养肝茶抗氧化能力测定

冯娟

摘  要：为研究养肝茶抗氧化作用，采用NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法测定了4种市售养肝茶的总黄酮含量，并以（DPPH）、铁离子还原能力2种体外抗氧化活性方法测定了市售4种养肝茶的抗氧化活性。结果表明，1#某黄罐养肝茶总黄酮含量最高，达到44.4 mL到100mL，其对DPPH自由基清除能力和铁离子还原能力也最强，通过总黄酮含量与抗氧化活性比较发现，其抗氧化活性与总黄酮含量成良好的线性正相关。养肝茶抗氧化活性强表明其具有较好的预防上火的作用，总黄酮含量可作为养肝茶预防上火作用的评价指标。

关键词：养肝茶;总黄酮;抗氧化能力;还原能力

1引言

目前市场养肝茶品种很多，但对其抗氧化活性研究较少，特别是对目前市场占有率较大的罐装养肝茶抗氧化活性研究未见有报道。本文通过DPPH法、铁离子还原能力法对市场4个品牌罐装养肝茶抗氧化活性进行研究，从而对养肝茶预防上火作用预测提供依据，同时为养肝茶产品的开发提供依据。

2实验研究

2.1材料与方法

2.1.1材料与试剂

某黄罐养肝茶、某金罐养肝茶、某红罐养肝茶、某大罐养肝茶：市售。

三氯乙酸、三氯化铁、铁氰化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇、甲醇：天津市宁平化学制品有限公司

DPPH：美国Sigma公司;

蘆丁、Vc：中国食品药品检定研究院。

2.1.2仪器与设备

Lambda 35紫外可见分光光度计：PerkinElmer公司。

2.1.3方法

总黄酮含量测定黄酮类化合物检测方法：

参照《中国药典》2015版中总黄酮测定及张雪等方法，通过方法学验证，确定如下NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法测定养肝茶中总黄酮含量方法。

2.2清除DPPH自由基能力的测定

参照KUMARAN等方法，经过预实验，分别取0.5，1，2，3，4，5 mL养肝茶样品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀备用。取上述配好样品0.5 mL及1 x 10 mol/L DPPH溶液3.5 mL加人同一具塞试管中摇匀，在室温下密闭静置30min，用纯溶剂作参比，用分光光度计测定其在517 nm波长处的吸光度。

2.3还原能力测定

参照吕树祥等方法，经过预实验，分别取1，2，3，4，5，6 mL养肝茶样品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀备用。在2.5 mL pH6.6的磷酸盐缓冲液中加人上述稀释后的不同浓度养肝茶溶液2.5 mL，1 g/100 mL的铁氰化钾溶液2.5 mL，混合物在50℃恒温20 min后，再加人2.5 mL 10 g/100 mL的三氯乙酸溶液，然后以3000 r/min离心分离10 min，取上层清液5 mL加蒸馏水5 mL和0.1 g/100 mL FeCl3溶液1 mL，在波长700 nm处测定吸光度，吸光度越高，还原能力越强。

2.4统计学分析

采用SAS8.0统计软件对数据进行统计学分析，每组实验中每种养肝茶样品平行测定3次，采用单因素方差分析不同组之间数据差异性（P<0.05）。

3结果与分析

3.1养肝茶总黄酮含量测定

以吸光度为横坐标、芦丁质量浓度（mg/mL）为纵坐标，得回归方程：y=1.9961x-0.0026（R20.9999）。样品中总黄酮的含量在标准曲线中查出相应的值，某黄罐养肝茶、某金罐养肝茶、某红罐养肝茶、某大罐养肝茶的总黄酮含量分别为44.4mg/mL、32.2mg/mL、28.8mg/mL、20.0mg/mL。4种市售养肝茶总黄酮含量大小依次为：某黄罐养肝茶>某金罐养肝茶>某红罐凉茶>某大罐养肝茶。通过方差分析，1#黄罐养肝茶总黄酮含量远高于其他品牌养肝茶中总黄酮含量，且差异显著著（（P<0.01）。1#某黄罐养肝茶较其他3个品牌养肝茶中本草植物种类多为罗汉果、桑叶、淡竹叶。总黄酮含量差异表明了1#黄罐养肝茶用料量大或者黄酮含量多的植物投料量多。

3.2养肝茶清除DPPH自由基能力

分别配制不同浓度养肝茶样品，并测定其对清除DPPH自由基清除率，其结果如表2所示。根据每种养肝茶不同浓度对DPPH自由基清除率，绘制每种养肝茶清除DPPH自由基能力曲线图。

由图2可知，同一养肝茶样品随着反应体系中养肝茶量增大，其清除DPPH自由基能力逐渐增大，并且4种养肝茶在（0.01-0.1）mL范围内，其线性关系良好。由不同量养肝茶清除DPPH自由基能力可知，1#某黄罐养肝茶清除DPPH自由基能力最强，其次为某金罐养肝茶、红罐养肝茶，而某大罐养肝茶清除DPPH自由基能力最差。4种养肝茶清除DPPH自由基IC50分别为0.068，0.097，0.098，0.123 mL，其中1#某黄罐养肝茶与其他养肝茶IC50差异极，R著（P<0.01）。配制不同浓度Vc作为对照物，以Vc质量浓度（mg/mL）为横坐标、清除率为纵坐标，得回归方程：y1784x-4.771（R20.9998）。

3.3养肝茶还原能力测定

通过还原力测定可以检测样品是否为良好的电子供体。具有还原能力的物质能够还原脂质过氧化过程中产生的中间体，从而表现其抗氧化作用。

由图3可知，同一养肝茶样品，随着反应体系中样品量增大，其吸光度值越大，即还原能力越强，且在（0.1-0.6）mL线性范围内，吸光度值与反应体系中样品量线性关系良好;且不同凉茶，按照同一样品量下，其吸光度值大小从大到小依次为同仁堂养肝茶>某金罐养肝茶>某红罐养肝茶>某大罐养肝茶。对照样品Vc浓度与吸光度关系线性方程为：y=25.1024x+0.0792（R20.9996），根据线性方程计算不同养肝茶在反应体系中0.5 mL样品相对于Vc的量。

3.4养肝茶总黄酮含量与其抗氧化能力分析

为比较养肝茶总黄酮含量与其抗氧化关系，以不同养肝茶总黄酮含量为横坐标，分别以不同养肝茶清除DPPH自由基IC50倒数及不同品牌养肝茶0.5 mL还原能力相当于Vc的量为纵坐标，分析其总黄酮含量与其抗氧化能力关系。其中IC50倒数值越大，其抗氧化活性越强;且养肝茶还原能力相当于Vc量值越大，其还原能力越强，抗氧化活性越强。其总黄酮含量与抗氧化能力关系见图4。

由图4可知，养肝茶清除DPPH自由基能力及还原能力与总黄酮含量呈线性关系，且线性关系良好。因此养肝茶抗氧化活性与总黄酮含量呈良好的线性关系。总黄酮含量可作为判断养肝茶抗氧化活性的指标，同时可以作为养肝茶预防上火作用的指标。

4结论与讨论

通过研究表明，4个品牌罐装养肝茶总黄酮含量差异较大，其抗氧化活性差异也较大，因此其预防上火作用也存在差异。1#某黄罐养肝茶总黄酮含量及抗氧化能力远高于其他品牌养肝茶，分析其原因是其养肝茶中本草原料与其他3个品牌不同，同时也可能其添加本草原料高。而其他3个品牌养肝茶本草原料配方相同，但4#某大罐养肝茶远低于2#，3#养肝茶，其原因可能是原料投料量不同或提取方法不同导致。目前养肝茶品种较多，但市场混乱，因此即将实现的《植物饮料养肝茶》行业标准将总黄酮含量作为其主要控制指标，此项标准实施将规范养肝茶产业发展，提升养肝茶产品品质。

参考文献

[1]  田平平，李仁宙，简永健，李健明，王杰.连翘茶的强抗氧化活性成分及其抗氧化稳定性[J].中国农业科学，2016，03：543-553.

[2]  郑淋.抗氧化肽的构效关系及定向制备的研究[D].华南理工大学，2015.