保存 (1)采集CINⅢ级或宫颈癌患者的宫颈脱落细胞。检查前3 d禁止阴道冲洗及使用阴道内药物，检查前1 d禁止同房，避免在月经期检查。由妇科医生采用专用采样刷置于宫颈口及宫颈管内均匀用力旋转5圈，采样后将采样刷放入专用细胞保存液的取样管中，-20℃保存，在1～2周内检测HPV16型、HPV18型 DNA。(2)采集患者配偶的尿道口脱落细胞样本。检查前1 d禁止同房及前列腺按摩，由泌尿外科医生采用专用采样刷进行采样，将采样刷置入尿道口均匀用力旋转5圈，采样后将采样刷放入专用细胞保存液的取样管中，-20℃保存，在1～2周内检测HPV16型、HPV18型DNA。

1.4 HPV DNA提取 取细胞保存液0.5 mL，12 000 r/min离心1 min，保留沉淀；使用病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取DNA，操作过程严格参照试剂盒说明书。测定光密度值(optical density,OD)确定DNA的质量，当OD260/OD280为1.8～2.0时，表示DNA质量满足检测要求。

1.5 PCR扩增 将上述提取的DNA作为模板进行扩增；采用HPV16型、HPV18型核酸测定试剂盒进行，PCR反应体系为40 μL，包含PCR HPV16/18反应混合液35.6 μL、Taq酶0.4 μL、DNA样本4 μL。应用CFX96荧光定量PCR仪进行扩增反应，反应程序为94℃ 2 min、93℃ 10 s、62℃ 31 s，循环40次。通道设置为FAM和VIC。结果判读：FAM检测通道Ct值≤38，且扩增曲线呈典型的“S”形，则结果判断为HPV16型阳性，否则为阴性；VIC检测通道Ct值≤38，且扩增曲线呈典型的“S”形，则结果判断为HPV18型阳性，否则为阴性；如果FAM和VIC通道Ct值均≤38，且扩增曲线均呈“S”形，则结果判断为HPV16型和HPV18型双重感染阳性。统计夫妻感染情况时，HPV16型阳性指且夫妻双方同时HPV16型阳性但不包含双重感染，HPV18型阳性指夫妻双方同时检出HPV18型阳性但不包含双重感染，双重感染阳性指夫妻双方同时检出双重感染阳性，共同感染指夫妻双方同时感染同一亚型HPV。

1.6 统计学分析 采用EpiData 3.1软件进行双人双录入相关资料，经过一致性检验后导出为SPSS数据文件。采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计数资料以例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HPV16型、HPV18型感染的总体分布情况 200例样本中，检出HPV阳性123例，其中HPV16型阳性91例，HPV18型阳性59例，双重感染阳性27例，HPV16型阳性率高于HPV18型阳性率(χ2=10.923，P=0.001)。100例男性配偶中，HPV阳性56例(56.0%)，其中HPV16型阳性41例(41.0%)，HPV18型阳性20例(20.0%)；100例女性患者中，HPV阳性67例(67.0%)，其中HPV16型阳性50例(50.0%)，HPV18型阳性39例(39.0%)。见表1。

宫颈癌组女性HPV16型和HPV18型阳性率均高于CIN组女性(χ2=9.301，P=0.002；χ2=21.061，P<0.001)。宫颈癌组配偶(男性)HPV16型阳性率高于CIN组配偶(男性)(χ2=11.461，P<0.001)，而两组男性HPV18型阳性率比较，差异无统计学意义(χ2=3.731，P=0.053)。见表1。

表1 宫颈癌或CINⅢ级患者及其配偶HPV16型、HPV18型感染的分布(n)

2.2 夫妻间HPV16型和HPV18型感染情况 100对夫妻中，HPV16型阳性36对(36.0%)，HPV18型阳性12对(12.0%)，双重感染阳性3对(3.0%)，HPV16型阳性率高于HPV18型阳性率(χ2=15.790，P<0.001)。41对宫颈癌组夫妻中，HPV16型阳性22对(53.7%)，HPV18型阳性10对(24.4%)，双重感染阳性2对(4.9%)；余7对夫妻中，3对仅女性感染，4对双方均未感染；共同感染率为82.9%(34/41)。59对CIN组夫妻中，HPV16型阳性14对(23.7%)，HPV18型阳性2对(3.4%)，双重感染阳性1对(1.7%)；余42对夫妻中，13对仅女性感染，5对仅男性感染，24对双方均未感染；共同感染率为28.8%(17/59)。

宫颈癌组夫妻HPV16型、HPV18型阳性率和共同感染率均高于CIN组夫妻(χ2=9.405，P=0.002；χ2=10.103，P=0.002；χ2=28.345，P<0.001)；两组夫妻双重感染阳性率差异无统计学意义(χ2=0.104，P=0.748)。

3 讨 论

HPV的核酸是环状DNA，人类是其唯一宿主，其主要感染人体特异部位皮肤黏膜的鳞状上皮，因此HPV感染有较高特异性。CIN是一种典型的宫颈癌前病变。目前已确认高危型HPV的持续感染是导致CIN进展的重要原因[11]，控制HPV的感染是预防CIN的关键途径。研究发现，HPV可以通过性生活在夫妻间传播，宫颈癌患者的配偶感染HPV的危险性更大[10]；而男性阴茎感染HPV，又可明显增加配偶罹患宫颈癌的危险性[12]，因此男性在妇女宫颈癌发生和发展中的作用不可忽视。

本研究探讨CINⅢ级和宫颈癌患者及其配偶高危型HPV(16型和18型)的感染情况。结果显示，200例样本中，总体上HPV16型阳性率高于HPV18型阳性率，其中宫颈癌组女性HPV16型和HPV18型阳性率均高于CIN组女性，宫颈癌组男性HPV16型阳性率高于CIN组男性(均P<0.05)，表明在CINⅢ级和宫颈癌患者及其配偶中以HPV16型感染为主，且宫颈癌组患者及其配偶的HPV16型阳性率更高；在100对夫妻中，总体上HPV16型阳性率高于HPV18型阳性率，其中宫颈癌夫妻的HPV16型阳性率、HPV18型阳性率及共同感染率均高于CIN夫妻(均P<0.05)，表明夫妻间仍以HPV16型感染为主，且宫颈癌夫妻HPV16型的阳性率也更高。上述研究结果的原因可能与宫颈癌是由CIN进展而来，而CIN是因感染HPV有关。但本研究未发现宫颈癌夫妻与CIN夫妻的双重感染阳性率存在差异，可能与本研究样本量较小有关，未来需要扩充样本量进一步研究。刘学伟等[13]对120例高危型HPV阳性女性患者及其配偶进行病毒检测，发现19对共同感染夫妻对中HPV16型和HPV18型的阳性率分别为57.9%、15.8%；吕金明等[14]对100例高危型HPV阳性女性患者及其配偶进行病毒检测，发现20对共同感染的夫妻中HPV16型和HPV18型的阳性率分别为45.0%、0%；但本研究中，共同感染夫妻对的HPV16型和HPV18型阳性率分别为76.5%(39/51)和29.4%(15/51)，均高于上述研究。研究间的结果差异或与研究对象不同有关，但这表明CINⅢ级及宫颈癌女性患者与其配偶感染同型HPV的机会更高。结合本研究结果，我们可以推测，与HPV18型相比HPV16型的致病力更强，由HPV16型感染引起的CIN或许更易向宫颈癌发展。本研究结果表明，CINⅢ级及宫颈癌患者与其配偶感染同型HPV的机会更高，而在两性关系中，男性在性行为方面通常更主动，再加上HPV可通过性行为在两性间传播，因而在防治HPV感染方面，不能仅关注女性HPV感染情况，同时也要检测男性配偶的HPV感染情况，这样才能减少HPV在两性间的传播，从源头上降低宫颈癌的发病率。

综上所述，CINⅢ级和宫颈癌患者及其配偶以HPV16型感染为主，且宫颈癌患者及其配偶的HPV16型阳性率均高于CIN者，提示由HPV16型感染引起的CIN或许更易向宫颈癌发展，男性配偶在宫颈癌防治中有重要作用。