重庆地区表观健康成年人血清睾酮参考区间的建立

2020-02-14田思思雷国勤巫志宇

国际检验医学杂志 2020年3期

田思思，罗杰，廖玲，雷国勤，巫志宇△

(1.陆军军医大学大坪医院检验科，重庆 400042;2.中国人民解放军陆军第954医院检验病理科，西藏拉萨 856000)

睾酮又称为睾丸素，是一种由19个碳原子构成的甾体类激素[1]，作为一种雄激素在机体内发挥重要的生理作用，如维持生殖功能及第二性征、增强肌肉强度与质量、维持骨密度等[2]。相关研究表明，血清睾酮水平测定有助于性腺功能减退、多囊卵巢综合征、男性雄激素缺乏、性早熟或延迟等疾病的诊断和治疗[3-6]，亦有文献描述了血清睾酮与骨质疏松症、糖尿病、心血管疾病、前列腺癌、非酒精性脂肪肝、阿尔茨海默病等疾病相关[7-12]。建立血清睾酮的参考区间对临床实践应用具有重要意义。目前，临床实验室一般套用试剂或仪器厂家提供的国外参考区间，由于种族、地域、性别、年龄等因素的差异，国外参考区间无法成为通用标准。根据美国临床和实验室标准协会C28-A3文件相关要求，本研究通过检测重庆地区表观健康成年人的血清睾酮水平，确立了适用于本地区血清睾酮的参考区间。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2019年1-4月在陆军军医大学大坪医院体检健康成年人630例，所有研究对象均签署《知情同意书》，其中男性315例，女性315例，平均年龄50岁(范围20～85岁)。将所有对象按性别分组，再根据年龄划分为2个亚组：20～<50岁组(男158例，女156例)、≥50岁组(男157例，女159例)。纳入标准：(1)年龄≥20岁，无高血压、糖尿病、冠心病、肿瘤、多囊卵巢综合征、月经不调、骨质疏松症等相关疾病史及症状；(2)体检结果正常，包括血清学检查肝功、肾功、乙肝、血糖、血脂、肿瘤标志物等均正常，血常规、尿常规均正常。排除标准：(1)排除近期大量饮酒、手术、输血、用药、妊娠、哺乳期者；(2)排除溶血、脂血、信息不全等质量不合格标本。

1.2仪器与试剂全自动免疫分析系统购自美国贝克曼公司，型号为UniCel DxI 800；睾酮测定试剂盒购自中国上海酶联生物公司，批号831937；免疫分析质控品购自美国Bio-Rad公司，批号40340。所有操作均按照标准操作流程进行，实验室每天均进行室内质控监测，在控后方进行相关检测，实验室参加的卫生部临检中心的内分泌室间质评(含睾酮等项目)结果实验室能力验证成绩100%通过。

1.3方法

1.3.1标本采集与保存所有受试者晨起空腹采血，一次性真空血清管采集静脉血5 mL，2 h内室温下3 500 r/min离心10 min并分离血清，保存在有编号的小型离心管中，-70 ℃条件下冷冻保存，冷冻保存样本最多保存3个月。

1.3.2剔除离群值应用Dixon法剔除离群值，将每组数据由小到大排序后，将疑似离群值与相邻值的绝对差值(D)和极大值与极小值的差值(R)相除，若D/R≥1/3则剔除，反之保留。

2 结果

2.1数据分布在630例样本中，剔除溶血19例，脂血7例。用Dixon法在>49岁的女性组中发现2个离群值，其中一个离群值(1.7 ng/mL)与相邻值的D为0.94，R为1.74，D/R=0.54>1/3，同理，另一个离群值(1.84 ng/mL)的D/R=0.62>1/3。故最终有602例纳入本研究，整体血清睾酮测定结果呈非正态分布(P<0.05)。按性别分组，男性血清睾酮测定结果呈正态分布(P=0.17)，女性血清睾酮测定结果呈非正态分布(P<0.05)。

2.2不同性别及年龄组血清睾酮水平男性血清睾酮水平明显高于女性组，差异有统计学意义(t=57.47，P<0.05)。男性20～<50岁组与男性≥50岁组之间的睾酮水平差异无统计学意义(t=1.905，P>0.05)，可合并为一组；而女性两个年龄亚组之间差异有统计学意义(t=11.7，P<0.05)，20～<50岁组的睾酮水平明显高于≥50岁组。见表1、2。

表1 不同性别血清睾酮测定结果比较

注：与男性比较，*P<0.05；-表示此项无数据。

表2 各年龄亚组血清睾酮测定结果比较

注：与女性组20～<50岁比较，*P<0.05。

2.3血清睾酮水平参考区间建立建立了表观健康成年人血清睾酮的95%参考区间：男性为2.28～7.50 ng/mL，女性20～<50岁为0.10～1.03 ng/mL，女性≥50岁为0.10～0.70 ng/mL。见表3。

2.4进一步年龄分组比较血清睾酮测定结果将血清睾酮测定结果的年龄分组进一步细化，每隔10岁为一个小组(≥70岁为一组)，可细分为6个小组，再对同性别的6个小组进行组间比较。可以发现男性6个年龄组间差异无统计学意义(P=0.056 1)，女性6个年龄组间差异有统计学意义(P<0.05)。20～<30岁组的血清睾酮水平达到最高峰，其明显高于40～<50岁、50～<60岁、60～<70岁、≥70岁等4个年龄组，并随着年龄的增长逐渐降低而后趋于平稳，在≥50岁以后的3个年龄组间血清睾酮的差异无统计学意义(P>0.05)。而男性血清睾酮水平随年龄增长变化不大。见表4、图1。

表3 表观健康成年人血清睾酮参考区间

注：A表示女性血清睾酮水平随着年龄增长的变化趋势；B表示男性血清睾酮水平随着年龄增长的变化趋势。

图1不同性别的血清睾酮水平随着年龄增长的变化趋势

表4 以10岁为间隔划分年龄组比较血清睾酮水平

续表4 以10岁为间隔划分年龄组比较血清睾酮水平

注：与女性20～<30岁年龄组比较，*P<0.05；与女性30～<40岁年龄组比较，#P<0.0；与女性40～<50岁年龄组比较，△P<0.05。

2.5不同实验室的血清睾酮参考区比较不同实验室的血清睾酮参考区间存在较明显的差异，其中表现最为突出的是女性的参考区间。见表5。

表5 不同来源的血清睾酮参考区间的比较

注：-表示此项无数据。

3 讨论

睾酮是一种重要的雄激素，临床应用广泛，可用来协助诊断男性性腺机能减退及评估睾酮替换治疗的效果，还能用来评估女性多毛症、多囊卵巢综合征、更年期女性、性早熟与延迟等[13]。准确的睾酮水平测量对临床实践具有重要意义。

目前，放射免疫分析法和化学发光免疫法是临床总睾酮测量使用最广泛的检测方法，具有快速、操作简单、除干扰蛋白质、灵敏度高等优点[13]。不同方法学之间的结果无可比性，但即使是同一种方法学，由于来自不同厂家试剂的溯源性不同，制造商提供的参考区间也不尽相同，分析测量结果之间同样存在较大差异。此外，制造商建立参考区间时使用的参考样本群体往往是同他们产品市场的地理分布具有相似性，参考个体地域不同会导致分组不同，而且影响因素不仅有地域因素，还包括环境、饮食习惯和种族背景等因素。因此，每个实验室建立适用于自己的参考区间是十分必要的。

本研究表明，血清睾酮水平存在性别和年龄的差异，男性血清睾酮水平明显高于女性，约高10倍，且其睾酮水平与年龄没有显著相关性，本研究得出的男性参考区间与贝克曼库尔特公司提供的血清睾酮检测试剂说明书的参考区间差异不大，参考值下限在(2.28 ng/mL)稍高于说明书的参考值下限为(1.75 ng/mL)。女性血清睾酮水平随年龄增长而降低，50岁以上的血清睾酮水平显著低于50岁以下的女性，且通过组间比较可以得出，女性血清睾酮水平在20～<30岁年龄段时达到最高峰，在50岁后其水平趋于平稳。试剂说明书中没有考虑到年龄对女性血清睾酮的影响，本研究结果显示，在20～<50岁年龄段女性的睾酮参考值上限(1.03 ng/mL)显著高于说明书提供的参考值上限(0.75 ng/mL)。和本研究类似的是YU等[14]的研究，他们使用的检测仪器同本实验室使用的是同一品牌和型号，其研究对象来自中国5个城市的表观健康成年男性(多中心研究)，他们得出的参考区间与本研究差异不大。但遗憾的是，他们没有做女性参考区间的研究，故不能与之进行参考和比较。除此之外，KANNENBERG等[15]的研究中男性睾酮的参考值上限显著高于本研究的参考值上限，女性睾酮的参考值上限显著低于20～<50岁年龄段女性的睾酮参考值上限。BUI等[16]的研究中女性睾酮的参考值上限也显著低于本研究。除了地域和种族的影响，检测方法的不同也可能是造成参考区间差异的因素。KANNENBERG等[15]的研究中使用的是气相质谱法，BUI等[16]的研究使用的液相色谱串联质谱。据TAIEB等[17]报道，用免疫法测定的女性睾酮水平比液相色谱串联质谱测定的高，测定的男性睾酮水平比液相色谱串联质谱测定的低。

本研究的创新之处在于展示了血清睾酮水平存在性别和年龄的差异，尤其是女性人群需根据年龄分组采用不同的参考区间。参考区间的准确性、适用性直接影响着疾病的诊治效率，参考区间的不确定甚至会导致错误的医学判断或医学干预。本研究初步建立了重庆地区表观健康成年人血清睾酮水平参考区间，对于本实验室提高医疗质量，推进合理治疗，有效利用医疗卫生资源具有非常重要的意义。

但是，本研究仍存在一些局限，首先是本研究为单中心研究，可能存在研究人群的偏倚；其次，研究纳入的样本量稍显不足，不能满足用于年龄细化分组后建立每组参考区间所需的最小样本量，在后续的研究中可加大样本量作进一步分析。