结直肠癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达水平及其与淋巴转移的相关性

钟璧璟，雷芹

安康市中医医院病理科，陕西 安康 725000

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，近年来的发病率一直呈上升的趋势[1]。在我国，结直肠癌发病率显著上升，死亡率也很高，其中城市发病率高于农村，导致该病的因素很多，如有家族史、患有肠炎或者肠道腺瘤等[2]。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四项肿瘤标志物是该病相关的错配修复蛋白，其如果发生突变会使得发生结直肠癌的概率大大增加[3]。如果结直肠癌筛查中及早发现，可以起到预防作用，有报道称，检测以上四项肿瘤标志物能够为治疗和预后提供指导[4]。淋巴转移是结直肠癌主要的转移方式，是否转移决定手术操作和术后生存情况[5]。本文旨在研究结直肠癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四项错配修复蛋白表达水平、病理特点及其与淋巴转移的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018年1月至2019年3月在安康市中医医院接受治疗的结直肠癌患者105例作为研究对象。其中男性65例，女性40例；年龄30~85岁，平均(62.35±6.54)岁；病变位于左半结肠35例，有半结肠30例，直肠40例。本研究经医院伦理委员会批准，患者及其家属均签署知情同意书。

1.2 观察指标与检测方法 所有患者均通经过两名病理医师诊断，收集所有患者的病理标本，采用4%福尔马林固定，之后进行石蜡包埋和HE染色。石蜡切片为3~4μm，烤切片后脱蜡、水化后用PBS进行冲洗，利用过氧化物酶阻断剂封闭内源性过氧化酶的活性，加入一抗。在室温孵育后加生物素标记的二抗，再加链霉素抗生物素的过氧化酶溶液，进行孵育后向其中滴加DAB显色，采用苏木素再复染，最后常规脱水，透明和封片。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2抗体均购自于福州迈新生物技术开发有限公司。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的阳性染色均定位于细胞核中，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。采用免疫组化法检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达水平。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件进行数据分析，计数资料两两比较采用χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌患者组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表达和缺失情况 105例结直肠癌患者中四项肿瘤标志物表达缺失者21例，总缺失率为20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失者分别为5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，见图1。

2.2 结直肠癌患者组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表达与病理的关系 结直肠癌患者中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表达缺失与年龄、性别和肿瘤大小无关(P>0.05)；与肿瘤部位相关，右半结肠蛋白表达缺失明显高于左半结肠和直肠，差异有统计学意义(P<0.05)。MSH2的表达缺失与发病位置和侵袭程度无关(P>0.05)；MSH6的表达缺失与侵袭程度和淋巴转移无关(P>0.05)；PMS2的表达缺失与侵袭程度无关(P>0.05)，见表1。

图1 结直肠癌患者组织中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四项肿瘤标志物表达情况(×10)

表2 结直肠癌患者组织中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表达与病理特点的关系

3 讨论

结直肠癌由多种生活因素、遗传和疾病共同所致[6]。生活因素主要包括肥胖、高脂肪、高蛋白和低纤维的饮食习惯等，肉类食物的增加与结直肠癌的发生有明显相关性[7]。临床研究显示，基因突变会导致家族性腺瘤性息肉病和遗传性非息肉性结肠癌，其中遗传性非息肉性结肠癌是由错配修复蛋白(MLH1、MSH2、MSH6、PMS2)突变造成，腺瘤越大，癌变的可能性也越大[8-9]。多位学者研究发现，通过早期筛查错配修复蛋白，评估患者的病情状况，能降低癌变的发生[10]。结直肠癌的主要治疗方式是放化疗和手术治疗，而淋巴转移影响治疗的效果，也影响患者的恢复[11]。因此，探讨影响淋巴转移的因素可以用来指导临床治疗，从而提高生存率。

本研究中，105例结直肠癌患者中四项肿瘤标志物表达缺失者21例，总缺失率为20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表达缺失者分别为5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，这些与彭芳等[12]研究结果一致。错配修复蛋白是机体内的安全保证，其能够维持遗传物质的完整性和稳定性，在DNA修复过程中会涉及很多分子和酶[13]。MLH1与MSH2是其中最主要的参与者，这两种蛋白一般会与其同源性的错配修复蛋白组成二聚体来发挥作用，MLH1和PMS2，MSH2和MSH6分别形成两种功能性的二聚体复合物[14-15]。MLH1和MSH2两种蛋白是二聚体中的主导蛋白，而PMS2和MSH6是两种配对蛋白，MLH1和MSH2发生突变会降解二聚体蛋白，导致主导蛋白和配对蛋白的表达缺失[16]。如果MLH1蛋白表达缺失，PMS2蛋白就会发生表达缺失，如果MSH2蛋白表达缺失，MSH6就会同时发生表达缺失[17]。采用免疫组化的法检测以上四种蛋白，能够为检测基因和诊断疾病提供指导[18]。

本研究结果显示，MLH1表达缺失与发病位置、侵袭程度和淋巴转移显著相关，左右半结肠明显高于直肠，侵袭浆膜外的明显高于黏膜和肌层，MSH2表达缺失与淋巴转移相关，MSH6的表达缺失与发病位置相关，左右半结肠明显高于直肠，PMS2表达缺失与与发病位置和淋巴转移明显相关，左右半结肠明显高于直肠，表明蛋白表达缺失在左右半结肠和直肠处的发生存在差异，其与侵袭程度和淋巴转移有一定关系。蛋白表达缺失者淋巴转移少，以上表明蛋白表达缺失的结直肠癌手术后的预后要优于蛋白表达的结直肠癌手术[19]。

综上所述，检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四种肿瘤标志物蛋白表达情况能够判断缺失类型，蛋白表达情况和病理特点与淋巴转移明显相关，错配修复蛋白检测判断疾病病情、治疗和预后有很重要的价值。